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【摘要】 目的建立脑通喷鼻微乳中阿魏酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Waters C18 柱 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-1%醋酸（35∶65）为流动相；检测波长323 nm；流速1.0 ml/min。结果阿魏酸在浓度为7.6～76 μg/ml的范围内线性关系良好，r=0.999 5。平均回收率为98.68%，RSD为1.33%。结论该法简便、快捷、准确、重复性好，可用于脑通喷鼻微乳中阿魏酸的质量控制。
【关键词】 脑通喷鼻微乳 高效液相色谱法 阿魏酸
Abstract：ObjectiveTo establish the determination method of ferulic acid in Naotong microemulsion. MethodsHPLC was used with Waters C18 column (150 mm×4.6 mm，5 μm), and the mobile phase consisted of methanol-1% acetic acid (35∶65) .The detective wavelength was set at 323nm. The flow rate was 1.0 ml/min.ResultsFerulic acid was linear in the range of 7.6～76 μg/ml, r=0.999 5. The average recovery of ferulic acid was 98.68%, and RSD was 1.33%.ConclusionThe method is simple, rapid, accurate and reliable and can be used to control the quality of ferulic acid in Naotong microemulsion.
Key words：Naotong Microemulsions; HPLC; Ferulic acid
缺血性脑中风（AIS）是严重威胁人类健康的重大疾病之一，其病死率、致残率一直居高不下，但至今仍缺乏理想的治疗手段，成为世界性的医学难题［1，2］。验方脑通滴鼻剂主要成分为中药麝香、川芎、三七、水蛭、冰片等，临床研究证明，其对于AIS的治疗效果显著［3］。但是由于中药复方成分复杂，脑通滴鼻剂生物利用度偏低。将其进行加减改良重新配伍制成微乳喷雾剂，可提高药物的生物利用度，加强药物对脑部的靶向作用［4］。阿魏酸为君药川芎的生物活性成分［5］，也是脑通微乳的重要有效成分之一。为控制脑通喷鼻微乳的质量，本实验建立了高效液相色谱（HPLC）测定脑通微乳中阿魏酸含量的方法。
1 仪器与试药
依立特230高效液相色谱仪：LU230低压梯度洗脱器，P230高压恒流泵，UV230+紫外-可见检测器，EC2000色谱工作站。
阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号0773-0991），川芎（广州致信制药厂），脑通喷鼻微乳(自制)，甲醇(色谱纯,天津四友精细化学品有限公司)，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Waters C18 柱 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-1%醋酸（35∶65）；检测波长为323 nm；流速1.0 ml/min；进样10 μl；室温下操作。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量置于50 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成0.304 mg/ml的阿魏酸对照品储备液。再精密量取此储备液1 ml置10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备精密量取样品2.0 ml，置于10 ml的容量瓶中，加流动相稀释至刻度，超声30 min，静置，冷却至室温，用0.45 μm的滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3 方法专属性考察处方中除川芎含有阿魏酸外，三七也含少量阿魏酸。所以实验中制备了不含川芎、三七的双阴性微乳和脑通微乳，分别处理测定，结果见图1～3。由图1～3可看出，双阴性微乳在阿魏酸的位置上无干扰峰，辅料和试剂均不干扰阿魏酸的测定。
2.4 标准曲线的制备 精密量取上述储备液0.25，0.5，1.0，2.0，2.5 ml分别置10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度、摇匀，制成不同浓度的对照品溶液。分别进样10 μl，按上述色谱条件测定。以对照品溶液浓度（C）为横坐标，峰面积的平均值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程：Y=54.57X-296.6，r=0.999 5。结果表明，阿魏酸在浓度为7.6～76 μg/ml的范围内线性关系良好。
2.5 精密度和重复性实验取阿魏酸标准曲线中45.6 μg/ml的对照品溶液，重复进样6次，10 μl/次，依法测定峰面积，计算得出RSD为0.48%，表明进样精密度良好。取同一批脑通微乳5份，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定，计算阿魏酸的含量，RSD为1.08%，表明阿魏酸含量测定结果重复性良好。
2.6 稳定性考察取同一供试品溶液，室温放置0，1，2，4，6，8 h后测定其阿魏酸含量，RSD为0.89%，结果表明供试品溶液在8 h内基本稳定。
2.7 加样回收实验精密量取阿魏酸储备液0.5，1.0，1.5 ml各3份，置5 ml容量瓶中，加入适量双阴性微乳，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定，并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果
2.8 样品含量测定取3批脑通微乳，按供试品溶液的制备方法配制，每批样品重复进样3次，依法测定阿魏酸的含量，结果见表2。 表2 微乳中阿魏酸的含量测定
3 讨论
不同产地来源，不同规格的川芎药材中，阿魏酸的含量差异性很大［6］。本实验通过比较研究，选择了广州致信制药厂的川芎，制得复方微乳中阿魏酸含量较高。
实验中发现，用纯甲醇做溶剂来配制样品时，阿魏酸的样品峰都有不同程度的前沿。经研究发现，用流动相来配制样品，峰形能得到改善，效果较好，所以样品配制中选择了流动相做溶剂。
本文是对中药复方制剂中某一主药的有效成分进行测定，其它的中药可能也含有该成分，所以实验中设计了不含川芎、三七的双阴性对照微乳，以准确地分析测量方法的专属性。
本实验方法排除了辅料的干扰，简便易行、准确可靠，可作为脑通滴鼻喷雾剂的质量控制方法。
【参考文献】
［1］ Louis R. Caplan, Werner Hacke. Acute Ischemic Stroke［M］.Neurological Disorders ( Second Edition ), 2003：327.
［2］ 吴兆苏，姚崇华，赵 冬. 我国人群脑卒中风发病率、死亡率的流行病学研究［J］.中华流行病学杂志，2003，24（3）：236.
［3］ 张沁园，寇全春. 脑通滴鼻液治疗缺血中风临床研究［J］.山东中医药大学学报，2006，30（1）:39.
［4］ Eisen HJ, Hobbs RE, Davis SF, et al. Safety, tolerability, and efficacy of cyclosporine microemulsion in heart transplant recipients［J］.Transplantation, 2001,71(1):70.
［5］ 王铁杰，曹 阳，王 玉，等. HPLC法测定川芎中阿魏酸与香草醛的含量［J］.中草药，2004，35（8）：944.
［6］ 丁明玉，杨 屹，李 煜，等. 川芎药材的高效液相色谱质量控制方法研究［J］.药物分析杂志，2004，24（4）：351.