子宫腺肌病患者诱生型一氧化氮合酶表达的研究

【关键词】  子宫腺肌病;子宫内膜;诱生型一氧化氮合酶;免疫组织化学

子宫腺肌病是妇科常见病，以在子宫肌壁内出现子宫内膜腺体和间质为其病变征，此病多发生于30～50岁经产妇，临床上往往以子宫增大、痛经和月经过多为其主要症状。近年来对该病的发生机制提出一些新的看法，关于血管生成、免疫等方面的异常在子宫腺肌病的发生发展中起重要作用。子宫内膜侵入子宫肌层后，血管生成活性的增强，为异位内膜的种植生成提供了有利条件[1]。NO可诱导血管内皮细胞的分裂增生，调节血管生成及血流量， 由此推测可在子宫腺肌的发生发展中发挥作用。所以本研究用免疫组化的方法，测定子宫腺肌病患者在位内膜与异位内膜诱导型一氧化氯合酶(iNOS)的含量， 旨在探讨其在子宫腺肌病的发生发展过程中所起的作用和意义，为临床治疗提供理论依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 标本来源 材料均取本院2006年9月—2008年3月手术切除并有完整临床资料的子宫标本，腺肌病组:子宫腺肌病38例，患者年龄35～49岁，平均年龄38.9岁;子宫内膜组织学分期:增生期20例，分泌期18例。肌瘤组 :无症状子宫肌瘤31例，38～51岁，平均年龄43.2岁;子宫内膜组织学分期:增生期17例，分泌期14例两组患者术前3个月内均未服用任何激素类药物。所有病例均行子宫全切或次全切除术，并经病理诊断证实。即用型SABC免疫组织化学染色试剂盒(产品编号:SA1022)为武汉博士德生物工程有限公司产品。

　　1.2 方法 石蜡切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS液洗5 min,3%H2O2 5 min,PBS洗5 min;10%山羊血清室温10 min;一抗(1∶50)，冰箱4℃过夜，PBS洗5 min;二抗(1∶150)37℃温箱30 min,PBS洗5 min;SABC 30 min,PBS洗5 min;DAB显色5 min,自来水冲洗;苏木素复染，脱水透明，封片。

　　1.3 结果判定 结果判断标准[2]以细胞浆出现黄色颗粒为阳性，表达强度用组织学评分表示。组织学评分为ΣPi，其中i代表细胞浆染色强度，分为4级:0级无黄色颗粒，1级为淡黄色颗粒，2级为黄色颗粒，3级为棕色颗粒;P代表同一染色强度细胞所占计数细胞百分数，1、2、3、4、5分别代表染色细胞占计数细胞总数的0%～15%、16%～50%、51%～85%、86%～95%、96%～100%。每张切片随机测定5个高倍镜视野(200倍)的染色强度，取5个视野的组织学评分均值作为最终得分。

　　1.4 统计学处理 实验结果用x±s表示，采用方差分析和两两比较t检验，P<0.05为有显著性差异。

　　2 结果

　　iNOS在正常或异位内膜腺上皮都有阳性表达，两组的血管平滑肌也有阳性表达，而在间质细胞及子宫平滑肌细胞均未见阳性表达。

　　2.1 腺肌病组在位子宫内膜与肌瘤组子宫内膜iNOS组织学评分比较 腺肌病组增殖期或分泌期子宫内膜与肌瘤组比较，腺上皮iNOS组织学评分无明显变化，两组比较，差异无显著性(P>0.05)。同时，两组子宫内膜腺上皮的增殖期和分泌期iNOS组织学评分比较，差异无显著性(P>0.05)，即无周期性变化，见表1。表1 两组患者正常内膜 、异位内膜腺上皮细胞iNOS组织学评分比较 注 :*与 肌 瘤 组 正常内膜比较，P>0.05 ，▲与在位内膜比较，P<0.05 ，△与同 组 增 殖 期比较P>0.05

　　2.2 腺肌病组在位内膜与异位内膜iNOS组织学评分比较 腺肌病组增殖期或分泌期异位内膜腺上皮细胞iNOS组织学评分均较在位内膜显著增加，两者比较，差异有显著性(P<0.05)。异位内膜、在位内膜及正常内膜各组内增殖期和分泌期比较均无明显差别，即无周期性变化。两者比较差异无显著性(P>0.05)，见表1。

　　2.3 腺肌病组与肌瘤组血管平滑肌iNOS组织学评分比较 腺肌病组血管平滑肌细胞iNOS组织学评分(8.6±1.3)较肌瘤组血管平滑肌细胞iNOS组织学评分(3.5±1.4)显著增加，两者比较，差异有显著性(P<0.05)。

　　3 讨论

　　内源性NO是由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)以L精氨酸为底物，在还原型辅酶Ⅱ(NADPH)存在下生成，催化该反应的NOS有两种同工酶，即结构型NOS(constitutive NOS,cNOS)和诱生型NOS(inducible NOS,iNOS),前者合成的NO含量很小，主要参与人体的正常生理活动，主要存在与内皮细胞，神经原细胞，肾上腺皮质细胞和血小板等。机体内iNOS催化产生大量NO主要参与机体的病理生理过程，本研究结果显示，腺肌病患者在位子宫内膜与子宫肌瘤患者子宫内膜iNOS的表达强度无明显差异，均无周期性变化。腺肌病患者异位内膜iNOS的表达强度显著高于其在位内膜。另外Schindl等[1]研究发现在子宫腺肌病中，在位内膜微血管密度与正常内膜间无差异，而异位内膜则高于在位内膜和正常内膜，且在月经周期中无改变，与本研究结果一致，说明子宫内膜在侵入子宫肌层后，血管生成活性增强。

　　另外本研究结果显示，在腺肌病组，血管平滑肌iNOS表达强度高于肌瘤组，表明NO还通过血管扩张作用，增加血流量，为异位内膜种植提供条件。子宫内膜异位种植后，由于生理特性的改变[3]，可通过自分泌细胞因子诱导iNOS产生增强而调节NO的合成。杨丹等[4]的实验结果提示，雌激素与ER结合后，可能通过增加血管平滑肌细胞的iNOS的活性和蛋白的表达，促进其生成和释放NO增加。另外，NO可诱导内皮细胞的分裂、增生，调节血管形成为异位内膜的形成创造条件。没有NO，生长中的肿瘤大小会因血供缺乏而受到限制[5]，也从另一方面提示了血管生成在腺肌病中的重要作用。总之，在腺肌病的发病过程中，异位内膜iNOS的高表达，致使NO合成量增加，血管扩张，并利于血管形成，增加血流量，为子宫内膜的异位种植和生长提供了有利条件。

【参考文献】
  　[1] Schindl M,Birner P, Obermair A,et al.Increased microvessel density in adenomyosis uteril[J].Fertil Steri1,2001,75(1):131135.

　　[2] 沈育红，唐中国，喇端端.VEGF165 在异位、在位和正常子宫内膜中的表达[J].中国微循环，2004,8(10)：304306.

　　[3] 汪玉宝，曹斌融，杜心谷.子宫内膜异位症的研究近况[J].国外医学妇产科学分册， 1995,24(1)：8891.

　　[4] 杨丹，付晓东，李永，等.诱导型一氧化氮合酶在17β雌二醇诱导的血管平滑肌细胞周期阻滞中的作用[J].生理学报，2003,55(2)：1722.

　　[5] Ambs S,Bennet WP,Meriam WG,et al.Frequent nitric oxide synthase2 expression in human colon adenomas:implication for tumor angiogenesis and colon cancer progression[J].Cancer Res,1998,58:334341.