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【摘要】 目的 研究重组人生长激素（rHGH）对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响。 方法 雄性BALB/C小鼠45只术前24h一次性皮下注射环磷酰胺（CTX）100mg/kg,然后行人直肠癌小鼠肾被膜下移植术(SRCA)，随机分成rhGH1组、rhGH2组每日皮下注射rhGH 3IU/kg，联合组、化疗组和对照组连续用药7d。各组小鼠随机留3只待其自然死亡，观察其生存期，余小鼠术后10d处死，观察小鼠外周血细胞数、体重、移植瘤末初体积差（△TS）、抑瘤率（IR）及（HE染色）组织学变化。 结果 联合组及化疗组移植瘤△TS及IR比前三组差异有显著性（P＜0.01）；联合组和化疗组平均生存期显著高于对照组(P＜0.05)；联合组白细胞数值显著高于化疗组（P＜0.05）；对照组和rhGH各组的组织病理形态相似,而联合组和化疗组表现为实质细胞减少，间质增多。 结论 rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长无明显促进作用；rhGH和化疗药联用对化疗药的抑瘤作用无明显影响、可减轻化疗药的骨髓抑制反应；二者联用可延长实验小鼠的生存期。
【关键词】 重组人生长激素 环磷酰胺 肾被膜下移植法 化疗
Effect of recombinant human growth hormone on the growth of rectal cancer in SRCA.
WU Jun-zheng, TANG Ji-ao, LI Han-xian.
(The Fifth Affiliated Hospital of Jinan University, Qingyuan 511500, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To investigate the effect of rhGH on the growth of rectal cancer in SRCA. Methods Forty five male mice BALB/C subcutaneously injected with CTX 100mg/kg per mouse before operation, were randomly divided into five groups. SRCA was carried out simultaneously with fresh explants of human carcinoma of rectum in all animals. From the first to the seventh day after surgery, rhGH1 group received i.h. rhGH 1IU/kg daily, rhGH2 group received i.h. rhGH 3IU/kg daily, rhGH+5-FU group received i.h. rhGH 1IU/kg daily and i.c 5-FU 20mg/kg, 5-FU group received i.c. 5-FU 20mg/kg daily. While control group daily received i.h. 0.2ml and i.c. 0.5ml sterile saline. The body weights of the animals were measured every other day. On the 10th day after surgery, 6 mice in each group were executed to observe the blood routines, △TS, IR and the differences of HE dyeing, while the others were fed till death to obverse survival time. Results The △TS and IR of rhGH1+5-FU group and 5-FU group distinctly decreased as compared with that of control group, rhGH1 group and rhGH2 group (P＜0.01). The lifespan of animals in rhGH1+5-FU group and 5-FU group significantly increased as compared with that of NS group （P＜0.05). The number of white cells of rhGH1+5-FU group remarkably increased compared with 5-FU group （P＜0.05). Compared with that of rhGH1 group and rhGH2 group more interstitial tissue and less parenchyma cells were noticed in rhGH1+5-FU group and 5-FU group. Conclusion In vivo rhGH does not obviously stimulate the growth of the transplanted tumor of rectal cancer in SRCA. The inhibited effect of 5-FU on the transplanted tumor could not be significantlyaffected by rhGH. The rhGH combined with 5-FU can offset the adverse effect of 5-FU on the blood of animals and elongate the lifespan of tumor bearing mice.
Key words：Recombinant human growth hormone；
近年来大量临床研究资料表明，rhGH能改善机体的异常代谢状态，促进蛋白合成，提高机体的免疫力，减少并发症，提高手术成功率，因此术后病人运用rhGH加上营养支持倍受外科医生的青睐。但rhGH能否运用于恶性肿瘤病人，至今尚无统一认识，使众多学者和临床医生感到担心的是rhGH可能存在潜在促进肿瘤细胞有丝分裂和肿瘤增长的效应。本研究初步探讨rhGH及其与5-FU联用对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响。
1 材料和方法
1.1 动物、标本来源 近交系BALB/c雄性小鼠45只，6～8周龄，重18～24g，从中山大学动物中心购入。手术新鲜标本来自南华大学附属一医院肿瘤外科住院病人，术前经纤维结肠镜确诊为：直肠癌。
1.2 药物及仪器 注射用重组人生长激素由安科公司提供；JSZ7型体视显微镜由南京江南光电公司购入。
1.3 动物实验 将45只雄性BALB/c小鼠随机分为五个小组（n=9）：对照组、rhGH1组、rhGH2组、联合组（rhGH1+5-FU）及化疗组（5-FU）。术前24h为各组小鼠一次性皮下注射CTX100mg／kg，建立CTX免疫抑制小鼠模型。经证实为直肠癌的手术新鲜标本离体后，快速送往实验室，将其切割成约1mm3的小块置入含青霉素、链霉素的RPMI l640液无菌广口瓶中低温保存备用。实验小鼠经全麻成功后参照Bogden［1］法行肾被膜下肿瘤移植。标本移植成功后，随即用带有测微尺目镜体视显微镜原位测量移植块大小，记录其长(L)宽(W)径，单位为mm，按公式V=L×W2/2计算体积。术后第1d开始用药，连续7d。rhGH1组每日皮下注射rhGH 1IU/kg，rhGH2组每日皮下注射rhGH 3IU/kg，联合组每日皮下注射rhGH 1IU/kg及腹腔注射5-Fu 20mg/kg，化疗组每日腹腔注射5-Fu 20mg/kg，对照组每日皮下及腹腔分别注射NS 0.2ml和0.5ml。隔天为小鼠称重1次；各组小鼠随机留3只待其自然死亡，记录平均生存时间，余小鼠术后10d处死，再次同法测量并计算移植瘤末体积，计算出移植瘤△TS和IR。处死小鼠之前采血测血常规。移植瘤HE染色观察组织学变化。
1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。检验水准，设ɑ=0.05，P＜0.05认为差别有显著性意义。
2 结果
2.1 各组小鼠移植瘤△TS和IR 各组小鼠移植瘤△TS和IR的变化见表1。经统计分析，对照组、rhGH1组和rhGH2组各组移植瘤△TS和IR之间无统计学意义（P＞0.05）；而联合组和化疗组分别与上述三组比较，移植瘤△TS和IR差异有显著性（P＜0.01）；而该二组间△TS无统计学意义（P＞0.05）。
表1 各组移植瘤△TS（x±s）及IR（%）的变化（略）
注：与对照组及rhGH各亚组△TS及IR比较，P＜0.01。
2.2 体重变化 各组小鼠不同时间体重变化见表2。表2提示，虽相同时间各组小鼠之间体重无统计学意义（P＞0.05）；但应用组内用药前后配对t检验统计分析，发现rhGH1组、rhGH2组及联合组小鼠手术后体重明显增加（P＜0.05）。
表2 不同时间各组实验小鼠体重的变化（略）
注：与同组术前1d比较，★P＜0.01，◇P＜0.05。
2.3 荷瘤小鼠生存期及外周血的变化 各组荷瘤小鼠平均生存时间经两两比较,联合组、化疗组的平均生存期显著高于对照组（P＜0.05）,而该两组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。联合组、化疗组平均白细胞数均低于对照组和rhGH各组,差异有统计学意义(P＜0.01)，而联合组白细胞数显著高于化疗组（P＜0.05）。rhGH1组、rhGH2组血红蛋白含量显著高于对照组（P＜0.05），联合组血红蛋白含量显著高于化疗组（P＜0.05）。
表3 rhGH及其和5-FU联用对各组小鼠生存期、外周血的影响（略）
注：与对照组比较,P＜0.05;与对照组和rhGH各组比较,☆P＜0.01;与5-FU组比较，▲P＜0.05;与对照组比较,◆P＜0.05;与5-FU组比较,★P＜0.05;与5-FU组比较，■P＜0.05。
2.4 移植瘤组织学的变化 从移植瘤标本组织切片HE染色来看，乃为人直肠癌。从各组移植瘤组织形态对比来看，对照组和rhGH各亚组的病理形态相似，差异不大；而联合组和化疗组与前三组有较大的差异，表现为实质细胞减少，间质增多，而该两组间差异不大。
3 讨论
近年来,临床营养支持和代谢调理在肿瘤围手术期治疗中的作用受到广泛重视,有关这方面的研究也逐年增多,其减少并发症,促进恢复,提高肿瘤病人对治疗的耐受性已渐成共识。而临床营养支持和rhGH联用是被业内人士广泛认同调节患者术后代谢，减轻术后疲劳综合症,降低术后并发症（如吻合口瘘）等的有效治疗手段。大量的资料显示GH具有抗凋亡的作用，对肿瘤的发生、发展和转移具有显著促进作用［2］；而另一些研究并不支持GH刺激肿瘤生长的结论［3］。因此目前rhGH在临床肿瘤患者的应用争议也较多。本研究旨在采用肾包膜下移植瘤模型，观察rhGH及其与化疗药合用对移植瘤生长的影响，探讨rhGH是否具有促进肿瘤生长作用，如果有促进作用，为探讨其与剂量的关系设计了两个剂量组1IUrhGH组和3IUrhGH组；同时探讨其与5-FU合用在肿瘤患者围手术期应用及临床化疗有效实施的可行性。
从表1可以看出，各组移植瘤△TS：对照组、rhGH1组和rhGH2组间差异无统计学意义，说明rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤的生长无明显促进作用。而联合组和化疗组移植瘤△TS：组间差异也无统计学意义，说明rhGH和5-FU联用并不影响化疗药对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤的抑瘤作用，反过来也证实了rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤的生长无明显促进作用。从表1抑瘤率来看，rhGH虽然无明显增加5-FU的抑瘤率，但也无促进肿瘤生长作用。从移植瘤标本组织切片HE染色来看，乃为人直肠癌，提示肾被膜下移植瘤模型能真实地反映直肠癌特性。从组织切片看细胞异型性明显增加，细胞核大，胞浆少，肿瘤细胞缺少分化，恶性程度高，排列成腺管状或腺泡状的少见，有部分肿瘤细胞为印戒细胞，形成粘液池，细胞核边集。从各组对比来看，对照组和rhGH各亚组的病理形态相似，差异不大；而联合组和化疗组与前三组有较大的差异，表现为实质细胞减少，间质增多，而两组间差异不大，说明rhGH对移植瘤的病理形态无明显影响。
有研究证明，rhGH能直接刺激肝细胞蛋白质mRNA的表达，使摄取的氨基酸渗入蛋白质并加速等转运过程，从而促进蛋白质合成，减少蛋白质分解，增加脂肪氧化分解，增加糖原异生，提高糖利用及营养物质转化率，逆转负氮平衡及“潴氮”效应［4］。本研究显示rhGH1组、rhGH2组用药后小鼠体重明显增加及rhGH1组、rhGH2组的血红蛋白明显高于对照组和上述研究结果一致，但与rhGH剂量无关。
化疗是治疗恶性肿瘤的主要措施之一，但会对肿瘤患者造成多种不良影响，再加上肿瘤自身的作用，从而使有效的化疗方案难以实施。有学者认为在肿瘤安全切除后，应用GH可以改善患者的营养不良，减轻毒副反应，增加机体免疫功能和NK细胞的活性。本研究结果表明，rhGH不影响5-FU的抑瘤作用，rhGH和5-FU联用可使实验小鼠的生存期明显延长；联合组的白细胞数显著高于单纯化疗组；联合组的血红蛋白水平也显著高于化疗组，提示rhGH与5-FU联用不影响5-FU的抑瘤作用，且在一定程度上减轻了5-FU的毒副作用。本研究大体指标反映化疗期间合用rhGH是安全的，在恶性肿瘤病人围手术期单独使用rhGH或联合化疗药是有效可行的。但小鼠与人存在种属差异，因此，关于rhGH促进肿瘤生长的作用、作为合成代谢调节剂对肿瘤患者的作用，以及与化疗药联合应用对机体的影响还需大量的临床实验研究。
【参考文献】
［1］ Bogden AE, Cobb WR, Lepage DJ, et al. Chemotherapy responsiveness of human tumors as first transplant generation xenografts in the normal mouse: six-day subrenal capsule assay［J］. Cancer, 1981, 48(1):10～20.
［2］ Swerdlow AJ, Higgins CD, Adlard P, et al. Risk of cancer in patients treated with human pituitary growth hormone in the UK, 1959-85: a cohort study［J］. Lancet, 2002, 360(9329):273～277.
［3］ Fiebig HH, Dengler W, Hendriks HR. No evidence of tumor growth stimulation in human tumors in vitro following treatment with recombinant human growth hormone［J］. Anticancer Drugs, 2000, 11(8):659～664.
［4］ 姜海琼，靖大道，王佩文，等.重组人生长激素对肝硬化患者低蛋白血症的临床疗效［J］.医学临床研究，2004，21(7):738～740.
作者单位：暨南大学第五附属医院清远市人民医院,广东 清远 511500; 从化市人民医院,广东 从化 510900; 南华大学附属一医院肿瘤外科,湖南 衡阳 421002.