ＨＰＬＣ法测定正糖胶囊中大黄素的含量

　　【摘要】目的采用高效液相色谱法测定正糖胶囊中大黄素的含量，以控制该制剂的质量。方法采用大连依利特(C18,250mm×4．6mm，5μm)柱分离虎杖、何首乌中大黄素，以甲醇-0．1%磷酸溶液(85∶15)为流动相；流速为：1ml/min，检测波长为254nm。结果线性范围为0．054~0．27μg。2,3,5,4/-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率为99．45%，RSD=1．20%。结论试验方法简便易行，测定结果准确、可靠，重现性好。

　　【关键词】正糖胶囊；大黄素；HPLC

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　　【Abstract】ObjectiveTodeterminethecontentofemodininDuqiangTongluoVinumbyHPLC.MethodsAmethodwasestablishedbyHPLConC18column，withmethanol-0．1PhosphoricAcid(85∶15)asamobilephase.Theflowratewas1ml/min,andthedetectionwavelengthwas254nm.ResultsThelinerangeofemodinwas0．054-0．27μg.Theaveragerecoveryratewas99．45%，andtheRSDwas1．20%.ConclusionThemethodwassimpleandrapid，theresultsareaccurateandreproducible.

　　【Keywords】ZhengtangCapsules;Emodin；HPLC

　　正糖胶囊是由地骨皮、地黄、熟地黄、天花粉、虎杖、麦冬、玉竹、女贞子、何首乌、黄芪等十七味药组成，具有滋阴降糖的作用。处方中地骨皮、地黄、熟地黄、天花粉等目前没有可测定成分；女贞子含齐墩果酸、山茱萸中含有熊果酸，皆不溶于水，故样品中含量很少；黄芪中含有黄芪甲苷，但由于杂质干扰严重未能检出。处方中何首乌、虎杖都含有蒽醌类化合物，故以处方中主要药味何首乌、虎杖为指标，对其所含的有效成分大黄素的含量进行测定。供试品色谱峰分离效果好，阴性对照无干扰，可用于有效控制制剂的质量。

　　1 仪器与试药

　　仪器：Waters515-717-2487高效液相色谱仪。

　　试药：大黄素对照品(批号756-200211，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2．1色谱条件色谱柱：大连依利特(C18,250mm×4．6mm，5μm)；流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液(85∶15)；流速：1ml/min；检测波长：254nm。柱温：35℃。理论板数按大黄素峰计算，应不低于3000。

　　2．2对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品6．75mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇-醋酸乙酯(2∶1)混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇-醋酸乙酯(2∶1)混合溶液稀释至刻度，摇匀(每1ml含大黄素27μg的溶液)，即得。

　　2．3供试品溶液的制备[1]取本品内容物约8g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，置水浴上加热回流2h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加盐酸溶液(1ml→10ml)25ml，超声处理5min使溶解，再加三氯甲烷25ml，置水浴上加热回流30min，立即冷却，转移至分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸水层加三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加无水乙醇-醋酸乙酯(2∶1)混合溶液使溶解，转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2．4专属性试验按样品制备方法，制备不含何首乌、虎杖的阴性样品，照“2．3”项下操作，制得阴性样品溶液。进样10μl，按以上色谱条件测定，结果阴性对照无干扰。

　　2．5线性关系的考察精密吸取2．2项下对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别注入高效液相色谱仪，测其峰面积积分值，计算回归方程。回归方程：Y=106288X-15432，r=0．9999。分别注入高效液相色谱仪，测得峰面积Y。以进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程。回归方程为：Y=106288X-15432，r=0．9999。结果表明大黄素进样量在0．054~0．27μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2．6精密度试验取精密度试验取浓度为27μg/ml的对照品溶液10μl，按以上色谱条件连续进样5次，测定峰面积，结果RSD为0．24%。试验结果显示仪器精密度良好。

　　2．7稳定性试验取供试品溶液在10h内，按以上色谱条件进样5次，(0、2、4、8、12h)，测定峰面积，结果RSD为0．51%。试验结果显示供试品溶液12h内稳定性良好。

　　2．8重复性试验按样品含量测定项下的方法对20040201的样品进行测定，共测定5份，测定含量RSD为0．52%，试验结果表明该方法重复性良好。

　　2．9回收率试验精密量取样品(批号为040201，含量0．098mg/粒，平均装量0．4157g/粒)内容物，取约4g，共测定5份，精密称定，精密加入甲醇(含大黄素对照品0．208mg/ml)5ml，按“2．3”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算加样回收率，结果见表1。试验结果表明该方法回收率良好。

　　2．10样品测定取批号040201、040202、040303的样品，照“2．3”项下方法，按以上色谱条件对三批样品进行测定，结果为：0．10mg/粒、0．10mg/粒、0．10mg/粒。

　　3 讨论

　　3．1加热水解时间的确定为了选定合理的加热水解时间，在按照2．3项下方法制备供试品溶液，对加热水解15、30、60min进行考察，三种水解时间测定结果无明显差异。综合考虑，选定加热水解时间为30min。说明此水解方法对水解时间的要求较宽松，该方法可操作性强。

　　3．2水解所用酸种类的选择蒽醌类化合物的水解常用2．5mol／L硫酸溶液[2-5]、盐酸溶液(1ml→10ml)。经对上述两种溶液比较试验，选用盐酸溶液(1→10)效果优于2．5mol／L硫酸溶液。原因如下：水解后的溶液，加三氯甲烷振摇提取。由于酸溶液在三氯甲烷中具有一定的溶解性，硫酸沸点较高，难挥发，在蒸干过程中，硫酸的浓度增大，溶液中的部分大黄素就会与硫酸发生反应，部分大黄素被炭化，实际测得的大黄素含量会降低，造成误差。如果增加用无水硫酸钠干燥步骤，则试验步骤繁琐，增加系统误差。选用盐酸溶液(1→10)，由于盐酸易挥发，且盐酸性质较稳定，不易与大黄素发生作用。故水解时选用盐酸溶液(1→10)。

　　参考文献

　　［1］中国药典，2005:145.

　　［2］吴凡，李晔.HPLC法测定心脑片中大黄素的含量.西北药学杂志，2008,23(1):9-10.

　　［3］林瑞红.高效液相色谱法测定降脂宁中大黄素的含量.中药材,2008,31(2):306-308.

　　［4］韩飞,黄义斌，罗晓健，等.HPLC法测定维血灵口服液中大黄素的含量.海峡药学,2008,20(4):41-42.

　　［5］袁华峰.HPLC法测定肝炎合剂中大黄素的含量.药学与临床研究,2008,16(2):155-156.