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PRINS步骤

来源:医学加加
摘要:2mol/L盐酸处理5min。3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃15min。5、加PCR混合液25μL(10mmol/LTris-HCl,50mmol/LKCl,1。5mmol/LMgCl2,各加200μmol/LdATP,dCTP,dGTP,1。...

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  1、常规脱蜡浸入0.01mol/LPBS;

  2、用0.2mol/L盐酸处理5min;

  3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min;

  4、分别用80%,95%和100%酒精脱水,室温干片;

  5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,各加200μmol/L dATP,dCTP,dGTP,1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl,引物250ng,Taq DNA聚合酶2U),加盖片;

  6、94℃变性5min后置入65℃湿盒中5min;

  7、用0.1×SSC液,65℃洗5min;

  8、片于65℃ 10s~20s;用4×SSC-0.1%吐温20液42℃洗5min,2次;

  9、经Buffer I液洗后滴加20%羊血清封闭30min;

  10、加地高辛抗体复合物(1:500)室温下2h;

  11、BufferⅢ液洗5min;

  12、用BCIP-NBT显色1h~2h,在镜下控制,终止显色;

  13、用中性红或核固红衬染,酒精脱水,二甲苯透明,树脂封片。

作者: 2007-9-25
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