糖脂益片质量标准的研究

　　【摘要】  目的： 建立糖脂益片的质量标准。方法：采用薄层色谱法定性鉴别糖脂益片中黄芪、黄连、山楂,采用高效液相色谱法(HPLC)测定糖脂益片中盐酸小檗碱含量。结果：薄层色谱法可检出黄芪、黄连、山楂，盐酸小檗碱在0.006 24~0.031 20 mg/ml浓度范围内线性关系良好，r=0.999 2,平均加样回收率为98.89%。结论：薄层色谱鉴别方法和HPLC法简便，易于操作，重现性好，结果稳定，可有效控制糖脂益片的质量。

　　【关键词】  糖脂益片；薄层色谱法；高效液相色谱法；盐酸小檗碱

　　Study of quality control on Tangzhiyi tablets

　　HAN Rong, XUE Jie, ZHANG Haiying

　　(Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital， Xinjiang Medical University，

　　Urumqi 830000, China)

　　Abstract: Objective： To establish quality control of Tangzhiyi tablets. Methods： astraglionych, coptidis rhizoma, chinese hawthorn were identified by thin layer chromatograph (TLC). The contents of berberine hydrochloride were determined by high performance liquid chromatograph (HPLC). Results： Astraglionych, coptidis rhizoma, and Chinese hawthorn could be indentified by TLC, berberine hydrochloride showed a good linear relationship at a range of 0.006 24～0.031 20 mg/ml, r=0.999 2, The average recovery rate was 98.89%. Conclusion： The methods are accurate and reliable, and can be used for the quality control of Tangzhiyi tablets effectively.

　　Key words： Tangzhiyi tablets； TLC； HPLC； berberine hydrochloride

　　糖脂益片由黄芪、生地黄、山楂、黄连等药物组成，用于消渴病的辅助治疗，具益气养阴、活血解毒的功效，有调节免疫功能、降低血糖、调节血脂等药理作用。为有效控制糖脂益片的质量，本实验采用薄层色谱法及高效液相色谱法(HPLC)对糖脂益片进行质量标准的研究，现报道如下。

　　1实验仪器与试药

　　1.1实验仪器Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司），AG135电子天平（瑞士，0.01 mg），AL204电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司，0.1 mg），SK3300LH超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司），DirectQ超纯水仪（法国）。

　　1.2实验试剂三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、苯、石油醚、乙醚、磷酸、正丁醇、氨水、异丙醇均为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，薄层层析硅胶GF254(青岛海浪硅胶干燥剂厂)，玻璃板(10 cm×20 cm)。黄芪甲苷对照品（批号0781200311）、熊果酸对照品（批号110742200516）、盐酸小檗碱对照品（批号110713200208）均购于中国药品生物制品检定所，糖脂益片样品由华世丹药业有限公司生产（批号20050112、20050116、20050119)。

　　2实验方法与结果

　　2.1薄层层析定性鉴别

　　2.1.1黄芪取糖脂益片研细，加甲醇超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液［1，2］。取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成对照品溶液。按供试品溶液制备方法制备缺黄芪的阴性对照液。吸取上述3种溶液分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷—甲醇—水（13∶7∶2）下层液为展开剂，展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，结果见图1。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄芪的阴性对照液无干扰。

　　2.1.2黄连取糖脂益片研细，加盐酸甲醇（1∶100）超声提取15min，滤过，滤液作为供试品溶液［3］。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成对照品溶液。按供试品溶液制备方法制备缺黄连的阴性对照液。吸取上述3种溶液分别点于同一硅胶G板上，以苯—乙酸乙酯—甲醇—异丙醇—水（6∶3∶1.5∶1.5∶1）的上层溶液（10℃以下静置过夜）为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸中展开,置紫外光(365 nm)下检识,结果见图2。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点，缺黄连的阴性对照液无干扰。

　　2.1.3山楂取糖脂益片研细，加乙醚回流提取1 h，滤过，滤液挥干，残渣用石油醚（30~60℃）洗涤2次，倾去石油醚，残渣加无水乙醇－氯仿（3∶2）混合液1 ml微热使溶解，作为供试品溶液［4］。取熊果酸对照品，加甲醇制成对照品溶液。按供试品溶液制备方法制备缺山楂的阴性对照液。吸取上述3种溶液分别点于同一硅胶G板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸（20∶5∶0.4）为展开剂，展开，喷以硫酸乙醇溶液（3→10），加热至斑点显色清晰，结果见图3。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺山楂的阴性对照液无干扰。

　　2.2.1色谱条件色谱柱：Symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液40∶60(每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g)，检测波长265 nm，流速1.0 ml/min，柱温35℃，进样量10 μｌ［5，6］。

　　2.2.2对照品、供试品、阴性溶液的制备

　　(1)对照品溶液的制备： 精密称取100℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品0.78 mg，置25 ml容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.031 2 mg/ml的对照品溶液。(2) 供试品溶液的制备： 取糖脂益片研细，精密称取0.1 g，置25 ml容量瓶中，加入盐酸－甲醇(1∶100)定容，置60℃水浴中加热1 5min，超声（功率250 W，频率50 kHz）30 min，取出，放至室温，取上清液，过有机微孔滤膜（0.45 μm），滤液作为供试品溶液［7］。(3) 阴性溶液的制备: 按处方称取除黄连外的其它药材，依处方工艺制成黄连阴性片剂，取阴性片剂粉末0.1 g，按供试品溶液制备方法制得阴性溶液。取供试品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、阴性溶液，分别进样10 μl，记录色谱图(图4、5、6)，结果阴性溶液在盐酸小檗碱相应的保留时间出峰处无干扰。

　　2.2.3标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取上述对照品系列溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(X)为横坐标，浓度(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程:Y=0.025 7X+0.156 7， r=0.999 2。结果表明盐酸小檗碱在0.006 24～0.031 20mg/ml范围内线性关系良好，盐酸小檗碱浓度为0.006 24、0.012 48、0.018 72、0.024 96、0.031 20 mg/ml时，峰面积分别为238 091、487 974、722 191、941 623、1 224 332。

　　2.2.4精密度及稳定性实验取线性关系考察中对照品溶液，每次10 μｌ，连续进样5次，峰面积分别为721 369、721 261、743 325、749 090、747 569，相对标准偏差(RSD)为1.91%，结果表明精密度良好。精密吸取供试品溶液，连续5 h内进样，采用HPLC法测定，峰面积分别为722 191、723 633、720 676、719 737、721 369，RSD为0.21%，结果表明在5 h内稳定。

　　2.2.5加样回收率实验精密称取已知含量的糖脂益片粉末3 mg，共9份，分别加入浓度为0.006 24 mg/ml的盐酸小檗碱对照品1、2、3 ml(0.006 24、0.012 48、0.018 72 mg)，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，采用HPLC法进行测定，计算低、中、高不同剂量的加样回收率分别为101.81%、98.73%、96.14%，RSD值分别为1.47%、0.91%、1.29%，总平均加样回收率为98.89%。

　　2.2.6 糖脂益片中盐酸小檗碱的含量测定取糖脂益片样品3批(批号20050112、20050116、20050119),测得盐酸小檗碱的平均含量为2.212 0 mg/片。

　　3讨论

　　3.1薄层层析定性鉴别在黄芪的薄层色谱鉴别中，根据黄芪甲苷的理化性质，本实验采用水饱和的正丁醇萃取有效成分，黄芪甲苷斑点分离效果较好。黄连中主要有效成分为盐酸小檗碱，试验曾用《中国药典》黄连药材鉴别项下的展开系统苯—乙酸乙酯—甲醇—异丙醇—水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3），但斑点重叠在一起，未得以分离，后加大展开剂的极性，调整水的比例为1，并在10℃以下静置过夜，取其上层溶液，结果黄连中巴马亭、小檗碱、黄连碱和伪黄连碱等主要生物碱斑点得到很好分离，且重现性良好。山楂的薄层色谱鉴别采用熊果酸作为评价指标，用甲醇超声提取，但未检出熊果酸斑点，可能是甲醇极性较大，处方中其它成分产生干扰。根据熊果酸溶解性，实验改用乙醚超声提取，残渣用石油醚洗涤，再用无水乙醇—氯仿（3∶2）混合液溶解的方法，结果熊果酸斑点清晰，重现性好。

　　3.2盐酸小檗碱含量测定采用HPLC法测定盐酸小檗碱含量时，实验试用各种比例溶剂系统，用甲醇—0.2 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液42∶58（用磷酸调节pH值至2.7）为流动相，盐酸小檗碱出峰时间为8.812 min，供试品溶液峰分离较好，但由于流动相酸性较强，对分析柱的影响较大，本实验未采用。采用乙腈—0.1%磷酸溶液(每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g)溶剂系统为流动相，先考察乙腈—0.1%磷酸溶液50∶50时，盐酸小檗碱出峰时间为4.272 min，乙腈—0.1%磷酸溶液为44∶56时，盐酸小檗碱出峰时间为7.589 min，供试品溶液中各峰未达到分离，色谱图严重拖尾，调整乙腈—0.1%磷酸溶液为40∶60，盐酸小檗碱出峰时间为12.339 min，供试品溶液色谱峰分离较好。本实验确定的薄层色谱鉴别方法和HPLC含量测定方法操作简便，结果准确，重现性好，可有效地控制糖脂益片的质量。

　　【参考文献】

　　［1］刘安球，李建祥．芪脑清颗粒质量标准研究［J］．中成药，2003，25(5)：360363.

　　［2］孙艳，周晓兵，顾苏俊，等．参芪颗粒的质量标准研究［J］．解放军药学学报，2002，21(5)：363365.

　　［3］王新春，胡志林，袁勇，等．黄连复方合剂的质量标准研究［J］．时珍国医国药，2002，13(10)：604605.

　　［4］张秋红，刘素清，熊绍银．熊果酸成分薄层分析条件综述［J］．时珍国医国药,2000，11（12）：1133.

　　［5］刘腊娥，陈立新，蔡亚敏，等．高效液相色谱法测定肾康口服液中盐酸小檗碱的含量［J］．中国药房,2005，16（2）：136137.

　　［6］欧阳荣，廖建萍，胡铁骊，等．高效液相色谱法测定鼻咽解毒胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］．中国医院药学杂志,2005，25（2）：132135.

　　［7］国家药典委员会．中华人民共和国药典［S］．一部．北京：化学工业出版社，2005.213.