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【摘要】 目的建立HPLC法测定立克宁肠溶微丸中丁香苦苷的含量。方法Symmetry shield TM RP18（3.9 mm× 150 mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-水(30∶70, V/V)，检测波长为225 nm，流速为1.0 ml·min-1，柱温为30℃。结果丁香苦苷浓度在0.05～1.04 μg/ml之间线性良好，r = 0.999 9。平均加样回收率为99.64 %，RSD为1.92 %。结论该法简便、准确、重复性好，可用于立克宁肠溶微丸中丁香苦苷的含量测定，为该制剂质量标准的建立提供依据。
【关键词】 高效液相色谱； 丁香苦苷； 肠溶微丸
Abstract：ObjectiveTo determine the content of syringpicroside in Likening enteric micropelets by HPLC. MethodsThe HPLC system consisted of the column of Symmetry shield TM RP18 (3.9 mm × 150mm, 5μm), and methanol-water (30∶70, V/V) as the mobile phase. The temperature was 30℃, the detection wavelength was 225nm, and the flow rate was 1.0 ml·min-1.ResultsGood separation and peak figures of syringpicroside were obtained. Linear range of syringpicroside was in the range of 0.05～1.04 μg/ml, average recovery was 99.64％ and the RSD was 1.92%.ConclusionThis method is rapid, accurate, and reproducible, which can be used to control the quality of Likening enteric micropelets.
Key words：HPLC; Syringpicroside; Enteric micropelets
丁香苦苷为丁香叶提取物的主要有效成分之一［1］。药理研究表明，丁香苦苷具有抗菌消炎、抗病毒［2］、降压、降温、镇咳祛痰等作用。为了将其研发成为高效、安全、使用方便的药物制剂，笔者进行了新剂型立克宁肠溶微丸的工艺研究。控制该制剂的制备工艺及药品质量的稳定性，确保临床疗效，本实验以丁香苦苷含量为质量控制指标，建立了高效液相色谱法测定丁香苦苷含量［3］的方法。
1 材料与仪器
1.1 药品 丁香苦苷对照品（自制，纯度大于98％）；微晶纤维素 (天津天泰精细化学品有限公司，T.T.R.C)；甲醇（液相用）为色谱纯，其他试剂均为分析纯。立克宁肠溶微丸为自制样品，批号分别为050812，050814，050816)。
1.2 仪器 美国Waters公司高效液相色谱仪系统，2996二极管阵列检测器， Empower 色谱工作站；MP2000电子天平（上海第二天平仪器厂）；ZB-1C 智能崩解仪(天津大学精密仪器厂)。
2 方法与结果
2.1 立克宁肠溶微丸的制备取处方量的原辅料，加入适量的稀释剂混合均匀，挤出物投入滚圆机滚圆成含药丸芯，含药丸芯低温烘干后过筛，筛分得粒径为10～18目的含药丸芯，含药丸芯包肠溶衣至增重6％后即得立克宁肠溶微丸。
2.2 立克宁肠溶微丸阴性样品的制备处方中不含丁香叶提取物，其它辅料以及工艺与立克宁肠溶微丸的制备相同。
2.3 供试品溶液配制取立克宁肠溶微丸1.2 g，研成细粉，置50 ml具塞三角烧瓶中，加入蒸馏水溶解，加热至全溶后转移至100 ml的容量瓶中蒸馏水定容。精密吸取20ml置分液漏斗中，加醋酸乙酯萃取两次（每次为30 ml），回收有机相，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容于25 ml容量瓶中，再精密吸取1.0 ml置于25 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。
2.4 对照品储备液配制精密称取丁香苦苷对照品1.06 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，置于4℃冰箱中备用。
2.5 色谱条件色谱柱：Symmetry shield TM RP18（3.9 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水(30∶70,V/V)；柱温：30℃；检测波长：225 nm；流速为1.0 ml·min-1。
2.6 可行性实验按处方配比制备不含丁香叶提取物的空白微丸阴性样品。称取与立克宁肠溶微丸样品及相当量的阴性样品，按样品测定项下方法分别进行提取。分别取丁香苦苷对照品溶液、立克宁肠溶微丸样品溶液、不含丁香叶提取物的微丸阴性样品溶液，进样10 μl，结果表明丁香苦苷的峰保留时间约为9 min，阴性样品在丁香苦苷峰处无峰，即立克宁肠溶微丸中其他成分对丁香苦苷含量测定没有影响。结果见图1～3。
图1 丁香苦苷对照品（略）
2.7 标准曲线的制备精密称取干燥至恒重的丁香苦苷对照品，加甲醇配制成0.5，1，2.5，5.0，7.5，10.0 mg·ml-1的系列溶液，微孔滤膜滤过，在225 nm波长条件进行测定，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度(mg·ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2.13×104+1.3×106X (n=5)，相关系数r=0.999 9，表明丁香苦苷浓度在0.05～1.04 mg·ml-1之间呈良好的线性关系。
图2 立克宁肠溶微丸样品（略）
图3 阴性对照（略）
2.8 精密度实验精密吸取丁香苦苷对照液（0.106 mg·ml-1）10μl，在上述色谱条件下连续进样5次，计算相对标准偏差，结果表明日内精密度的RSD为0.70%，日间精密度的RSD为1.02%。表明仪器系统的精密度良好。
2.9 重复性实验精密吸取供试液6份，各进样15 μl测定丁香苦苷含量，计算相对标准偏差，结果表明RSD为1.36%，符合规定标准，表明重复性良好。
2.10 稳定性实验精密吸取丁香苦苷对照液（0.106 mg·ml-1）10 μl，分别在0，2，4，6，8，10 h测定1次，计算相对标准偏差，RSD为1.60%。表明丁香苦苷对照液在10 h内稳定。
2.11 加样回收率实验精密称取已知丁香苦苷含量的微丸样品5份，加入丁香苦苷对照品溶液5 ml（0.106 mg·ml-1），依上述方法制成供试液，按标准曲线法进行测定,计算回收率，结果平均回收率为99.64%，RSD为1.92%。
2.12 样品含量测定精密吸取供试品液15 μl，注入液相色谱仪测定，计算样品含量。结果见表1。
表1 样品含量测定（略）
3 讨论
本实验建立了HPLC法测定立克宁肠溶微丸中丁香苦苷含量的方法，该方法具有操作简便、重复性好、结果准确等优点，可为立克宁肠溶缓释微丸质量标准的制定提供依据。
本实验以挤出滚圆制丸和流化床包衣丸芯，该工艺对微丸含量影响较小，3批立克宁肠溶微丸中丁香苦苷含量无显著性差别。
利用HPLC对立克宁肠溶微丸中的丁香苦苷进行含量测定，结果表明该法基线平稳、峰形陡峭无杂质峰干扰，积分准确、精密度高。
【参考文献】
［1］ 卢 丹,李平亚,李静晖.紫丁香叶化学成分研究［J］.中草药,2003,34(8):688.
［2］ Ahmad M., Rizwani G.H. Aftab K., et al. Acteeside: A new antihypertensive drug［J］. Phytother Res,1995,9(6)：525.
［3］ 王艳宏,李永吉,王艳芝,等.紫丁香叶中丁香苦苷的RP-HPLC法测定［J］.中草药,2003,34(3):268．