摘要:凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广,商品名是sephadex型号很多,从G10到G200,它的主要应用范围...
07-09-25摘要:离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相,以蛋白质等样品为移动相,分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。(一)原理 在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团,...
07-09-25摘要:蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。(一)透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 0...
07-09-25摘要:(一)双缩脲测定法1.原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应,在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物,在一定的范围内,颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。2.试剂配制 硫酸铜(CuSO4·5H2O)1。0ml10%氢氧化钠...
07-09-25摘要:匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量。通常,板的质量对薄层鉴别的影响不是很大,影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。这样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明...
07-09-25摘要:一、实验目的本实验以酵母RNA为材料,将RNA用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离,最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过测定各单核苷酸的含量,可以计算出酵母RNA的碱基组成。掌握离子交换柱层析的分...
07-09-25摘要:甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母,主要有H。Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris三种,其中Pichia Pastoris作为基因表达系统使用...
07-09-25摘要:RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因...
07-09-25摘要:一、质粒DNA的提取及鉴定(一)质粒DNA的提取及鉴定1.收获细菌(1)将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中,接入一单菌落,于37℃剧烈振荡培养过夜。5ml培养物倒入1。5ml离心管中,用台式...
07-09-25摘要:一个DNA碱基对(钠盐)的平均分子量 = 650 道尔顿1。0 A260 unit ds DNA = 50 µ。0 A260 unit ss DNA = 33 µ。0 A260 unit ss RNA = 40 µ。
07-09-25摘要:气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果,而必须由已知标准作对照定性。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上,引入了气相色谱的理论与技术,在70年代初建立了高效液相色谱分析法(以HPL...
07-09-25摘要:色谱法,又称层析法。根据其分离原理,有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同,用溶剂或气体洗脱,以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝...
07-09-25摘要:随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展,NDA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是,作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质,其相当部分...
07-09-25摘要:定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量。广义概念下的定量PCR技术...
07-09-25摘要:摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法,主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中,其中对具有一定生物活性的多肽的研...
07-09-25摘要:凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。一、琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度,把...
07-09-25摘要:选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物...
07-09-25摘要:FISH试剂(1)1×PBS:由10×PBS溶液稀释而成,储存于4℃。(4)25mg/ml蛋白酶K消化液。0):4ml 20×SSC。8ml蒸馏水。
07-09-25摘要:(一)、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤1)预处理:(1)切片常规脱蜡。2mol/L HCl处理10min。(3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min。
07-09-25摘要:2ml,H20 定容0。33ml,H20 定容0。5ml/L醋酸-2。5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13。
07-09-25摘要:一、建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1...
07-09-25摘要:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形...
07-09-25摘要:真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。这种结构为真核mRNA的提取...
07-09-25摘要:核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本...
07-09-25摘要:在基因表达研究中,研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统,而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现,如消除稀有密码...
07-09-25摘要:关键词:蛋白质复性。环糊精。分子伴侣 重组DNA技术为大规模生产目标蛋白质提供了崭新的途径。因此,为获得天然状态的目标产物,必须在分离回收包含体后,溶解包含体并设法使其中的目标蛋白质恢复应有的天然构象和...
07-09-25摘要:[摘要] 本文对蛋白质折叠这一古老的领域的最新发展,尤其是分子伴侣的机理作了一番探讨,对一些新观点和新的实验事实作了介绍,并对一些实验实事作了一些思考,并提出了一些自己的看法。同时预测了结构生物学及技...
07-09-25摘要:摘要许多不相关的蛋白质含有相同的短肽序列却形成不同的空间构象。 结构转换广泛存在于蛋白质折叠和功能过程中, 具有重要的生物学意义。 综述了Serpin和EF-Tu的失活、血细胞凝集素的激活、蛋白酶成熟、亚基装配和...
07-09-25摘要:摘要 基因重组蛋白在大肠杆菌中表达时,由于表达量高,往往形成无生物活性的包涵体。包涵体必须经过变性和复性的过程才能获得有活性的重组蛋白。如何提高基因重组蛋白质的复性率,是生物工程技术的一个研究热点。...
07-09-25摘要:摘要 综述了包涵体形成、包涵体分离和溶解、包涵体折叠复性的方法、复性产率低下的主要因素以及通过分子伴侣、低分子量添加物等的应用而提高了蛋白质复性产率。关键词 包涵体 蛋白质 复性Abstract Strategies for...
07-09-25摘要:随着分子生物学技术的发展,检测基因结构和突变的方法不断涌现。但这些方法操作比较繁琐,局限性较大,或要求实验条件高,不适合一般临床实验室使用。1989年问世的PCR-SSCP(下文称SSCP)作为检测基因突变的方法,经...
07-09-25摘要:用来记录各种射线的数目,测量射线强度,分析射线能量的仪器统称为探测器(probe)。测量射线有各种不同的仪器和方法,正如麦凯在1953年所说:“每当物理学家观察到一种由原子粒子引起的新效应,他都试图利用这种...
07-09-25摘要:放射性的来源扔天然的放射性和人工放射性两类。生活在地球上的人们经常受到这两种放射性的照射,天然放射性即木底照射是不可避免的,而人工放射性的应用产生了放射性危害,因而引起放射性防护问题。一、放射性的危...
07-09-25摘要:同位素示踪法(isotopic tracer method)是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法,示踪实验的创建者是Hevesy。Hevesy于1923年首先用天然放射性212Pb研究铅盐在豆科植物内的分布和转移。继后...
07-09-25摘要:一、放射性同位素的特点众所周知,放射性同位素(radiosotlope)是不稳定的,它会“变”。放射性同位 素的原子核很不稳定,会不间断地、自发地放射出射线,直至变成另一种稳定同位 素,这就是所谓“核衰变”。放射...
07-09-25摘要:为克服此基因敲除方法的局限性,进一步获得关于活性基因突变的信息,Fred Hutchinson癌症研究中心的研究者们发明了一种定向诱导基因组局部突变(TILLING: Targeting Induced Local Lesions In Genomes)技术。该...
07-09-25摘要:1 电泳技术发展简史 1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。 1...
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