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【摘要】 为了建立反相高效液相色谱法测定注射用盐酸洛美沙星中盐酸洛美沙星含量的方法，采用phenomenex C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为0.025mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.5)-乙腈-(82：18)，柱温30℃，检测波长287nm，流速为1.0mL/min。盐酸洛美沙星及其有关物质可完全分离；进样20μL时，线性浓度范围为5～215μg/mL；最低检测限(LOD)为12ng/mL(S/N=3)，最低定量限(LOQ)为60ng/mL(S/N=10)；日内精密度(RSD)为0.85%(n=5)，日间精密度(RSD)为1.35%(n=5)。该方法简便、快速，专属性强，可用于对注射用盐酸洛美沙星的含量测定。
【关键词】 反相高效液相色谱法；洛美沙星；有关物质
注射用盐酸洛美沙星是第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药，临床用于治疗敏感细菌引起的呼吸道、泌尿生殖系统、胃肠道、皮肤软组织等感染，其半衰期长，疗效确切得到临床的广泛应用。其含量测定有紫外可见分光光度法［1］、HPLC法［2-4］等。紫外可见分光光度法专属性差，HPLC法有的主峰拖尾，有的各有关物质间分离差。本文建立的HPLC分析方法专属性强，主峰与相邻杂质达完全分离，各有关物质间分离符合药典要求，此法适用于注射用盐酸洛美沙星含量的测定。
1 仪器与试药
Agilent-1100型高效液相色谱仪：泵G 1311A，检测器 G 1314A，1100型色谱工作站。AE240电子天平，METTLER公司生产。
洛美沙星对照品(批号：0452-200001，含量：90.0%，中国药品生物制品检定所)。注射用盐酸洛美沙星样品：批号20040408-2，050609，050316(市售)。三乙胺、磷酸、盐酸均为分析纯；水为超纯水；乙腈为色谱纯。
2 实验方法与结果
2.1 检测波长的选择
取盐酸洛美沙星对照品适量，用流动相溶解定容的溶液在220～380nm的波长范围内扫描，在287nm波长处有最大吸收，选择287nm作为检测波长。
2.2 色谱条件
色谱柱：phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为0.025 mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.5)-乙腈-(82：18)，柱温30℃，检测波长287nm，流速为1.0mL/min，进样20μL。此色谱条件下洛美沙星峰的理论板数为6000，色谱图见图1。
2.3 专属性试验
2.3.1 60℃放置
取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约100μg/mL)于60℃恒温水浴6h，进样测定。
2.3.2 UV光照
取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约100μg/mL)于UV光照6h(溶液由无色变为棕黄色)，进样测定。
2.3.3 氧化破坏
取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加30%过氧化氢5滴，室温放置20min，用流动相定容，摇匀进样测定。
2.3.4 酸破坏
取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加1mol/L盐酸2 mL，室温放置40min，用流动相定容，摇匀进样测定。
2.3.5 碱破坏
取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加1mol/L氢氧化钠2 mL，室温放置40min，用流动相定容，摇匀进样测定。
2.3.6 混合溶液
照药典方法分别溶解稀释依诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星和环丙沙星各对照品，分别取上述各对照品溶液适量置于同一量瓶中，再加洛美沙星对照品溶液，用流动相定容，摇匀，制成含各对照品分别约50μg/mL的溶液，进样测定。
高温、光照、氧化、酸、碱加速降解和混合溶液色谱图(图2)显示各降解杂质和具有同一母核结构的各化合物均不干扰洛美沙星的测定。
2.4 线性关系考察
精密称取洛美沙星对照品适量，用流动相溶解定容制成约1mg/mL的对照品储备液，取此储备液适量用流动相分别稀释得到5.0、10、20、50、100、150、215μg/mL的7个不同浓度的溶液，进样测定峰面积。峰面积(A)与浓度(C)的线性回归方程为：A=119.25×C+242.42(r=0.9991，n=7)，表明在此浓度范围内洛美沙星与峰面积线性关系良好。在选定的色谱条件下，最低检测限(LOD)为12ng/mL(S/N=3)，最低定量限(LOQ)为60ng/mL(S/N=10)。
2.5 精密度试验
精密称取注射用盐酸洛美沙星样品数份，分别流动相溶解定容至约25μg/mL的溶液，分别进样测定，以峰面积/供试品浓度之比值表征精密度。日内精密度RSD为0.85%(n=5)，日间精密度RSD为1.35%(n=5)。
2.6 稳定性试验
室温条件下，25μg/mL的洛美沙星对照品溶液分别于0、4、8、14h分别进样3次，其峰面积的RSD为2.27%(n=12)，提示溶液在室温放置14h稳定。
2.7 样品测定
分别精密称取洛美沙星对照品、注射用盐酸洛美沙星样品适量用流动相溶解稀释制成各含约250μg/mL；精密量取5.0mL，置另一50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度(约25μg/mL)，进样测定。按外标法计算注射用盐酸洛美沙星的含量。表1 反相HPLC法测定注射用盐酸洛美沙星的含量(略)
3 讨论
洛美沙星对照品是其盐酸盐，文献［1-2］采用0.1mol/L盐酸溶液溶解稀释洛美沙星对照品，试验结果表明在pH＜2.5的流动相中或0.1mol/L盐酸溶液中洛美沙星对照品不易溶解或溶液浑浊，而在pH＞3.0的流动相中易溶且溶液澄清，专属性试验结果表明洛美沙星溶液在强酸性下不稳定，因此含量测定时洛美沙星对照品宜采用pH＞3.0的流动相溶解稀释。
流动相的选择，考察了流动相系统磷酸溶液(0.025mol/L、0.075mol/L、0.1mol/L)-乙腈和柠檬酸溶液-乙腈的不同比例及不同pH条件，试验结果表明磷酸溶液或柠檬酸溶液浓度增加，洛美沙星保留时间延长，其与相邻杂质间分离度变化不大。流动相pH增大，其保留时间延长，相邻杂质间分离度差。流动相中乙腈比例增大，洛美沙星保留时间明显缩短。同样条件下流动相系统磷酸溶液-乙腈分离效果稍好。综合考虑选择0.025 mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.5)-乙腈(82：18)作为测定用的流动相。
洛美沙星是两性化合物，在上述两种流动相系统中，与具有同一母核结构的其它氟喹诺酮类依诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、环丙沙星比较，洛美沙星保留时间最长，表明洛美沙星极性最小，在流动相中较不易离子化。
专属性试验结果显示，洛美沙星溶液在光照、氧化、碱破坏条件下主峰面积明显减小，酸破坏条件下主峰面积减小，高温下主峰面积稍有减小，表明洛美沙星溶液在光照、氧化、碱破坏条件下都极不稳定，易降解，酸破坏次之，高温下稍稳定些，因此含量测定时最好采用棕色瓶。混合溶液色谱图表明，此色谱条件可作为洛美沙星的鉴别色谱条件。
【参考文献】
［1］国家药品标准［S］. WS-117-(X-104)-2000(2).
［2］国家药品标准［S］. WS-360-(X-315)-99.
［3］Santoro MI，Kassab NM，Singh AK，et al .Quantitative determination of gatifloxacin，levofloxacin，lomefloxacin and pefloxacin fluoroquinolonic antibiotics in pharmaceutical preparations by high-performance liquid chromatography［J］. J Pharm Biomed Anal，2005，29(8)：1.
［4］蒋建兰，叶小珍，刘勇，等.盐酸洛美沙星注射液的制备条件对有关物质的影响［J］. 中国药师，2002，5(12)：736.