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Harbin Pharm Group Sanchine Pharmaceutical Co，Ltd，Harbin150000，China
【Abstract】 Objective To develop a precise，simple and convenient method for the determination of acyclovir con-centration in human plasma.Methods HPLC system was used.The analytical column was C 18 and the analytical mo-bile phase was acetonitrile water solution（2%）.The detection wave-length was at254nm.Results The linear range of acyclovir in plasma was0.05～1.0μg/ml（0.9997）.The detection limit was0.01μg/ml.The recovery was92.36%～99.21%，and the variation of inter-day and intra-day RSD was less than10%.Conclusion The method was simple，precise，sensitive and could apply conveniently in studies of clinical pharmacy.
【Key words】 acyclovir;plasma concentration;HPLC
阿昔洛韦（acyclovir，ACV）是一种细胞毒性较低的新型抗病毒药，其血药浓度测定方法多采用放射免疫法及HPLC免疫类的方法较为灵敏，但方法建立过程较长 ［1］ 。目前，虽有多种HPLC法测定ACV的报道，但方法繁琐费时 ［2］ ，另阿昔洛韦缓释片血药浓度测定方法未见报道。本实验HPLC法的预处理采用蛋白沉淀后直接进样，方法简便，结果准确，适用于口服阿昔洛韦缓释片后大量血浆样品的快速分析。
1 药品与仪器
ACV标准对照品由厦门建发公司提供;阿昔洛韦缓释片由厦门建发公司提供，批号:20041004;实验用水为蒸馏水，乙腈分析纯，pH3磷酸盐缓冲液。HPLC仪（岛津10A）。
2 实验部分
2.1 色谱条件 色谱流动相为2%乙腈水溶液（pH3），分析柱为C 18 柱。流速1ml/min。检测波长254nm。
2.2 标准溶液的配制 精密称取ACV标准对照品1.225mg，以水溶于25ml量瓶加水至刻度，得50.1μg/ml的贮备液:将上述贮备液以水稀释，制得0.501μg/ml的工作液。储备液与工作液均于0～4℃保存。
2.3 血浆样品预处理 取血浆样品500μl，加10%三氯乙酸200μl，混匀使沉淀完全后加水1ml，离心10min（1500r/min），取上清液500μl进样分析。
2.4 色谱行为 样品经HPLC分析，ACV保留时间约为8.23min。血浆内源性杂质干扰较小，样品峰形良好。
2.5 标准曲线的绘制 健康人空白血浆共6份，依次加入ACV标准品配成血浆药物浓度分别为0.05，0.10，0.20，0.40，0.80，1.0μg/ml的系列混合标准液。按样品预处理方法处理后进样分析，每份样品进样3次。以测得色谱峰的峰面积的平均值对相应浓度作线性回归，得标准曲线方程为:C=5.642×10 -2 A-1.023，r=0.9997。
线性浓度范围为0.05～1.0μg/ml，最低检测限约为0.001μg（S/N≥3）;最低血浆药物检测浓度为0.01μg/ml。
2.6 回收率试验 分别配制高、中、低浓度的血浆样品各5份，经上述HPLC分析，将测得值代入标准曲线计算ACV的浓度，计算回收率，结果见表1。
表1 ACV的回收率 （略）
2.7 精密度试验 分别配制高、中、低浓度的血浆样品各多份，分别于同1天内各进样分析，不同3天内同法重复测定，测得ACV的日内及日间RSD分别为3.62±2.03%，5.48±3.78%。
2.8 样品测定 10名健康男性志愿受试者（20～25岁，体重60～70kg），口服阿昔洛韦缓释片（清洗期为1周），口服给药后1.5h及5.0h分别自前臂静脉采取血样2.5ml，肝素抗凝。离心分离血浆样本，经处理后测定阿昔洛韦血药浓度，测定结果分别为（0.88±0.33）μg/ml与（0.47±0.22）μg/ml。
3 讨论
3.1 分析流动相 曾试用10%，4%及3%的甲醇水溶液作流动相，ACV标准溶液直接进样分析，结果保留时间很短（分别为2.20，3.60，4.08min），不易分离;加入少量离子对试剂或以盐酸及氨水调pH3，保留时间改观不明显。实验后发现若以乙腈代替甲醇，用乙腈-磷酸缓冲液（pH3）时，直接进样的保留时间可控制在8.23min左右，较为合适，流动相中可不必加入离子对试剂。
3.2 样品稀释液的选择 实验中曾分别选用浓度为20%，10%及5%的三氯乙酸作稀释液，发现前者使样品pH过低，对柱填料有损害;后者浓度太低，不能有效地沉淀蛋白。后来在每500μl样品中先分别加入一定量10%的三氯乙酸溶液，再以水稀释至1ml，一方面可先让大部分蛋白沉淀，另一方面可缓解三氯乙酸溶液造成的强酸性。试验三氯乙酸溶液的用量分别为150，200，300，400μl，结果证明200μl效果最好。
【参考文献】
1 Molokhia AM，Niazy EM，EL-Hoofy S A，et al.Improved liquid chro-matographic method for acyclovir determination in plasma.J Liq Chro，1990，13（5）:981.
2 周梅华，郭幼梅，张称心，等.反相高效液相色谱法测定阿昔洛韦胶囊在人体内的药动学.中国医院药学杂志，1994，14（10）:437.
作者单位:150000黑龙江哈尔滨，哈药集团三精制药有限公司
154007黑龙江佳木斯，佳木斯大学药学系