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【摘要】 目的建立冠心康颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）鉴别处方中的赤芍、降香、川芎，用高效液相色谱（HPLC）法测定丹参中丹参素钠的含量。结果在TLC图谱中可检出赤芍、降香、川芎的特征斑点；丹参素钠线性范围在0.9～9.0μg，r=0.994，精密度实验RSD=0.7%；平均回收率为99.2%。结论所采用的方法准确、可靠，可行性及重复性良好，能有效控制该制剂的质量。
【关键词】 冠心康颗粒 薄层色谱 高效液相色谱
冠心康颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂 第19册），由赤芍、丹参、降香、红花、川芎4味药组成，具有活血行气、化瘀止痛之功效。用于血瘀气滞、心脉痹阻所致冠心病、心绞痛等。原标准中尚未建立质量标准。为了更好控制该制剂的质量，本文对其质量标准进行研究，建立了赤芍、降香、川芎TLC鉴别方法及丹参中的活性成分丹参素钠含量的HPLC测定方法，为该制剂的质量控制提供了科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国Agilent HP1100高效液相色谱仪，包括1100系列四元泵，自动进样器，柱温箱及可变波长检测器，色谱柱：Kromasil C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；SB3200-T超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）。纯水装置：美国MILLIPORE公司Simplicity185超纯水系统。
1.2 药品与试剂
本实验所用的对照品均由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯；其余试剂为分析纯。冠心康颗粒由哈药集团中药二厂生产。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 赤芍的薄层鉴别
取冠心康颗粒1袋，加无水乙醇25 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，10 ml/次，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，15 ml/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
2.1.2 降香的薄层鉴别［1］
取冠心康颗粒1袋，加乙醚20 ml，超声处理5 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取降香对照药材0.5 g，加乙醚10 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚（60～90）-醋酸乙酯（8∶3）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以1%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与降香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
2.1.3 川芎的薄层鉴别
取“2.1.2”项下供试品，另取川芎对照药材1 g，加乙醚10 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）实验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G板上，以正乙烷-醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图3。
2.2 含量测定［1］
2.2.1 色谱条件与系统适用性实验
C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；柱温箱30℃；流动相为甲醇－水－二甲基甲酰胺－冰醋酸（2∶95∶2∶1）；检测波长为283 nm。理论塔板数按丹参素峰计算应不低于6 000。
2.2.2 对照品溶液的制备
取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每毫升含50 μg的溶液（相当于每毫升含丹参素45 μg），即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
取冠心康颗粒适量，精密称定，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸溶液（1→50）50 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用上述盐酸溶液补足减失的重量，加氯化钠5 g，摇匀，离心，精密量取上清液25 ml，置分液漏斗中，用醋酸乙酯振摇提取4次（50，30，20，20 ml），合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用50％甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液（丹参素45 μg/ml）2，5，10，15，20 μl分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定丹参素对照品吸收峰面积。以进样量为X，吸收峰面积为Y值，进行线性回归，得线性方程：Y=308.915 885X+4.461 478 6，r=0.999 4。
结果表明丹参素进样量分别在0.9～9.0 μg之间呈良好的线性关系。
2.2.5 空白实验
称取阴性对照（丹参）1 g，同供试品的制备方法，制成阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μl，注入色谱仪，按规定的色谱条件检测。结果供试品溶液色谱中，在对照溶液相同的保留时间有相应的吸收峰，而阴性对照没有，说明阴性无干扰。见图4。
2.2.6 精密度实验
精密吸取同一批供试品溶液10 μl注入色谱仪，重复进样6次，测定丹参素钠峰面积，结果它们的RSD为0.7%。
2.2.7 稳定性实验
精密吸取同一批供试品溶液10 μl注入色谱仪，分别在0，1，2，4，8，12，24 h进样，共测定7次，测定丹参素钠峰面积，结果它们的RSD为 1.3%。表明供试品在24 h内基本稳定。
2.2.8 重复性实验
精密称取同一批冠心康颗粒6份，按供试品溶液制备方法进行制备，并按上述条件进行测定，结果丹参素含量RSD为0.4%。
2.2.9 回收实验精密称取已知含量冠心康颗粒（批号060819）0.5 g，共取6份，分别精密加入对照品溶液10 ml，挥干，按“2.2.3”项下处理并检测。结果见表1。表1 丹参素钠加样回收率实验结果（略）
2.2.10 样品含量测定
取冠心康颗粒，按供试品溶液制备法进行制备,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,并按以上色谱条件进行测定，每批取平行3份,所测得的3批样品的丹参素含量见表2。表2 3批冠心康颗粒每袋中丹参素含量测定结果（略）
根据以上3批样品的测定结果，考虑到原药材及企业生产工艺等因素的影响，暂规定本品每袋含丹参以丹参素计不得少于12.0 mg/袋。
3 讨论
供试品溶液提取溶媒选择在降香和川芎薄层鉴别中供试品溶液的制备中，我们比较了甲醇与乙醚两种溶媒，结果发现以乙醚作为溶媒提取，其杂质成分少，且能完全显示它们的特征斑点。
本实验采用TLC法对赤芍、降香、川芎进行鉴别，专属性强，重复性好，鉴别效果清晰，且操作简便。采用HPLC法测定丹参素的含量，经方法学验证表明，其精密度、稳定性、加样回收率和重现性均能满足定量要求。故本研究可作为冠心康颗粒质量控制。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：550，403.