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【关键词】 HBV-DNA 乙肝血清学标志物 功能
The relationship between HBV-DNA and HBV-M, liver function.
Xie Yong, Zhang Jiong-jiong, WANG Hai-bo,et al.
(Department of Laboratory Medicine, Hainan Medical College, Haikou 570311. Hainan P R China)
Abstract：Objective To explore the relationship between content of HBV-DNA and HBV-maker and liver function. Methods HBV-DNA from 108 HBsAg positive sera were determined by quantitative FQ-PCR , HBV-markers and liver function (AST,ALT,PA) were also tested simultaneously. Results The content of HBV-DNA in pateints positive for “HBsAg, HBeAg,HBcAb” was significantly higher than that of “HBsAg, HBeAb,HBcAb” and “HBsAg,HBcAb” teams(t=4.463,P<0.05，t=3.478,P<0.05).There were no significant differences between the latters (t=0.234,P>0.05); there were no significant differences in content of HBV-DNA between sexes, age groups (t=0.654,P>0.05, t=-0.140, P>0.05;t=0.661, P>0.05; t=1.951, P>0.05); the content of HBV-DNA showed a positive correlation to ALT and AST (r=0.252,P<0.05; r=0.238,P<0.05), but not to PA(r=0.017, P>0.05). Conclusion The contents of HBV-DNA is correlated to HBV-M, and it is also to some extent correlated to ALT and AST, but not to sexes, ages and PA. The results indicate that determination of levels of HBV-DNA, HBV-DNA, AST and ALT would be helpful for diagnosis of hepatiitsB patients and monitoring therapeutic effect.
Key words：HBV-DNA; HBV-Marker; Liver function
据统计，我国约有1.2亿人感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)， 每年约有30万人死于慢性乙型肝炎相关性疾病， 且患者也是居高不下。实验室检测乙肝病毒标志物的技术手段较多，其中最常采用酶免疫吸附试验(ELISA法)检测乙型肝炎血清学标志物(HBV-M),它具有快速、价廉、简便的特点,可用于乙肝的大批量筛查［1］。但由于此方法只能定性分析，且乙肝两对半组结果也有10余种，常导致临床诊断困难。荧光定量多聚酶链式反应(Fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)具有较高的特异性和灵敏度,可直接监测血清中乙肝病毒核酸(HBV-DNA)的复制情况,能区别诊断乙肝的早期感染、现症感染、恢复期感染,也能对乙肝的突变株进行诊断［2］,而病毒的活跃复制又是启动或激发肝脏组织炎症反应的因素。本研究采用FQ-PCR法对108例乙肝患者血清标本进行了HBV-DNA 定量检测，同时予以HBV-M以及肝功能的检测,并对结果进行了比较和相关性分析。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象 108份标本均为自海南省农垦总局医院2006年8～12月门诊和住院乙肝患者的空腹血清，及时分离检验。其中男性89例，女性19例；年龄12～73岁，其中60岁以上5人，平均年龄(39.3±13.3)岁，并经临床及实验室检查排除甲、丙、丁、戊等型肝炎。
1.2 方法
1.2.1 HBV-DNA定量 采用荧光定量PCR法,实时、动态检测病毒载量。使用国产杭州博日科技有限公司提供的FO-33A型PCR扩增仪，试剂购自上海复星医学科技发展公司。检测范围为5×102～5×108Copis/ml，操作人员为持有卫生部PCR实验室上岗证的专业人员，实验室是通过卫生部PCR实验室认证的基因诊断实验室。
1.2.2 HBV-M检测 酶联免疫吸附法（ELISA法）测定血清学标志物，试剂购于厦门英科新创科技有限公司，操作严格按试剂盒说明书，用酶标仪（MULTISKAN MK3）读取和记录结果。
1.2.3 肝功能（ALT、AST和PA）检测 采用美国贝克曼CX7全自动生化分析仪检测，试剂为上海丰汇医学科技有限公司生产。
1.3 统计学处理 测定数据以均数±标准差表示，由于HBV-DNA定量值为非正态分布，故经对数转换后使其符合正态分布后再行t检验,双变量的相关关系进行线性相关分析，所有统计用SPSS11.5软件完成。
2 结果
2.1 大三阳和小三阳HBV-DNA定量的比较 大三阳组HBV-DNA定量显著高于小三阳组（P<0.05）和HBsAg+HBcAb阳性组（P<0.05）,而小三阳组和HBsAg+HBcAb阳性组HBV-DNA定量差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
表1 HBV-M之间的HBV-DNA定量的比较（略）
注:①和②相比,t=4.463,P<0.05; ①和③相比,t=3.478,P<0.05;②和③相比,t=0.234,P>0.05。
2.2 性别之间HBV-DNA定量的比较 男女之间HBV-DNA定量差异无统计学意义（P>0.05），见表2。
表2 性别之间的HBV-DNA定量的比较（略）
注：t=0.654,P>0.05。
2.3 各年龄组之间HBV-DNA定量的比较 三个年龄段之间HBV-DNA定量差异无统计学意义(P>0.05),见表3。
表3 各年龄组间的HBV-DNA定量的比较（略）
注:各年龄组间分别为t=0.14,P>0.05;t=0.661,P>0.05;t=1.951,P>0.05。
2.4 HBV-DNA定量与肝功能（ALT、AST和PA）的相关性分析 HBV-DNA定量与ALT、AST呈正相关（分别为r=0.252,P<0.05;r=0.238,P<0.05），而与PA无相关性。见表4。
表4 HBV-DNA定量与肝功能指标的相关性分析（略）
注：经线性回归分析，与ALT,P<0.05;与AST,P<0.05;与PA,P>0.05。
3 讨论
ELISA方法是检验乙型肝炎病毒血清学标志物的常用方法,它实际检测的是人体对HBV的免疫反应状态，由于HBV的表达和机体免疫反应的强弱受多种因素的影响［3,4］,因此反映患者体内病毒复制情况时只能提供定性报告的信息有一定局限性。随着分子生物技术的发展,病毒感染的临床诊断技术已从定性检测发展到定量检测,定量PCR技术检测HBV-DNA,其灵敏度和特异性不断提高, 能更直接、准确地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制水平，可认为PCR法检测HBV-DNA定量是病毒是否复制的金标准［5］，且在研究病毒感染量与临床病情的关系、评价和监测抗病毒药物疗效等方面具有重要指导作用。
3.1 从表1可以看出，HBeAg阳性组HBV-DNA定量明显高于其他2组，从而应证了大量文献报道的HBeAg阳性是病毒复制活跃和传染性极强的标志，易于检出的特点，值得注意的是，另外两组HBeAg阴性但仍能够检出HBV-DNA，分别达4.33±1.58和4.23±1.59，说明体内HBV-DNA复制水平仍然较高，而既往一般认为,血清HBeAg的消失或HBcAb的出现预示病毒复制水平降低或病变恢复，此现象的原因可能为HBV前C区基因变异，这种变异毒株丧失了分泌HBeAg的能力，从而使HBeAg表达缺失［6,7］，使患者HBeAg阴性，但病毒复制不受影响，也有报道部分重型肝炎HBeAg阴性，HBV DNA仍较高的原因，除了T1896变异外，还存在T1862变异。前C1862突变对e抗原前体蛋白合成虽无影响，但可使e抗原前体在分泌过程中受阻［8］。还有文献报道， HBeAg阴性，血清HBV-DNA低于最低检测限，肝组织HBV DNA仍处于一定水平［9］。故不能认为HBeAg阴性，或HBcAb阳性，患者已进入恢复期，专家指出,在评价治疗乙肝疗效与预后判断方面HBV-DNA的检测至关重要［10］，特别是对HBeAg阴性患者,它是动态观察药物疗效的确切指标［11］。
3.2 既往关于HBV-DNA定量与性别和年龄的关系报道不多，从本文表2和表3可以看出性别之间和各年龄段之间的HBV-DNA定量均无显著性差异，说明乙肝患者HBV-DNA定量与性别和年龄无关。
3.3 在HBV-DNA定量与肝功能的关系方面,报告结果缺乏一致性。有资料报道,血清HBV-DNA水平上升,ALT活性增加,IgM类HBcAb滴度增高［12］, 也有资料显示,DNA拷贝数与各项肝功能损害指标呈不同程度的负相关系［13］,以及各类型肝炎相应的ALT/AST，A/G比值有显著的差异性,与病变程度呈负相关系［14］。本实验的结果表明, HBV-DNA定量与ALT和AST呈正相关，与PA无相关性，以上原因可能为：①一方面,HBV-DNA含量增高,肝损害不一定明显,可能是因为机体免疫机制的启动;另一方面,机体清除乙肝病毒的同时启动了宿主针对HBV的免疫应答,造成肝细胞损伤。②对于乙型肝炎患者,很多是在服药治疗之中,在HBV-DNA含量降低的同时,不排除因病情和个体差异造成的药物性肝损害。③对于乙型肝炎患者肝脏都有不同程度的损害,由于溶血、黄疸、免疫球蛋白等因素对HBV-DNA定量的负相干扰,影响HBV-DNA定量结果。
综上所述,我们认为HBV-M与HBV-DNA以及肝功能之间既有联系又有所不同。血清标志物反映抗体的免疫功能,即抗原抗体反应水平的指标,它与患者病情有一定的联系,可以反映病毒的转变过程,但它并不能确定患者是现症感染、既往感染或恢复期感染,对指导抗病毒药物的使用存在缺陷。而HBV-DNA直接检测血中的病毒含量,能直接反映HBV的感染程度和病毒的复制情况,也能对乙肝药物的疗效进行监测，肝功能更是受机体的免疫应答、营养状况、药物服用等复杂因素的影响，每个患者都有个体差异，随着医学的发展，乙型肝炎诊断和疗效检测的个性化检测服务将满足每个人的特殊需要。
【参考文献】
［1］ 朱祖华,窦容,高湘.60例无精子症患者的细胞遗传学分析［J］.中国优生与遗传杂志,2000,8(1):38.
［2］ 周荣家.SRY基因与性别决定［J］.中华医学遗传学杂志,1995,12(5):287～289.
［3］ Chem In I，Zou L F, Merle P, et al. High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of unknown etiology［J］. J Hepatol,2001,34(3):447～454.
作者单位：海南医学院附属新华医院检验科,海南 海口 570311.