重组质粒的提取

　　质粒提取过程参照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit进行。

　　（1） 用无菌牙签挑取平板上白色单菌落(5~10个)分别接种至3-5ml LB培养液(Amp+)中,200rpm培养14~16小时；

　　（2） 室温下，10,000g离心1分钟收菌；

　　（3） 加入溶液I 250μl，涡旋重悬菌体；

　　（4） 加入溶液II 250μl，温和倒转4~6次混匀，室温放置2分钟

　　（5） 加入350μl溶液III，温和倒转至有白色絮状沉淀产生，室温下，10,000g离心10分钟；

　　（6） 转移上清液于分离柱中，室温下，10,000g离心1分钟；

　　（7） 倒弃流出液，加入500μl HB Buffer，室温下，10,000g离心1分钟

　　（8） 倒弃流出液，加入750μl Wash Buffer，室温下，10,000g离心1分钟，倒弃流出液，重复此步骤一次；

　　（9） 室温下，10,000g离心1分钟，以去除分离柱中残余的乙醇

　　（10） 将分离柱重新放入一个干净的1.5ml离心管中，加入30~50μl灭菌水，静置3-5分钟，定温下，10,000g离心1分钟以洗出质粒DNA，-20℃保存。