三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定中药指纹图谱 | 39康复网

摘要:目的建立三七及其混淆品的指纹图谱鉴定方法。方法采用HPLC方法，测定三七、人参、西洋参、姜状三七、三七不同部位及其2种混淆品的指纹图谱。结果三七与人参、西洋参、姜状三七及其2种混淆品的指纹图谱有明显区别，三七不同部位也有差异。结论HPLC皂苷指纹图谱鉴别三七及其混淆品具有重复性好、特征性强、方法简便等特点，可作为三七药材的鉴别方法。
关键词:三七;指纹图谱;混淆品;皂苷;HPLC
七Panax notoginseng (Burk.) F .H .C hen为五加科人参属名贵中药材，主要用于治疗冠心病、心绞痛等心脑血管系统疾病川。三七中含有皂苷、黄酮、多糖等多种有效成分，其中皂苷含量最高，其药理活性研究也较为系统和全面[2,3]。目前对三七药材的鉴别和质量控制仍然采用传统的物理和化学方法。近几年，指纹图谱鉴定技术得到了快速发展，越来越多的中药材开始采用指纹图谱进行鉴定和质量控制。本文参照《中药注射液指纹图谱研究的技术要求》和文献方法[41，研究了三七、人参、西洋参及2种三七混淆品的HPLC指纹图谱，为制定三七药材和饮片质量标准提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 仪器:WatersTm 600E高效液相色谱仪，WaterSTM2487UV检测器，WaterSTM Millennium"色谱工作站，BRNASON5200超声仪器。
1.2 试剂:乙腊HPLC级，甲醇分析级，均为Sigma公司购买，对照品人参皂苷Rg,,Rb ,,R d ，三七皂苷R,(中国药品生物制品检验所购买)。
1.3 药材:三七的药材样品采自云南文山，人参、西洋参、温郁金和白及样品购自香港。
1.4 测定方法:
1.4.1 色谱条件:分析柱Nova-PakC18(3 .9mm×300mm);流动相:CH3CN-50mmol/L KH2P04·H20(20:80)，二元梯度洗脱;流速:1. 0 mL/min;UV检测器，检测波长203 nm。
1.4.2 对照品溶液的制备:分别取人参皂苷Rg1,Rb1,R d，三七皂苷R1,标准品1m g，甲醇配成1
mg/mL对照品溶液。
1.4.3 供试样品溶液的制备:取待测样品5g，加人50 mL 70%甲醇溶液，超声提取2 h, 4 000 r/min
离心，取上清液，过0. 2um滤膜，滤液为供试样品溶液。
1.4.4 稳定性试验:取同一份样品溶液，分别在0，1,2,4,8,12,24,36,48 h进行测定，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。
1.4.5 精密度试验:取同一份供试样品溶液，连续进样5次，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。
1.4.6 重现性试验:取5份样品，按测定方法测定，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。
2 结果与分析
2.1 方法学验证
2.1.1 药材的提取方法比较:比较了文献常用的甲醇提取，大孔树脂纯化与甲醇超声提取后离心两种药材提取方法，虽然前者所得的指纹图谱杂质干扰较少，但费时，且人为操作影响较大，重现性较差。后者有一定的杂质干扰。但重复性较好，且快速，所得的指纹图谱有代表性，故我们采用甲醇超声提取法作为药材样品的提取方法。
2.1.2 稳定性试验结果:取同一份样品溶液，分别在0,1,2,4,8,12,24,36,48 h进行测定，色谱峰面积和保留时间的RSD分别为1.5%和0.43%，表明试验方法稳定。
2.1.3 精密度试验结果:取同一份供试样品溶液，连续进样5次，色谱峰面积和保留时间的RSD分别为1.76%和0.52%，说明仪器的精密度良好。
2.1.4 重现性试验结果:取5份样品，按测定方法测定，色谱峰面积和保留时间的RSD分别为1.64%和0.38%，重现性好。
2. 2 三七及混淆品的指纹图谱分析
2.2.1 三七的HPLC指纹特征峰试验条件下，三七块根和根茎样品在10～19 min均出现5个明显的共有特征峰，经与标准品对照，我们确定其中的4个共有特征峰，按出峰顺序分别为三七皂苷R1,、人参皂苷Rg1,, Rb1，和Rd;按峰面积大小排列为:Rg1> Rb1> Rd>R1，与文献报道的结果一致.
2.2.2 三七不同部位指纹图谱:三七的部位不同，所含的皂苷成分也不一样，如地下部分人参三醇型皂苷比人参二醇型皂苷高，地上部分仅含有人参二醇型皂苷。试验条件下的HPLC指纹图谱，可以明显看出地下部分与地上部分的差异。地上部分的三七花和三七茎叶共有10个特征峰，且峰面积较小;地下部分的根茎、主根、大根的特征峰很一致，但峰面积有差异，表现为根茎的峰面积>主根>大根，毛根的峰面积较小，特别是Rb,的峰面积很小，如图1所示，可以通过4个皂苷的峰高和峰面积的比例很容易地将三七各部位区别开来。
2.2.3 三七、人参、西洋参及三七常见混淆品的指纹图谱比较:人参属植物最大的共同点是都含有人参皂苷，且植物学形态十分相似，但药用功效却各有不同，如何鉴别是合理使用的前提。本试验条件下三七、人参、西洋参和姜状三七的HPLC指纹图谱明显不同，峰的数量、峰面积和峰高都有显著差异(图2)，三七含有三七皂苷R,，人参、西洋参和姜状三七则没有;人参皂苷Rg,,R b:虽然三者都含有，但峰高明显不一样，三七是Rg1比Rb1高，人参二者相当，西洋参Rb，略比Rg1高;姜状三七与三七、人参和西洋参的图谱差别更大。试验表明，通过HPLC指纹图谱，可以很容易地将它们相互区别开来。同样，三七与其2个常见混淆品温郁金和白及的指纹图谱差别十分明显。温郁金和白及不含皂苷，在相应的位置就没有皂苷峰出现。
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3.1讨论
采用指纹图谱鉴别中药材(中药饮片或中成药)的真伪具有明显优势。本试验条件下三七有4个明显的特征峰，我们把它作为三七“共同特征”的三七皂苷HPLC指纹图谱，可以清楚地表达三七指纹图谱鉴别的专属性，与人参属的其他种和三七的2个混淆品的指纹图谱比较，可以十分明显地看出他们之间的差异，很容易地将三七与其他混淆品区别开。本试验条件下的三七指纹图谱作为三七药材和饮片的鉴别无疑是一种可靠的方法。
3.2 三七的各部位均可作为药用，但药理作用却各不相同，如花和茎叶对中枢神经有抑制作用，根和根茎则表现为兴奋作用;在用途上也各异，主根入药，根茎为副产物，主要为工业提取皂苷的原料，毛根作食品，如三七汽锅鸡配料等。生产中混用的现象时有发生。在原料粉碎后，采用常规的物理和化学方法很难鉴别。采用HPLC指纹图谱，可以较好地
3. 3 本文建立的三七皂苷HPLC指纹图谱方法，快速，简便，重现性和稳定性均很好，特征性强，可作为三七药材和饮片鉴别的依据。

作者： 2006-3-27