高效液相色谱法测定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄

［摘要］ 本文探讨高效液相色谱法测定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄含量的方法，豆制品中酸性金黄Ⅱ经粉碎，提取，过滤，得到的样品提取液用高效液相色谱测定，流动相是甲醇乙酸铵0.02 mol/L=75+25，在检测波长450 nm时，流速1.0 ml/min测定，色谱柱为SymmetryC18(250 mm×4.6 mmid，5 μm)。

［关键词］ 豆制品；酸性金黄Ⅱ；高效液相色谱

　　High Performance Liquid Chromatography Determinate of Acid Orange Ⅱ
 and Orarge Bin Bean Sample

　　Abstract:A sensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography determinate of Acid OrangeⅡand orange B in bean sample.Acid OrangeⅡand orange B were extract from bean sample with the HPLC method was used to analyze estradiel.The optimized detection parameters were as follows:the colum was Symmetry C18 (250 mm×4.6 mmid,5 μm),the mobile phase was methanolaninoacetate (0.02 mmol/ml)=75:25,The phase flow rate was 1.0 ml/min.The UV detector was set at 450 nm.

　　Key words:Bean product; Acidity gold; High performance liquid Chromatography

　　豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄是在医学中应用于组织染色，木制家具、毛线、布料等的着色剂，但不法商贩利用其颜色鲜艳、着色稳定、价廉的特点非法添加于豆制品中，严重危害了广大消费者的身体健康［1］，国家尚无相应的检验标准方法，本文初步建立了用高效液相色谱法测定酸性橙Ⅱ和酸性金黄的方法，该方法能快速、准确、简便的检出酸性橙Ⅱ和酸性金黄，能满足食品检验的需要。

　　1　试验部分

　　1.1　仪器和试剂

　　1.1.1　仪器　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　高效液相色谱仪包括Waters1525型泵，2487型紫外检测器，Breeze色谱工作站及手动进样器。

　　1.1.2　标准品　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　酸性橙Ⅱ(纯度86%)和酸性金黄(工业用纯度90%)。

　　1.1.3　甲醇　

　　色谱纯。

　　1.1.4　纯水　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　由AKUPⅡI20型纯水机提供的高纯水。

　　1.1.5　0.02 mol/L乙酸铵溶液，pH=4.7。

　　1.1.6　碱性提取液　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　无水乙醇∶氨水∶水=70∶20∶10。
　1.2　色谱条件　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　色谱柱为SymmetryC18(250 mm×4.6 mmid，5 μm)流动相甲醇：0.02 mol/L乙酸铵溶液=75+25，溶液流速1.0 ml/min，柱温为常温，检测波长450 nm，进样量20 μl。

　　1.3　标准品的制备　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　吸取混合标准储备液1.00 mg/ml适量，配成系列浓度为0，0.01 μg/ml，0.05 μg/ml，0.10 μg/ml，0.50 μg/ml，1.00 μg/ml的标准系列。

　　1.4　样品前处理　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　称取混匀粉碎的样品5.00 g~10.00 g于100 ml烧杯，加pH=6的水50 ml，混匀，过滤，滤液加入1.00 g聚酰胺粉用，G3漏斗抽滤，pH=6的水冲洗2次~3次，碱性提取液解吸2次~3次，每次5 ml，收集解吸液，水浴挥干，将残渣用蒸馏水溶解，定容至5 ml，然后过0.45 μm滤膜。标准和样品滤液注入HPLC系统，按上述色谱条件测定。以保留时间定性，峰面积定量。

　　2　结果

　　2.1　波长选定　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　用流动相稀释标准溶液，进行紫外扫描，由扫描图谱可知，酸性Ⅱ和酸性金黄在450 nm有较大吸收，所以我们选取450 nm为检测波长。

　　2.2　工作曲线与检测限　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　以工作液含量X对色谱峰面积Y进行线形回归，其结果表明，酸性橙Ⅱ和酸性金黄在0.11 μg/ml~1.00 μg/ml范围内线性关系(Linear range)良好。回归方程(Regression equation)，线性范围，相关系数(Correlation coefficient)及检测限(Detection limit)(S/N=3)见表1。表1标准曲线及检出限项目（略）

　　2.3　标准图谱及样品图谱如下(见图1和图2)。

　　2.4　方法精密度(n=6)　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　配制含酸性橙Ⅱ(纯度86%)和酸性金黄0.05 μg/ml的样品，注入HPLC系统按上述色谱条件六次测定(见表2)，结果表明，该方法有较好的精密度(RSD分别为2.06%，1.18%)。表2精密度测定次数（略）

　　3　讨论

　　本文对高效液相色谱法测定酸性橙Ⅱ和酸性金黄进行了初步探讨，认识还比较肤浅，此方法还有待进一步完善。

　　参考文献：

　　［1］陈文，王正猛，吴晓蓉，等.单扫描极谱法连续测定食品中非食用色素酸性金黄和酸性大红［J］.食品科学，2005，26(6)：210212.

　　［2］GB/T5009.352003.食品中合成着色剂的测定.