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【摘要】 目的 研究宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈组织硒含量的关系。 方法 用第2代捕获杂交(HC2)法检则宫颈的HPV感染情况；以荧光光度技术检测宫颈组织硒的含量。 结果 HPV感染组宫颈组织硒含量：133例慢性宫颈炎组为(5.48±2.37)mmol/g，宫颈上皮内瘤变CINⅠ级组(113例)为(5.39±2.26)mmol/g，CINⅡ级组(52例)为(3.17±1.74)mmol/g，CINⅢ级组(19例)为(2.63±1.46)mmol/g。组间比较差异有显著性(P<0.05)；148例HPV阴性对照宫颈组织硒的平均含量为(6.14±3.33)mmol/g，与HPV感染组比较差异有显著性(P<0.01)。 结论 硒含量与宫颈组织的HPV感染有关,其下降程度与病变程度相一致，补充适量的微量元素硒可能有利于CIN恢复。
【关键词】 人乳头瘤病毒 上皮内瘤变 硒含量 宫颈组织
硒作为人体的必需微量元素之一，是人体重要的含硒酶、酶蛋白及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的重要组成部分，GSH-Px能对抗机体内有氧代谢过程中所产生的过氧化物对细胞的损害和破坏。硒同时具有抗氧化、协助清理自由基、提高机体免疫功能（增强T细胞和NK细胞杀伤肿瘤细胞的作用）从而抑制肿瘤的发生和发展。在人体中，硒主要以硒蛋白的形式存在，其中约3％的硒参与谷胱苷肽过氧化物酶的合成［1］。人乳头瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）感染作为宫颈癌的主要致病因素之一已得到公认。HPV为嗜上皮性病毒，HPV感染宫颈上皮后持续刺激角化细胞并提供了促有丝分裂增殖的肿瘤基因，且持续表达而导致肿瘤的发生［2,3］。国外研究表明，缺硒状态与某些病毒的感染的发生和疾病进展相关。低硒状态可能是病毒性疾病发展的原因，也可能是疾病本身的结果，可加重病情的发展。为探讨HPV感染的宫颈组织硒含量与宫颈上皮内瘤变的关系，本研究采用病例对照研究方法，分析HPV感染宫颈组织硒含量的变化，结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 收集2007年4月～2008年5月在本中心就诊和体检的HPV阳性者317例及HPV阴性者148例宫颈取活检组织3小块，其中两块用于组织病理学检查，一块用于组织硒含量的检测，阴性对照用HPV阴性的慢性宫颈炎LEEP术后的标本。
1.2 方法
1.2.1 病理组织学检查 活检组织作常规病理检查及宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)分级。
1.2.2 HPV检查 采用美国Digene公司的第二代杂交捕获实验(Hybrid cap ture, HC - II) ,可同时进行13种（包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型）高危型HPV - DNA检测,其中任何一种或几种型别感染即可确定为HPV高危型阳性,不能判别其具体亚型。
1.2.3 宫颈组织硒含量的测定 采用2，3－二氨基萘荧光法：准确称取宫颈活检组织于恒重称量瓶内，在干燥箱内（70℃）烘干至恒重；加入浓硝酸（优级纯）消化，调pH至2.0，在暗室中加二氨基萘试剂混匀(水浴100℃助溶；冷却后加入环己烷，震荡，将溶液移入分离漏斗，弃去水层，于激发光波长376nm，发射光波长520nm处测定呸硒脑的荧光强度。同时配制硒标准使用液，按样本测定步骤操作。以公式x=［（C-B）/（A-B）］×s×1/m计算组织硒含量。式中x：样品中硒含量；A：标准管荧光读数；B：空白管荧光读数；C：样品管荧光读数；m：试样质量（g）；s：标准管硒含量（mmol/g）。
1．3 统计学方法 组间比较以t检验。
2 结果
2．1 HPV感染者宫颈病变情况 317例HPV感染者经病理检查证实为慢性宫颈炎的133例，CINⅠ级113例，CINⅡ级52例，CINⅢ级19例。
2．2 宫颈组织硒含量 对照组148例HPV阴性宫颈组织硒的平均含量为(6.14±3.33)mmol/g。实验组HPV感染宫颈组织硒含量随病变程度的增高呈下降趋势（P<0.05）。进行组间两两t检验比较，慢性宫颈炎组与CINⅠ级组硒含量差异无显著性（P>0.05）；CINⅡ级组与CINⅠ级组及慢性宫颈炎组硒含量差异有显著性（P<0.01）；CINⅢ级组与CINⅠ级组及慢性宫颈炎组硒含量差异有显著性（P<0.01）。见表1。
表1 HPV感染不同程度病变宫颈组织中的硒含量（略）
Table 1 Selenium content in cervix tissue infected with HPV
注(Note): CIN= cervical intraepithelial neoplasia
3 讨论
HPV感染是宫颈癌发生的首要因素［4］，宫颈感染HPV病毒至发展为宫颈癌是一个漫长的过程，大约需要十多年时间，在此之间称为宫颈上皮内瘤变（CIN），即宫颈癌前病变。CIN依据不典型增生的程度分为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，在15％的CINⅠ、30％CINⅡ、65％CINⅢ及95％的宫颈癌中检测出HPV感染且CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ发展为宫颈癌的可能性分别为15％、30％和45％［5］,可见并不是所有的CIN都发展为宫颈癌。有研究表明，某些病毒性疾病的发生、发展及转归与机体内硒的含量有关。HIV感染与硒关系的研究表明，缺硒的HIV患者死亡风险率比足硒的HIV患者高20倍，在HIV感染的儿童中，低血硒与死亡率和疾病进展加速均有显著的相关性［6］。陈刚［7］等报道硒复合物可作为一种潜在的结肠癌的化学预防剂。
荆洁线等［8］调查宫颈癌患者血清硒和组织硒含量均低于良性疾患者及健人，认为血清硒缺乏可能是癌的发病原因。硒的抑癌机理可能是对抗致癌物诱发的基因突变，同时硒在体内及体外对癌细胞及正常组织的增殖显示抑制作用，维持组织谷胱苷肽过氧化物酶的活力，具有抗氧化的作用，可以保护生物膜免受损伤，促使致癌物质在体内的失活。本研究通过对317例HPV感染病例及148例HPV阴性的宫颈组织硒含量的对比发现，HPV感染的宫颈组织硒含量显著低于未感染对照组，且硒含量随宫颈病变组织病变程度的增高而呈现降低趋势，表明硒含量降低与宫颈组织的HPV感染发生有关。推测当体内硒含量水平降低时，机体的免疫功能下降，不易将HPV清除或灭活，使之持续感染，从CINⅠ发展到CINⅢ，最终导致宫颈癌的发生。倪正平［9］等报道补硒能在一定水平上提高乙肝患者的清除病毒的能力。提示HPV感染宫颈上皮内瘤变的患者可适量补充微量元素硒，以利于HPV的清除和抑制病变的进一步发展。
【参考文献】
［1］ Seyler Rw Jr, Olson Jw. Superoxide dismutase- deficient mutants of Helicobacter Pylori are hypersensitive to oxidative stress and defective in host colonization［J］. Infect Immun，2001，69:4034～4040.
［2］ Rusk D, Sutton GP, Cook KY, et al. Analysis of invasive squamous cell carcinoma of the vulva and vulval intraepithelial neoplasia for the presence of human papillomavirus DNA［J］. Obstet Gynecol, 1991，73:918～922.
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［5］ 郎景和.子宫颈上皮内瘤变的诊断与治疗［J］.中华妇产科杂志，2001，36（5）：261～263.
［6］ 石乃玉,夏亦明, 施燕红，等.硒有效防治病毒感染性疾病进展［J］.中华实验和临床病毒学杂志，2005，19（1）：90～91.
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［8］ 荆洁线，韩存芝，郑曙民，等.宫颈癌患者血清、组织硒与细胞因子相关性的研究［J］.中国肿瘤临床，2000，27（8）：565～567.
［9］ 倪正平，张启南，陆建华，等.慢性乙肝患者补硒后HBV血清标志物动态变化10年追踪［J］. 微量元素与健康研究，2007，24（6）：9～11.
作者单位：深圳市计划生育服务中心，广东 深圳 518028； 北京大学深圳医院，广东 深圳 518036