前列舒片的质量标准研究

　　【摘要】  目的研究与建立前列舒片的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对片剂中的黄柏、赤芍、当归、川芎进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定片剂中盐酸小檗碱的含量。结果TLC具有专属性。HPLC准确可靠。盐酸小檗碱在0.104～1.040 μg范围内呈良好线性关系（r=5）,平均回收率为99.71％，RSD=1.95％（n=6）。结论 该方法灵敏、准确，能有效地控制前列舒片的质量。

　　【关键词】  前列舒片； 盐酸小檗碱； 质量控制； 薄层色谱； 高效液相色谱

　　Quality Standard for QianLieShu Tablet

　　NONG Xiaomian,LIANG Yongping,WEI Minfa

　　Guangxi Institue of Materia Medica，Nanning 530022，China

　　Abstract：ObjectiveTo establish and study the quality standard for Qianlieshu tablet.MethodsCortex Phellodendri Chinese, Radix paeoniae rubra, Radix Angelicae Sinensis, Rhizoma Chuanxiong were identified by TLC,and herbaceous peony content in capsule was determined by RP-HPLC. ResultsTLC method was specific,HPLC method was accurate and reliable.The Berberine Hydrochloride of the Cortex Phellodendri Chinese showed a good linear relationship in the range of 0.104～1.040μg（r=5）and average recovery was 99.71％，RSD=1.95％(n=6).ConclusionThis method is sensitive , accurate and  can be used to control the quality of the Qianlieshu tablet.

　　Key words：Qianlieshu tablets;  Berberine Hydrochloride of Cortex Phellodendri Chinese;  Quality control;  TLC;  HPLC

　　前列舒片有清热利湿，化瘀散结的功效，主要用于慢性前列腺炎、前列腺增生、尿频、尿急、尿淋沥、会阴坠胀等。其处方由黄柏、赤芍、当归、川芎等13味中药组成,为广西药物研究所研究的新药。本次研究建立有赤芍、黄柏、当归、川芎的薄层色谱鉴别方法及黄柏中盐酸小檗碱含量测定方法，能有效控制药品质量，保证药品临床的用药有效和安全。

　　1  材料与仪器

　　日本岛津LC－10T高效液相色谱仪；SPD－10A型紫外检测器（日本岛津公司）；UP250H超声清洗器(熊猫集团南京电子计算有限公司)；硅胶G（青岛海洋化工厂）；层析缸（20 cm×10 cm）；层析柱（内径10 mm）；芍药苷、盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所），当归、川芎对照药材（中国药品生物制品检定所）；前列舒片（由广西药物研究所自制）及阴性样品（由广西药物研究所自制）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  薄层色谱鉴别

　　2.1.1  赤芍的鉴别供试品溶液的制备

　　取本品10片，研细，加乙醇30 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，加中性氧化铝2 g，拌匀置水浴上干燥，加在中性氧化铝柱（200目，3 g，内径10 mm）上，用甲醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，即得。

　　对照品溶液的制备  取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，即得。

　　阴性对照溶液的制备  按处方比例，取缺赤芍的其它药材按前列舒片［法制］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，即得。

　　薄层色谱  吸取供试品溶液15 μl, 对照品溶液5 μl，阴性对照溶液10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷醋酸乙酯甲醇甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同蓝紫色的斑点，阴性样品无干扰。见图1。

　　2.1.2  黄柏的鉴别供试品溶液的制备

　　取本品5片，研细，加甲醇20 ml超声处理30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，即得。

　　对照品溶液的制备  取盐酸小檗碱对照品加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，即得。

　　阴性对照溶液的制备  按处方比例，取缺黄柏的其它药材按前列舒片［法制］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，即得。

　　薄层色谱  吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇冰醋酸水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同黄色的荧光斑点。阴性样品无干扰。见图2。

　　2.1.3  当归、川芎的鉴别供试品溶液的制备

　　取本品10片，研细，加1%碳酸氢钠50 ml，超声处理10 min,滤过，滤液用稀盐酸（234→1 000）调节pH值为2～3，用乙醚提取两次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。

　　对照药材溶液的制备  取当归、川芎对照药材各1 g，加乙醚20 ml超声处理10 min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。

　　按处方比例，取缺当归、川芎的其它药材按前列舒片［法制］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，即得。

　　薄层鉴别  吸取上述3种溶液各15 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同天蓝色的荧光斑点。阴性样品无干扰。见图3。

　　2.2  含量测定

　　2.2.1  色谱条件的选择色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱; 流动相：乙腈0.1％磷酸十二烷基磺酸钠（60∶40∶0.1 ）;流速：1.0 ml·min-1;检测波长:265 nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。

　　2.2.2  溶液的制备对照品溶液

　　精密吸取盐酸小檗碱对照品10.4 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液（每毫升含盐酸小檗碱0.104 mg）2.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液（20.8 μg·ml-1）。

　　对照药材溶液：精密称取黄柏对照药材0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。

　　供试品溶液：取本品10片，研细，取细粉约0.1 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超声处理30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　阴性样品溶液：以相同的处方比例，称取处方的药材量（黄柏除外，）按“前列舒片”制备工艺制备不含黄柏药材的阴性样品，取此阴性样品相当于样品10片的量，按以上“供试品溶液的制备”方法制备不含黄柏的阴性样品溶液。

　　2.2.3  系统适用性实验色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈0.1％磷酸十二烷基磺酸钠（60∶40∶0.1），流速1.0 ml/min，检测波长265 nm。柱温：室温。

　　分别吸取供试品溶液、黄柏对照药材溶液、对照品溶液及阴性溶液（不含黄柏）各20 μl，注入液相色谱仪，绘制色谱图（见图4～7）。 试验结果表明，供试品、黄柏药材及对照品溶液有一保留时间相同的色谱峰，并且阴性样品在盐酸小檗碱峰附近无干扰，盐酸小檗碱分析时间适宜，分离效果佳。根据色谱工作站计算的盐酸小檗碱峰理论板数约10 000，它的分离度约为2.65，比规定的最小分离度要求1.5高，故我们将理论板数定为5 000。

　　2.2.4  线性关系考察精密吸取对照品储备液（0.104 mg·ml-1）0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分别于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液20 μl注入液相色谱仪测定，以峰面积A对进样量C(μg)进行线性回归分析,得回归方程：A=2E+06X－12164 (r=0.999 9)，表明盐酸小檗碱量在0.104～1.040 μg范围内线性关系良好。

　　2.2.5  精密度实验取供试品溶液，在选定的色谱条件下，依法操作测定，重复进样5次，峰面积分别为552 521，556 603，547 246，544 284，554 545，RSD=0.93%。表明精密度较好。

　　2.2.6  稳定性实验精密称取样品0.1 g，制备供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8 h后，依法测定盐酸小檗碱含量，峰面积分别为583 091，581 430，587 573，585 367，576 171，RSD=0.74%。表明供试品溶液在8 h内稳定性较好。

　　2.2.7  重复性实验取样品5份，各为0.1 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备5份供试品溶液，依法测定，结果为7.682 4，7.700 1，7.542 1，7.598 6，7.742 2 mg·g-1，RSD=1.06%。表明方法重复性较好。

　　2.2.8  加样回收率实验精密称取已知含量的样品6份，含量为7.62 mg·g-1，每份约0.05 g，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（0.104 mg·ml-1）4.0 ml，置50 ml量瓶中，依法测定，计算回收率，结果见表1。表明本方法回收率较好。表1  盐酸小檗碱加样回收率试验数据（略）

　　2.2.9  样品测定取3批样品各10片，研细，取细粉约0.1 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加入甲醇约40 ml，超声处理30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法［1］测定。按外标法计算含量。结果见表2，图谱见图8～10。表2  前列舒片样品测定数据（略）

　　3  讨论

　　3.1  通过实验，确定了前列舒片中赤芍、黄柏、川芎、当归的薄层色谱鉴别方法，阴性对照表明其它成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强，结果可靠；采用高效液相色谱法测定前列舒片中盐酸小檗碱的含量来控制其内在质量，方法灵敏、准确，符合定量要求。

　　3.2  在赤芍薄层色谱鉴别实验中，斑点颜色较淡，这是由于在过柱时中性氧化铝用量偏高,对芍药苷有一定的吸附，因此过柱时应注意控制其氧化铝的用量及增加洗脱溶剂的量；在当归和川芎的薄层色谱鉴别实验中，当归和川芎的主要成分多为挥发油成分,因此各种供试品应尽量使用新配置的,同时各种供试品应该密封保存。

　　3.3  流动相的选择中，曾比较了乙腈－水、甲醇－水及不同比例的乙腈－磷酸二氢钾，乙腈0.1％磷酸十二烷基磺酸钠（60∶40∶0.1 ）等系统，以乙腈0.1％磷酸十二烷基磺酸钠（60∶40∶0.1 ）流动相分析时间适宜，分离效果最佳。故以乙腈0.1％磷酸十二烷基磺酸钠（60∶40∶0.1 ）为流动相，盐酸小檗碱在11 min左右出峰，峰型好，与杂质峰达基线分离,重现性好，回收率结果满意。

　　3.4  样品提取溶剂及提取时间的选择：根据盐酸小檗碱为生物碱及可溶于水、甲醇、乙醇等特性，拟采用①流动相②甲醇③盐酸甲醇（1∶100）混合液作为提取溶剂,测定样品盐酸小檗碱含量。结果，以甲醇为提取溶剂，提取最完全,故选择甲醇为提取溶剂。分别进行超声处理20，30，45，60 min处理，测定样品盐酸小檗碱含量最低，提取20 min含量最低,提取30 min与提取45 min，提取60 min无显著差异，故选择提取时间为超声处理30 min。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：28.