摘要:增加PCR的特异性:1。理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件a。当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b。附加序列(RTsite,Promotersequence)加到...
07-09-25摘要:引物设计有3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。引物设计应注意如下要点: 1 引物的长...
07-09-25摘要:薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上,形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。1.薄层层析的特点:薄层层析在应用与操作方面的特点与...
07-09-25摘要:(一)吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系:液一固吸附层析是运用较多的一种方法,特别适用于很多中等分子量的样品(分子量小于1,000的低挥发性样品)的分离,尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子量样品如蛋白质...
07-09-25摘要:(一)聚乙二醇沉淀法质粒DNA这里介绍的方法(R。Tresman,个人通讯)已卓有成效地用于纯化碱裂解法制备的质粒DNA。1)将核酸溶液[上页步骤9)所得]转入15mlCorex 管中,再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶...
07-09-25摘要:(一)在丰富培养基中扩增质粒许多年来,一直认为在氯霉素存在下扩增质粒只对生长在基本培养基上的细菌有效,然而在带有pMBl或ColEl复制子的高拷贝数质粒的大肠杆菌菌株中,采用以下步骤可提高产量至每500ml培...
07-09-25摘要:3)吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥。当液体从管中吸出时,尽可能使吸头远离细菌沉淀,然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。3)吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥。当液体从管中吸出时,尽可能使吸头...
07-09-25摘要:(一)细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长),然后从中纯化质粒,质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)都能复制到很高的拷...
07-09-25摘要:核酸杂交是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双边结构。杂交通常在一支持...
07-09-25摘要:组织中总RNA的提取 ↓利用反转录酶合成cDNA ↓PCR反应:反应液组织:反应缓冲液 模板(上述合成的cDNA)底物(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)引物(爱滋病病毒特异性引物)TaqDNA聚合酶50μl循环:95℃,30sec(变性)↓5...
07-09-25摘要:凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处...
07-09-25摘要:(一)差速离心法它利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。操作过程中一般是在离心后用倾倒的办...
07-09-25摘要:等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理在IEF的...
07-09-25摘要:以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径...
07-09-25摘要:醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓...
07-09-25摘要:质谱方法(Mass Spectroscope,MS)是通过正确测定蛋白质分子的质量而进行蛋白质分子鉴定、蛋白质分子的修饰和蛋白质分子相互作用的研究。质谱仪通过测定离子化生物分子的质荷比便可得到相关分子的质量。但长期以来,...
07-09-25摘要:1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂1)、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件,2)、PBS缓冲液,TRIZOL试剂,3)、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1。5 ml EP管,4)、新的氯仿、异丙醇和乙醇...
07-09-25摘要:RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 PCR,按常规。1)RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列。必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers。
07-09-25摘要:1 DNA方阵的构建选择硅片、玻璃片、瓷片或聚丙烯膜、尼龙膜等支持物,并作相应处理,然后采用光导化学合成和照相平板印刷技术可在硅片等表面合成寡核苷酸探针。(2)或者通过液相化学合成寡核苷酸链探针,或PCR技...
07-09-25摘要:当生物芯片和样品探针杂交完毕后,就需要对杂交结果进行图象采集和分析。一般膜芯片的杂交都用同位素p32、p33作标记,其信号的检测需通过传统的磷光成像系统来完成。 磷感屏成像系统Cyclone Storage Phosphor Sys...
07-09-25摘要:互补杂交要根据探针的类型、长度以及研究目的来选择优化杂交条件。如用于基因表达检测,杂交时需要高盐浓度、样品浓度高、低温和长时间(往往要求过夜),但严谨性要求则比较低,这有利于增加检测的特异性和低拷贝基...
07-09-25摘要:摘要制作芯片和获得芯片的数据有许多不同的方法。这里我们介绍了在学术领域中两种芯片的构建和使用。除了详细说明了技术细节外,我们还对组成和方法的优缺点进行了评论,同时还介绍了杂交的方法。用我们所建立和使...
07-09-25摘要:生物芯片是目前生物技术中主要的技术之一。研究人员从计算机技术中借用了微型化、整合、平行化处理的技术来发展在芯片上的实验室装置和处理过程。一般地,在芯片上的靶标是有序排列的样本,如cDNA,寡核苷酸或者蛋...
07-09-25摘要:质谱分析资料点击下载。
07-09-25摘要:核磁共振分析资料点击下载。
07-09-25摘要:四级结构分析点击下载。
07-09-25摘要:在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的...
07-09-25摘要:摘要:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度...
07-09-25摘要:普通电泳的电压一般为2V/cm~20V/cm,电泳时间需1小时至数小时。对于一些小分子的物质如核苷酸、氨基酸、多肽等,在常压电泳中,往往达不到分离的目的。高压电泳则能使分子量相近的物质充分地进行分离。在高压电泳...
07-09-25摘要:(一)原理等电聚焦技术是一种根据样品的等电点不同而使它们在pH梯度中相互分离的一种电泳技术。本法的分辩率极高,所以在进行等电聚焦电泳时,要求样品不能过于复杂,一般应经其他方法(如层析法)提纯后再进行等...
07-09-25摘要:(一)原理转移电泳是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出的蛋白质谱直接转移到硝酸纤维膜上,而形成固定相,并同时排除各种干扰物质,保持其天然构象和生物学活性,完成在凝胶中难以进行的各种生物试验。89mMol/L Tris...
07-09-25摘要:(一)基本原理混合样品的气流通过固定相时,根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。(二)气相色谱仪的基本部件1.载...
07-09-25摘要:(一)原理亲和层析是一种吸附层析,抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。05Mol/L时,对蛋白质几乎没有非特异性吸附。1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl处理2h~3h及...
07-09-25