ＨＰＬＣ法测定腰息痛胶囊中欧前胡素的含量

　　【摘要】目的测定腰息痛胶囊中欧前胡素的含量,为该制剂制定质量标准提供依据。方法采用HPLC法测定。结果欧前胡素在0．0492～0．2952μg之间呈线性关系,r=0．9999;平均回收率为97．057%,RSD=1．36%(n=6)。结论该方法简便准确,重现性好,可用于腰息痛胶囊的质量控制。

　　【关键词】腰息痛胶囊；HPLC；欧前胡素；含量测定

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　　【Abstract】ObjectiveTodeterminethecontentofimperatorininYaoxitongcapsuleandtoprovideevidenceforitsqualitycriteria.MethodsAHPLCmethodwasestablished.ResultsThelinearrangeofberberinehydrochloridewas0．0492～0．2952μg(r＝0．9999).Theaveragerecoveryratewas97.057%,RSD=1．36%(n=6).ConclusionThemethodissimple,acurate,repeatible,andcanbeusedforthequalitycontrolofYaoxitongcapsule.

　　【Keywords】Yaoxitongcapsule;HPLC;Imperatorinhydrochloride;Contentdetermination

　　腰息痛胶囊为白芷、草乌（制）、独活、续断、牛膝等22味中药及对乙酰氨基酚组成的中药化学药复方制剂，具有舒筋活络，袪淤止痛，活血驱风之功效，临床上用于治疗风湿性关节炎，肥大性腰椎炎，颈椎炎，坐骨神经痛，腰肌劳损等疾病[1]。原质量标准中只有对乙酰氨基酚的含量测定，缺少中药药味的含量限定。白芷为方中主药之一，欧前胡素是白芷的主要活性成分，故采用欧前胡素作为含量控制指标。

　　1 仪器与试药

　　LabAlliance高效液相色谱仪，SeriesⅢ泵，Model500紫外检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱(KromasilODSC18柱，瑞典诺贝尔公司)，4．6mm×250mm，5μm；UV-2100紫外分光光度计（日本岛津）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；B2200S-T超声提取器［必能信超声（上海）有限公司］，HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）。乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为重蒸水。欧前胡素对照品由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110826-200409；腰息痛胶囊为市售品，批号：070402，070601，070607，070614。

　　2 方法与结果

　　2．1色谱条件色谱柱：KromasilODSC18柱(4．6mm×250mm,5μm，瑞典诺贝尔公司)；流动相：乙腈-水（56∶44）；流速：1．0ml/min；检测波长：300nm；柱温（30±2）℃，进样量：20μl。

　　2．2对照品及样品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品12．3mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液（0．492mg/ml）。精密吸取以上对照品储备液1ml，加甲醇稀释到10ml容量瓶中，摇匀，得49．2μg/ml对照品溶液，再从中吸取1．5ml溶液置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（7．38μg/ml）

　　2．3供试品溶液的制备取本品装量差异项下的20粒，倾出内容物，取约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0．45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

　　2．4阴性样品溶液的制备以相同的处方比例称取适量药材（不含白芷），按本品制备工艺制备不含白芷的阴性样品，取适量参照样品溶液的制备方法，制备不含白芷的阴性对照溶液。

　　2．5系统适应性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，绘制色谱图。试验结果表明，供试品及对照品溶液有一保留时间相同的色谱峰，供试品色谱中欧前胡素与其他组分达到基线分离，阴性对照溶液在欧前胡素峰附近都无干扰。结果见图1~3。

　　2．6线性关系考察精密吸取对照品储备液（0．492mg/ml）1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，再从中分别吸取0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0ml溶液置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得2．46、4．92、7．38、9．84、12．30、14．76μg/ml的对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各20μl注入液相色谱仪测定，以峰面积y对进样量x进行线性回归分析，其回归方程为：Y＝26317x-1731．9，r＝0．9999。结果表明欧前胡素在进样量为0．0492～0．2952μg范围内线性关系良好。

　　2．7精密度考察精密吸取欧前胡素对照品溶液（7．38μg/ml）20μl，连续测定6次，测定欧前胡素峰面积，RSD为1．36％，本法的精密度较好。

　　2．8稳定性试验对同一供试品溶液（050402批），每隔2h测定1次，共测定5次，测定的欧前胡素的峰面积平均值为149349．8，RSD值为1．82％（n＝5），结果表明，在8h内，供试品溶液稳定。

　　2．9重复性试验取同一批次的样品（070402批）内容物5份进行含量测定，结果测得欧前胡素的平均含量为68．18μg/g（RSD值为0．17％，n＝5），结果表明本法的重复性较好。

　　2．10加样回收率试验精密称取已知含量的腰息痛胶囊（070402批，含量为68．18μg/g）约2．5g，分别精密加入一定量的欧前胡素（取对照品储备液0．34ml），按供试品溶液制备方法制备、测定，计算回收率，结果欧前胡素平均回收率为97．057％，RSD为1．38％（n=6）。

　　2．11样品的含量测定取本品3个批次按供试品溶液制备项下方法操作，得供试品溶液，并按上述色谱条件测定欧前胡素的含量。

　　3 讨论

　　色谱条件的选择：用HPLC测定欧前胡素含量，文献中有多种流动相[2-6]，比较不同比例的甲醇-水，乙腈-水系统，最后以乙腈-水（56∶44）可使所测成分欧前胡素与方中其他成分达到基线分离。欧前胡素出峰时间约为14min，每针高效液相色谱的分析时间为25min，达到分析要求，故选择乙腈-水（56∶44）为流动相。

　　样品提取方法选择：欧前胡素为香豆素类，易被甲醇提出，采用甲醇超声提取的方法，并进行了超声处理时间的优化试验，分别进行了0．5、1、1．5h的对比实验，结果显示，用甲醇超声处理0．5h测得的含量明显低于其他时间段，用甲醇超声处理1、1．5h测得结果基本一致，故本方法供试液的制备采用以甲醇为溶剂，超声处理1h的提取方法。

　　方法学研究表明，采用HPLC法对处方中白芷的欧前胡素进行含量测定，结果准确，重复性好，能够有效控制该产品的质量。

　　参考文献

　　［1］中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂第11册：201.

　　［2］程艳芹.HPLC法测定腰息痛胶囊中欧前胡素的含量.中药材,2006,29（3）:36.

　　［3］温莉萍,王秀兰,郜宁.HPLC测定通窍鼻炎胶囊中欧前胡素的含量.华西药学杂志,2003,18（1）:27.

　　［4］赵春香,梁英,王丽娜.HPLC法测定鼻炎灵片中欧前胡素的含量.中草药,2004,35（6）:17.

　　［5］朱央央,余伯阳.RP-HPLC测定元胡止痛方中延胡索乙素和欧前胡素的含量.中成药,2004,26（6）:8.

　　［6］刁继红,金英顺.活络镇痛片中欧前胡素含量的测定.时珍国医国药,2006,17（11）:43.