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超临界流体萃取法——毛细管气相色谱法分析牡丹皮及制剂中丹皮酚的含量

来源:中国色谱网
摘要:超临界流体萃取法——毛细管气相色谱法分析牡丹皮及制剂中丹皮酚的含量第二军医大学长征医院药材科(上海200003)缪海均柳正良*李云华*邵元福*第二军医大学药学院摘要本文采用超临界流体萃取法(supercriticalfluidextraction,SFE)提取中药牡丹皮及其成方制剂中丹皮酚,以氯仿作改性剂,在温度90℃,压力4000psi下,二氧化碳......

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超临界流体萃取法——毛细管气相色谱法分析牡丹皮制剂中丹皮酚的含量

第二军医大学长征医院药材科 (上海 200003) 缪海均 柳正良* 李云华* 邵元福

*第二军医大学药学

摘要 本文采用超临界流体萃取法(supercritical fluid extraction,SFE)提取中药牡丹皮及其成方制剂中丹皮酚,以氯仿作改性剂,在温度90℃,压力4000 psi下,二氧化碳动态萃取体积3 ml;静脉萃取时间5 min为最佳。该法简便快速,萃取完全。用大孔径毛细管柱气相色谱法作含量监测,结果:相关性好(r=0.9999),中药与制剂的回收率分别为97.8%,RSD=2.35%(n=3);100.3%,RSD=1.89%(n=3)。结果准确,灵敏,分辨率好。为中药有效成分的提取和质量控制提供了一种有效可靠的方法

关键词 超临界流体萃取法; 牡丹皮; 丹皮酚; 毛细管柱气相色谱法

中药的成分极其复杂,在定量分析中,样品的提取是非常关键的,超临界流体萃取是近代分离域中出现的先进的样品制备技术,将传统的蒸馏和有机溶剂萃取结合在一起,利用超临界流体的优良溶解能力,达到分离、纯化的目的。丹皮酚(paeonol)是毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr)的主要挥发性有效成分,具有祛风镇痛、降压、止血、抗炎症抗菌抑制血小板凝集等多种药理作用 [1] 。本文用超临界二氧化碳流体对牡丹皮及其成方制剂中丹皮酚的萃取条件进行了系统的研究,筛选出压力、温度、CO 2动态萃取量、静态萃取时间和改性剂加入量等五个变量的最佳条件,用大孔径毛细管柱气相色谱测定了丹皮酚的含量,其结果准确、灵敏,分辨率好。

1 实验部分

仪器、试剂和药品 仪器:100DX、100DM注射泵,SFX210超临界萃取器(美国ISCO公司),HP5890series II气相色谱仪(美国HP公司),NEC Pewermate 325(日本)。

试剂:二氧化碳(99%)(上海酒精总厂),其余试剂均为分析纯。

药品:丹皮酚标准品(中国药品生物制品检定所),药材及成方制剂购于长海医院。

2 色谱条件

交联石英毛细管柱(40 m×0.53 mm,自制),固定相:SE30。

气化室:240℃,检测室:280℃(FID),载气:N 2并加尾吹N 2。

柱温:100℃(4 min)以20℃/min升至210℃保持5 min。

3 超临界萃取条件的选择 [2,3]

3.1 改性剂的选择 超临界CO 2流体的极性与正已烷相似 [4] ,因此在萃取极性成分时,一般加入少量的极性溶剂,以提高萃取率。我们试验了氯仿和甲醇两种溶剂,当选择甲醇作改性剂时,除了药材中丹皮酚被萃取外,丹皮酚甙、丹皮原甙也被少量萃取,引起结果误差,因此本实验选择了氯仿作改性剂。

3.2 萃取压力的选择 超临界流体具有很大的可压性,一定温度下,压力增加,超临界流体的密度也增加,溶质在流体中的溶解度增大,萃取效率提高,固定其他参数,改变压力从3000~6000 psi,每隔1000 psi萃取一个点,其结果见图1(A)。

从图中看出:选择4000 psi作萃取压力。

3.3 温度的影响 恒压下,温度升高,流体的密度下降,但溶解度是溶质挥发度的函数,提高温度可指数级地提高溶质的蒸气压,从而增加溶质的溶解度,提高萃取效率,改变温度从50~100℃,每隔10℃萃取一个点,结果见图1(B)。从图中看出:选择90℃为萃取温度。

3.4 改性剂量的选择 加入一定量的极性改性剂,可以提高萃取量,但过高浓度的改性剂,要求高的临界压力和温度,因此改性剂的浓度要合适,既能达到萃取完全,又不致很高的萃取条件,我们试验了加入0.3,0.5,0.7 ml三个浓度,结果见图1(C)。由图中看出,选择加入0.5 ml氯仿,萃取效果较好。

3.5 动态萃取体积 固定压力、温度和改性剂量,改变萃取体积为1、2、3、5 ml,其萃取结果见图1(D)。

由图中看出,选择3 ml为动态萃取体积。

3.6 静态萃取时间 整个超临界流体萃取过程既包含转运,又存在扩散,保持一定的静态时间,可提高萃取效率,因此我们试验了分别保持3、5、7 min三种时间,结果见图1(E)。由图中看出,静态萃取时间为5分钟。

通过试验,确定了5个变量的最佳条件为:温度90℃;压力4000 psi;改性剂(氯仿)加入量0.5 ml;动态萃取体积3 ml;静态萃取时间5 min。

4 标准曲线的绘制

精密量取丹皮酚标准液(10.00 mg/ml)0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 ml,分别置于5 ml容量瓶中,各精密加入0.5 ml十六醇内标溶液(4.00 mg/ml),用氯仿加至刻度,混匀后进样测定,以丹皮酚与内标的峰面积比(Y)对进样浓度(X)进行回归,回归方程为:Y=1.8619X-0.1024(r=0.9999)

5 加样回收率试验

精密称取一定量药材粉末及制剂,精密加入一定量的丹皮酚标准液,按样品分析同样操作,进行回收率测定。药材回收率为97.8%,RSD=2.35%(n=3);制剂回收率为100.3%,RSD=1.89%(n=3)。

6 样品分析

精密称取一定量药材粉末及制剂,按上述最佳条件进行提取,然后精密加入1 ml内标溶液于吸收液中,氯仿定容至10 ml,直接进样分析,计算药材及成药中丹皮酚的含量,结果见表1。

表1 药材及制剂中的丹皮酚含量

Sample 
 Paeonol(%) 
 RSD(%) 
 
moudanpi 
 0.99 
 0.82 
 
liuweidihuangwan 
 0.21 
 1.70 
 
zhibaidihuangwan 
 0.15 
 2.31 
 
qijudihauangwan 
 0.19 
 4.56 
 
7 讨论

大孔径毛细管柱有较高的总柱效、理想的表面惰性、接近填充柱的负荷量、较长的柱寿命及较快的分析速度、并可用标准微升注射器作柱上进样或直接进样[5] 。本实验用SFE与大孔径毛细管气相色谱测定中药中丹皮酚的含量,峰形好、分离速度快,为该类药物的质量控制提供了一种可行的定量方法。

SFE是近几年发展起来的新技术。其提取具有一定的选择性,提取的杂质较少,并可直接进样分析,是传统的溶剂提取所无法比拟的。为有效成分的提取提供了一种有效可靠的方法。采用内标法定量,结果比较准确。
作者: 缪海均 柳正良* 李云华* 邵元福 2007-5-18
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