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【摘要】 目的：建立水杨酸软膏中水杨酸含量的可逆高效液相色谱法。方法：选择合适的溶剂，在229 nm波长处测定水杨酸软膏中水杨酸的含量。结果：在此方法下能排除敷料的干扰，测得水杨酸线形范围为0.5~2.5 mg/ml，回收率为99.08％。RSD为0.49％。结论：此法能简便、快速、准确地测定制剂中主要成分的含量，使用价值较高。
【关键词】 水杨酸软膏；水杨酸；可逆高效液相色谱法
水杨酸是皮肤科制剂中常用药物，具有杀菌抑菌、软化角质层的作用。水杨酸软膏以水杨酸为主成分，配以皮肤渗透剂月桂氮酮、甘油等药物。以卡波莫940为基质，制成涂展性好，渗透力强，不污染衣物，无油腻感的制剂，在临床上应用理想。但由于所采用的基质干扰，造成含量测定不易[1]，为此建立的高效液相色谱法能快速简便地测定制剂中的水杨酸含量，使用价值较高。
1 仪器与试剂
VARIN9012-9050高效液相色谱仪；紫外可见分光光度仪。水杨酸对照品(中国药品生物制品检定所)。5批水杨酸软膏，由南通大学附属医院提供。乙腈、甲醇(色谱纯)、重蒸水、醋酸铵、三乙胺、氯仿(分析纯)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：C18（150 mm×4．6 mm，5 μm）。流动相：乙腈-甲醇-2％醋酸铵（14∶43∶43）1000 ml加三乙胺0.2 ml。检测波长：229 nm流速：1.0 ml/min，柱温：30℃进样量：10 μ1。外标法峰面积定量，对照品A、样品B色谱图见图l。在该色谱条件下，水杨酸的保留时间为6.3 min，理论塔板数为4904。
2.2 线形关系 精密称取干燥至恒重的水杨酸对照品100 mg，分别置10 ml 量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)溶解并稀释至刻度，制成10 mg/ml的溶液。分别精密量取该溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml置10 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)稀释至刻度。在上述色谱条件下，分别精密进样10 μl，测定峰面积，对结果进行回归分析，(色谱图见图1)。结果表明：进样量在0.5~2.5 mg/ml峰面积和对照品的浓度线性关系良好，经统计学处理求得回归方程为：y=7x+778(n=5) r=0.9998。
2.3 精密度实验 取同一对照品溶液，1天内连续测定5次和每天取样测定连续测定5天，进行日内、日间精密度测定。结果水杨酸日内RSD为0.91％(n=5)，日间RSD为0.98％(n=5)。结果表明：精密度良好。
2.4 重复性试验 按对照品溶液配制方法平行配制5份溶液，每份连续进样5次，记录峰面积。测得水杨酸的RSD为0.24％。结果表明：重复性良好。
2.5 干扰性试验 按处方配制除水杨酸的空白基质200 mg，按照含量测定方法处理样品，进样10 μl，观察液相色谱图。结果表明空白基质在此方法下不干扰水杨酸的含量测定。
2.6 回收率试验 精密量取5份已知含量的样品分别加入对照品2、5、10 mg/ml，配制成高、中、低3种浓度，按照含量测定方法处理样品，进样10 μl，计算回收率，结果表明：回收良好，见表1。
2.7 样品含量测定 精密称取水杨酸软膏约200 mg（相当于水杨酸10 mg），置100 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)加热溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸过滤。弃去初滤液，精密量取续滤液5 ml，置100 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)稀释至刻度，用0.46 μm滤膜滤过即得样品溶液。取上述溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算百分标示含量。(见表2，色谱图见图1) 。
3 讨 论
溶剂的选择：水杨酸在有机相中溶解度大于在水中，故选择氯仿-甲醇(1∶1)为溶剂较为合适。检测波长的选择：水杨酸在该溶剂中最大波长为229 nm，229 nm为检测波长，误差较小，准确度高。流动相的选择：曾选择甲醇-水系统为流动相，但发现水杨酸有拖尾现象，最后采用醋酸盐-甲醇-乙腈系统为流动相，并用三乙胺改善拖尾现象。方法的选择：在本制剂中采用的基质卡波莫940分子中存在大量羧酸基团，因此无法用常规的碱滴定法测定水杨酸的含量，而相对于紫外分光光度法本法更加灵敏和准确，杂质对结果影响很小。本法简便快速，准确灵敏，实用价值较高。
【参考文献】
[1] 中华人民共和国卫生部药政局．中国医院制剂规范[S]．第2版．北京：中国医药科技出版社，1995：86-90.