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【摘要】 目的 建立以HPLC法测定复方盐酸吡格列酮格列美脲片中格列美脲的溶出度。 方法 按中国药典2005年版二部附录Ⅹ C第三法，以pH8.6磷酸盐缓冲液为溶出介质以75转/min溶出45min；采用Hypersil BDS 柱（250mm×4.6mm，5μm）， 乙腈-水-醋酸（600:400：1.2），用氨水调节pH值至6.0为流动相，流速:1.0ml/min，检测波长228nm。 结果 格列美脲在2.0～14.0μg/ml范围内有良好的线性关系，其回归方程：y = 62470x+7120.3，r=0.9996，平均回收率为100.2%，RSD=0.42%（n=9），3批样品45min溶出度均在90%以上。 结论 考证研究的HPLC法简便、准确，灵敏度高，可用于复方盐酸吡格列酮格列美脲片中格列美脲溶出度的测定。
【关键词】 HPLC 复方盐酸吡格列酮格列美脲片 格列美脲 溶出度
复方盐酸吡格列酮格列美脲片含有两种不同作用机制的抗高血糖成分，可有效控制Ⅱ型糖尿病人的血糖水平。盐酸吡格列酮属于噻唑烷二酮类药物，格列美脲属于磺酰脲类降糖药。噻唑烷二酮类药物是胰岛素增敏剂，主要作用在于增强外周血糖的利用，而磺酰脲类药物属于胰岛素促分泌药，主要促进有功能的胰岛β细胞分泌胰岛素［2］。故二者有很好的协同作用。本文用HPLC法测定了复方盐酸吡格列酮格列美脲片中格列美脲的溶出度，同时进行了方法学研究，结果表明本法简便、准确，灵敏度高，适用于复方盐酸吡格列酮格列美脲片的质量控制。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 仪器:ZRS-6智能溶出度仪（天津大学无线电厂），LC-2010CHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）。试药:格列美脲对照品，中国药品生物制品检定所，批号100674-200301；复方盐酸吡格列酮格列美脲片，海南国瑞堂制药有限公司，批号071001、071002、071003，规格为盐酸吡格列酮/格列美脲(30mg:2mg)；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
1.2 方法
1.2.1 考察盐酸吡格列酮以及辅料的干扰 按制剂工艺处方称取盐酸吡格列酮、辅料适量,并按处方比例用甲醇、磷酸盐缓冲液稀释制成待测溶液,过滤，取续滤液作为供试品溶液，以HPLC法测定。
1.2.2 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Hypersil BDS 柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相: 乙腈-水-醋酸（600:400：1.2），用氨水调节pH值至6.0为流动相；流速:1.0ml·min-1；检测波长：228nm；理论塔板数按格列美脲峰计，应不得低于2000。
1.2.3 溶出方法 中国药典2005年版二部附录Ⅹ C第三法；溶出介质：pH8.6磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠10g，加水1 000ml溶解后，用磷酸调节pH值至8.6）200ml；转速：75转·min-1；溶出时间：45min；溶出温度(37±0.5)℃。
1.2.4 对照品储备液的制备 取格列美脲对照品20.0mg，精密称定，置200ml量瓶中，加适量甲醇溶解后，加磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成0.1mg·ml-1的溶液,即得。
1.2.5 线性关系考察 精密量取对照品储备液1.0、2.0、4.0、5.0、7.0ml，置50ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液稀释至刻度，分别精密量取上述对照品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
1.2.6 稳定性试验 取格列美脲溶出度测定项下的供试品溶液，置室温条件下放置，分别于0、2、4、6、8h取样测定。
1.2.7 回收率试验 取格列美脲对照品适量，按标示量的80%、100%、120%，各平行精密称取3份，照制剂工艺处方加入相应的盐酸吡格列酮原料及辅料，分别置200ml的量瓶中；另精密称取格列美脲对照品适量置200ml量瓶中；均加甲醇适量，超声约5min后，加磷酸盐缓冲液稀释至刻度，精密量取上述两种溶液各5ml,置50ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液稀释至刻度,照含量测定项下的方法测定，按外标法分别计算含量。
1.2.8 溶出曲线 选用批号071001的样品，进行6次溶出曲线测定。分别在10、20、30、45、60min取溶出液5ml（立即补充37±0.5℃的介质5ml），滤过，取续滤液作为供试品溶液，进行测定，计算每片当时的溶出量。
2 结果
2.1 考察盐酸吡格列酮以及辅料的干扰 盐酸吡格列酮峰及各种辅料峰与格列美脲峰均有良好的分离，证明盐酸吡格列酮及辅料对格列美脲溶出度含量测定均无干扰（见图1）。
2.2 线性关系考察 以浓度（C）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：y=62470x+7120.3，r=0.9996。结果表明，格列美脲在2.0～14.0μg·ml-1范围内有良好的线性关系。
2.3 稳定性试验 RSD为0.17%（n=5）。结果表明，供试品溶液在8h内稳定。
图1 样品溶出液的HPLC图（略）
1. 辅料; 2. 盐酸吡格列酮; 3. 格列美脲
2.4 回收率试验 平均回收率为100.2%，RSD为0.42%（n=9）。
2.5 溶出曲线 结果表明，样品6片间的格列美脲实时溶出曲线走势基本相同，重现性好，各片之间的实时溶出度差异很小，说明其质量均一、稳定。
2.6 样品的测定 按1.2.3的方法测定3批样品的溶出度，结果见表1。
表1 溶出度测定结果（略）
3 讨论
3.1 溶出介质的选择 根据两种原料的特性结合格列美脲片的质量标准［3］，选择水、（9→1000）盐酸溶液、0.02%三羟甲基氨基甲烷溶液、pH7.8～8.0磷酸盐缓冲液以及 pH8.6磷酸盐缓冲液五种溶出介质进行试验。结果溶出介质为水，则两种主药溶出均不理想；为盐酸溶液（9.0→1 000ml），则盐酸吡格列酮溶出比较理想，但是格列美脲几乎没有溶出；为0.02%三羟甲基氨基甲烷，则两种主药溶出均不理想；为pH7.8～8.0磷酸盐缓冲液，则格列美脲溶出有明显的改善，但是盐酸吡格列酮又几乎没有溶出；为pH8.6磷酸盐缓冲液，则格列美脲溶出几乎完全，但是盐酸吡格列酮几乎没有溶出，也即不干扰格列美脲的溶出，故选择以pH8.6磷酸盐缓冲液作为复方盐酸吡格列酮格列美脲片中格列美脲的溶出度检查时的溶出介质。
3.2 溶出液测定方法的选择 根据盐酸吡格列酮及格列美脲的紫外吸收图谱，在格列美脲吸收波段里，盐酸吡格列酮均有较强的吸收，选择pH8.6磷酸盐缓冲液为溶出介质，仍有少量的盐酸吡格列酮溶出，在HPLC中，盐酸吡格列酮峰及各种辅料峰与格列美脲峰均有良好的分离，为了避免盐酸吡格列酮的干扰，故选择HPLC法测定格列美脲的溶出液。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（二部）［S］.2005年版,北京:化学工业出版社，2005,73.
［2］ 崔秀玲,张爱荣. 糖尿病药物治疗新进展［J］. 糖尿病新世界,2007,7:14～15.
［3］ 国家药典委员会. 国家食品药品监督管理局国家药品标准新药转正标准第51册［S］.北京:人民卫生出版社，51:177.
作者单位：海南省药品检验所，海南 海口 570216