点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨高血压脑出血患者血肿周围组织血管内皮生长因子的表达及其与血肿周围脑水肿形成的关系。方法 取34例脑出血患者行微创血肿抽吸术，抽吸过程中获得的血肿周围脑组织，采用免疫组织化学技术测定其血管内皮生长因子(VEGF)的表达；根据术前头颅CT测量脑出血患者血肿周围脑水肿带的大小，用双盲法对染色结果及术前脑水肿的体积进行分析。结果 脑出血后4 h，血肿周围组织已出现VEGF的表达，脑出血后４８～７２ h，VEGF的表达达到高峰。VEGF表达强阳性组、弱阳性组、阴性组之间比较，脑水肿体积的差异有显著意义(Ｐ＜０.０１）。结论 VEGF在高血压脑出血血肿周围组织中表达上调，可能参与了血肿周围脑水肿的形成。
【关键词】 脑出血；血肿周围脑水肿；血管内皮生长因子
Expression of vascular endothelial growth factor in perihematomal brain tissue in patients with hypertensive cerebral hemorrhage
LIU Qingxin SU Changhai ZHANG Suming
Department of Neurology,Affiliated Hospital of Binzhou Medical College,256603,Shandong,China
【Ａbstract】 Ｏbjective To investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) in perihematomal brain tissue and its correlation with formation of brain edema in patients with hypertensive cerebral hemorrhage.Methods Expressions of VEGF in perihematomal brain issue which collected in the course of minimally invasive surgery was detected by imunohistochemical techniques in 34 patients with hypertensive cerebral hemorrhage.The volume of perihematomal brain edema on computed tomographic scan was determined before surgery.The results of staining and the volume of perihematomal brain edema were analyzed in double blind fashion.Results expression of VEGF in perihematomal brain tissue existed at 4 h and reached peak at 48~72 h after cerebral hemorrhage.There were obvious difference in volume of perihematomal brain edema with different expression of VEGF in perihematomal brain tissue (P＜０.０１)．Ｃonclusion The expression of VEGF is upregulated in perhematomal brain tissue in patients with hypertensive cerebral hemorrhage,suggesting that VEGF may participate in formation of perihematomal brain edema.
【Key words】 cerebral hemorrhage，perihematomal brain edema，vascular endothelial growth factor
动物实验研究表明，应用VEGF治疗脑梗死，能促进缺血区血管形成，减轻脑水肿，具有脑保护作用［１，２］。人类脑出血后血肿周围组织VEGF的表达及其作用未见研究报道。我们利用免疫组织化学技术测定高血压脑出血患者血肿周围脑组织血管内皮生长因子的表达，并探讨VEGF的表达与脑水肿形成的关系。
1 临床资料
1.1 病例与组织标本 选自2001年9月至2002年9月住院行微创血肿抽吸术治疗的脑出血患者。入选标准：符合1995年全国第四届脑血管病学术会议制定的高血压脑出血诊断要点，均经脑CT或MRI证实。脑出血量25～８０ ｍｌ，年龄35～７５岁，发病72 h内住院行微创血肿抽吸术治疗。排除标准：脑外伤致出血，使用抗凝剂致脑出血，肿瘤、脑血管畸形致出血，混合性中风或出血性梗死，合并严重心肝肾功能衰竭、糖尿病、严重肺部感染者。根据以上原则，共收集脑出血患者34例(其中男23例，女11例)，年龄(55.6±１０.２)岁，出血量平均(50.4±11.6)ｍｌ。微创手术采用北京万福特科技有限责任公司生产的YL- １型一次性使用颅内血肿粉碎穿刺针，病理取块均为手术过程中引流出的脑组织，不违反伦理道德，根据穿刺针进针深度可以判断病理取块均在出血灶外侧。手术中的病理取块立即浸入4%的多聚甲醛中固定，石腊切片，５μｍ厚，连续切片。
１．２ 脑水肿大小的测量 所有患者入院时均经脑CT检查，有2名医生根据多田公式［体积(ｍｌ）＝π／６×长(cm)×宽(cm)×层面(cm)］计算病灶体积(包括血肿和周围水肿)及血肿量。血肿周围脑水肿体积(ml)=病灶体积－血肿体积。
1.3 免疫组织化学染色及结果判断 采用北京中山生物技术公司的兔抗人血管内皮生长因子多克隆抗体检测试剂盒进行免疫组化染色。利用双盲法对VEGF的染色结果及脑水肿的体积进行分析。VEGF的染色：阳性细胞的细胞浆染色棕黄色。每张切片选择5个视野，在200倍显微镜下分别连续计数100个细胞，以其阳性细胞数的百分比，将其分为三级：阴性，未见阳性细胞；弱阳性，阳性细胞数＜20%；强阳性，阳性细胞数＞20%。
1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行F检验及精确χ２检验，P＜０.０５为差异有显著性。
２ 结果
２．１ 脑出血后不同时间段血肿周围组织VEGF表达 我们观察到，脑出血后4 h，可见血肿周围已出现散在VEGF表达阳性细胞，以神经元为主，也可见中性粒细胞和内皮细胞。随着出血时间延长，表达VEGF的血管内皮细胞明显增多。为更好地观察与了解脑出血急性期血肿周围脑组织VEGF表达量的变化，我们将本组资料按手术时间不同分为三组：第一组为出血后24 h以内；第二组为脑出血后24～４８ h；第三组为脑出血后48～７２ h。脑出血后48～７２ ｈ组与脑出血后24 h组比较，VEGF的阳性表达率有明显差异(Ｐ＝０.０４)，见表1。
表1 脑出血后不同时间段血肿周围组织VEGF表达时间段（略）
２．２ 血肿周围组织VEGF表达与脑水肿 34例患者中VEGF强阳性表达16例、弱阳性表达13例、阴性表达5例。VEGF表达强阳性组、弱阳性组、阴性组之间比较，脑水肿体积的差异有显著意义(F＝５.７６，Ｐ＜０.０１），见表2。
表2 血肿周围组织VEGF表达与脑水肿之间的关系(略)
3 讨论
脑出血后进行性脑水肿是导致神经功能进行性恶化甚至死亡的重要因素之一，脑水肿的产生机制非常复杂［３，４］。由于人类脑出血样本获得困难，目前关于脑水肿产生机制的研究大多以动物实验为基础。本实验的研究对象均为急性脑出血患者，由于是微创手术中取材，部位均在出血灶外侧，在一定程度上可以代表人类急性脑出血血肿周围半暗带的病理变化。在正常情况下，脑内无VEGF表达，但各种应激反应条件都可诱导VEGF的表达，其中缺血缺氧强烈诱导VEGF在各类细胞中的表达［５］。本研究结果显示在出血灶周围的缺血区内，早期表达VEGF的细胞主要为神经元，也可见中性粒细胞和内皮细胞；后期以血管内皮细胞和胶质细胞增多明显。提示脑出血后血肿周围区因缺血缺氧刺激神经元、炎性细胞、内皮细胞和胶质细胞等共同表达VEGF。动物实验研究表明，应用VEGF治疗脑梗死，能促进缺血区血管形成，减轻脑水肿，具有脑保护作用［１，２］。而本研究表明，血肿周围组织VEGF表达量与脑水肿的体积有重要关系，VEGF可能参与了血肿周围脑水肿的形成。VEGF参与血肿周围脑水肿形成的机制可能是：VEGF能显著增加血管通透性，破坏正常脑组织血脑屏障；另一方面，VEGF能特异性作用于内皮细胞，促进血管形成，而新生血管缺乏完善的血脑屏障，导致血浆渗漏引起。我们的研究结果与动物实验结果不符，我们推测：VEGF发挥的作用可能与VEGF的表达量有关；另外，VEGF在脑出血后的不同阶段可能发挥不同的作用：脑出血早期主要是增加血管通透性，破坏血脑屏障，促进脑水肿，加重脑损伤；急性期后则主要是保护作用，促进脑损伤的愈合，但其具体的作用机制有待于进一步研究。
参 考 文 献
１． Sun Y,Jin K,Xie L,et al.VEGF- induced neuroprotection,neurogenesis,and angiogenesis after focal cerebral ischemia［J］．Ｊ Clin Invest,2003,111(12):１８４３
２． Harrigan MR,Ennis SR,Sullivan SE,et al．Ｅffects of intraventricular infusion of vascular endothelial growth factor on cerebral blood flow,edema,and infarct volume［Ｊ］．Ａcta Neurochir (Wien),2003,145(1):49
３． Ｍayer SA,Lignelli A,Fink ME,et al.Perilesional blood flow and edema formation in acute intracerebral hemorrhage:a SPECT study［Ｊ］．Ｓtroke,1998,29:1791
４． Kein R,Nobuguki KG,Seoung K,et al.Mechanisms of edema formation after intracerebral hemorrhage［Ｊ］．Ｊ Neurosurg,1997,86:272
５． Marti HH,Risau W.Systemic hypoxia changes the organ- specific distribution of vascular endothelial growth factor and its receptors［Ｊ］．Ｐroc Natl Acad Sci,1998,95:15809
1 滨州医学院附属医院神经内科 滨州市 256603；2 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科