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细胞培养-冷冻细胞活化

来源:医学加加
摘要:冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。1操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。2自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀......

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  1.冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。

  2.细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。

  3.材料

  3.137 oC恒温水槽

  3.2新鲜培养基

  3.3无菌吸管/离心管/培养瓶

  3.4液氮或干冰容器

  4.步骤:

  4.1操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。

  4.2自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。

  4.3将新鲜培养基置于37°C 水槽中回温,回温后喷以70% 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。

  4.4取出冷冻管,立即放入37°C 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,以70% ethanol擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。

  4.5取出0.9ml 解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10~1:15),混合均匀,放入CO2培养箱培养。另取0.1ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。

  4.6解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol),依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml 培养基之离心管内,离心1,000rpm, 5分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入CO2培养箱培养。

  4.7若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。 

作者: 2007-9-25
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