栀子药材HPLC指纹图谱的研究

摘要：目的：采用高效液相法建立某一特定产地栀子药材的指纹图谱。方法：Hypersil Cl8色谱柱，乙腈-0.05％酸水溶液洗脱，流速1.0ml/min，检测波长238nm。结果对所采集的10批栀子药材进行了测定，色谱图上各峰均得到较好分离，各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积，其精密度和重复性试验均符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中要求。结论本方法可作为控制栀子药材内在质量的标准。
关键词：栀子；高效液相色谱法；指纹图谱
栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminodies Ellis．的干燥成熟果实。性苦寒，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效，为临床上常用中药。现代研究表明，栀子中成分主要为多种环烯醚萜苷类(栀子苷、异栀子苷、去羟栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷、山栀子苷、栀子酮苷、京尼平苷酸等)，有机酸类(绿原酸、3，4-二-0-咖啡酰奎宁酸等)，尚含有色素类(栀子素、藏红花素、藏红花酸等)。
不同产地、气候及采收季节对栀子药材中所含各类成分影响较大，但目前常用的检测栀子质量的方法是对其中的栀子苷含量进行测定，以这种单一成分含量的高低来评价中药质量的优劣有其显在的缺点。我们根据国家药典委员会颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，对浙江缙云产的栀子药材进行了指纹图谱研究，测定了不同年份采收的1O批栀子药材，建立了指纹图谱，作为控制其内在质量的标准。
1 仪器与试剂
Agilent 1100液相色谱仪，VWD紫外-可见检测器，Agilent LC色谱工作站。乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，三氟乙酸(色谱纯)，水(重蒸水)，栀子药材(浙江缙云产，由南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定为栀子Cardenia jasminoides Ellis．)，栀子苷对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号：749—2001O8)
2 实验方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS Cl8(25Omm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05％三氟乙酸水溶液(1O：90)；流速：1.0 mL/min；检测波长：238nm，理论塔板数按栀子苷计，不得低于3000。
2．2 参照物溶液的制备
取于60℃干燥至恒重的栀子苷参照物适量，用流动相制成每1mL含0.5mg的溶液，作为参照物(S)溶液。
2．3 供试品溶液的制备
取栀子药材适量，打粉(过40目筛)，取栀子药材粉0.3g，置25mL量瓶中，加50％甲醇20mL，称重，超声(超声功率为250W，频率为50kHz)提取60min，冷却后补足失重，取上清液5mL至25mL量瓶中，流动相定容至刻度，混匀，用微孔滤膜(O.45μm)过滤，作为供试品溶液。
2．4 方法学考察
对照试验吸取参照物溶液(484μg/mL)10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
(1)精密度试验：取供试品溶液(批号1)，连续进样6次，测得各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积RSD小于5％，表明精密度良好。
(2)重复性试验：取供试品(批号1)6份，精密称定，制备供试品溶液，分别进样，测得各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积的RSD小于5％，表明其重复性试验较好。
(3)稳定性试验：取供试品溶液(批号1)，分别在0，2，4，6，8，12h进样，测得各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积RSD小于5％，表明供试品溶液在12h内稳定。
2．5 栀子药材标准指纹图谱的建立
根据10批供试品溶液HPLC谱给出的相关参数，比较供试品谱图，其中7个峰是各批供试品共有的，因此确定这7个峰为其共有指纹峰。在共有指纹峰中，7号峰(栀子苷峰)最大，选作为S峰，除此外，4号峰和5号峰的峰面积相对较大，故需考虑这两个峰的峰面积比值，其余各共有峰均按其相对保留时间定性。
根据10批栀子药材指纹图谱共有峰的相对保留时间及其主要峰的相对峰面积，计算各自平均值，给出允许范围，建立相应的栀子药材标准指纹图谱。栀子药材HPLC色谱图。
3 讨论
栀子药材中主要含环烯醚萜类成分，亦是其有效成分，其中栀子苷含量最高，且性质稳定，对照品易得，故选择了栀子苷作为参照物。
在采用HPLC进行洗脱时，如果不加酸，其色谱图显示分离效果不理想，推测应是栀子中的酸性成分如有机酸或部分带酸J陛基团的环烯醚萜类成分影响所致，在改用含三氟乙酸的流动相后，抑制了酸性成分的解离，获得的色谱图无论是分离度、分辨率、重现性与稳定性均较理想。曾对不同产地的栀子药材指纹图谱作过比较，其差异较大，7个共有峰相对保留时间符合程度较好，但相对峰面积相差较大，提示栀子用药应在固定产地的前提下，才能保证药品的一致性。