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【摘要】 目的 探讨丹参素对D-半乳糖大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。 方法 3月龄SPF级SD雄性大鼠60只，按体重随机分成3组，空白对照组、D-半乳糖模型组和丹参素溶液组。灌胃90d后将大鼠全部处死，观察各组大鼠脑组织SOD活性和MDA含量的区别。 结果 D-半乳糖模型组大鼠脑组织SOD活性明显低于空白对照组（P<0.05），MDA含量明显高于空白对照组（P<0.05）；丹参素溶液组大鼠脑组织SOD活性明显高于D-半乳糖模型组（P<0.05），MDA含量明显低于D-半乳糖模型组（P<0.05）。 结论 丹参素溶液明显提高衰老模型大鼠的SOD活性，降低MDA含量，表明丹参素溶液具有抗衰老作用。
【关键词】 丹参素 衰老 超氧化物歧化酶 丙二醛
丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根茎，始载于《神农本草经》，被列为上品，历代本草均有收载。其味苦，性微寒，归心、肝二经。具祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功效。丹参为活血化瘀的中药，其常用制剂主要用于治疗心脑血管疾病。丹参的化学成分为水溶性酚酸和脂溶性二萜醌，分离丹参水提液,可得到D-(+)β-(3 ,4-二羟基苯基) 乳酸,由于它是一种游离酸,不稳定,故将其制成钠盐,称为丹参素。文献报道，丹参素具有保护心肌［1,2］、抗血栓形成［3］、抗肿瘤［4］、抗炎与增强免疫［5］等作用，未见抗衰老作用的报道。Wang XJ 等［6］发现丹参素可逆转1－甲基－4－苯基吡啶离子(MPP) 所引起的神经细胞毒性反应。推测其机制在于丹参素具有抗氧化作用,提示丹参素应用于帕金森( Parkinson)综合征的治疗将有广阔的前景。为了解丹参素治疗衰老的作用机制及寻找有效的健脑益智药物，本文对丹参素对D-半乳糖模型大鼠脑组织超氧化物歧化酶SOD活性和丙二醛MDA含量进行了检测，现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 试验动物与主要试剂
1.1.1 试验动物 3月龄SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠60只，体重(200±20)g。由广东医学院实验动物中心提供。
1.1.2 主要试剂 丹参素（西安鸿生生物技术有限公司,批号060328），D-半乳糖（上海化学试剂二厂, 批号070120），SOD测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），MDA测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
1.2 研究方法
1.2.1 实验动物和分组 随机分成3组，每组20只。对照组、模型组、丹参素溶液组。饲养条件：饲养室内温度保持24～28℃，湿度在50%～60%。分笼普通饲养，每笼5只，自由摄食摄水，专室饲养，专人负责，每星期称体重一次，连续给药90d。 分组给药情况见表1。
表1 动物分组、给药方法和药物浓度（略）
1.2.2 取材 连续给药90d后，在3%戊巴比妥麻醉下，右心室抽血处死大鼠，迅速剪开颅中缝，剥离软脑膜并分离出左侧大脑半球,称重后冰浴下按照质量体积比1∶10加入冰冷生理盐水(4℃)，用玻璃匀浆器制备10%匀浆,4 000r/min离心10min ,取上清液于-70℃保存待测。
1.2.3 脑组织SOD活性和MDA含量的测定 均用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。其中超氧化物歧化酶测定采用黄嘌呤氧化酶法, 测定总超氧化物歧化酶活性。丙二醛测定采用硫代巴比妥酸法。组织蛋白的测定采用考马斯亮兰法，各试剂和各实验步骤严格按说明书进行。
1.3 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件包用方差分析(ANOVA)进行统计学处理。所测值用（x±s）表示，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
丹参素溶液可明显提高衰老模型大鼠脑组织的SOD活性（P<0.05），降低MDA含量（P<0.05）。见表2。表1可见，D-半乳糖模型组大鼠脑组织SOD活性明显降低，MDA含量明显升高。而丹参素溶液能升高脑中SOD活性，降低MDA含量，与模型组比较差异有显著性。
表2 各组SOD活性、MDA含量的比较（略）
注：与空白对照组比较，P<0.05；与D-半乳糖组比较，P<0.05。
3 讨论
衰老是生物体全身各组织、器官的退行性变化,是诸多病理、生理过程综合作用的结果,主要表现在免疫功能低下和代谢紊乱。如何延缓衰老的进程是人类长期以来进行生命科学研究的一个重要目标, 自然衰老模型在生理衰老过程中比较符合人类衰老的特点 ,只是由于饲养时间过长、个体差异较大、干扰较多 ,影响实验结果［7］。本文利用D-半乳糖复制衰老的大鼠模型，在一定时间内,连续给动物注射大剂量D－半乳糖,使机体细胞内半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶的催化下还原成半乳糖醇,这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内,影响正常的渗透压,导致细胞肿胀和功能障碍,细胞发生凋亡, 最终致使衰老的发生［8］。本实验结果显示, 与正常成年大鼠相比,老龄大鼠脑匀浆SOD 和MDA指标均呈现明显的衰老倾向性变化。此种变化与人类衰老时变化相吻合,使用该模型验证药物的作用可望有较好的临床参考价值。
丹参提取的化学成分包括脂溶性成分和水溶性成分。根据多年来的文献报道, 水溶性成分多为邻苯二羟基类化合物,其主要有效成分为丹参素、原儿茶醛等水溶性酚酸类［9］。近年来对丹参药理作用的研究,无论从深度及广度上都有所进展,丹参中的水溶性和脂溶性成分具有广泛而复杂的药理作用,丹参有效成分的药理作用表现在多个方面,丹参酮类化合物以改善血液循环、抗菌和抗炎作用为主;而丹酚酸类化合物则以抗氧化、抗凝血和细胞保护作用尤为突出。丹酚酸类化合物具有很强的抗氧化作用,可以清除超氧阴离子和羟基自由基,从而抑制脂质过氧化反应［9］。丹参的水溶性成分具有很强的抗脂质过氧化和自由基清除作用。丹参的7 种水溶性成分对黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生的超氧阴离子均有明显的清除作用［10］,其中丹参素对超氧阴离子的清除作用优于SOD［11］。体内外试验证明,丹参有效成分丹酮ⅡA ,丹参素和丹酚酸均是有效的抗氧化剂［12］。
衰老与机体内超氧化物歧化酶活性及丙二醛水平密切相关, 某些药物和治疗方法可减轻体内脂质过氧化, 提高抗氧化酶活性, 对延缓衰老有重要作用［13,14］。丙二醛为众多脂质过氧化产物中的一种, 测试其含量可反映机体内脂质过氧化的程度,用以判断细胞损伤的程度。超氧化物歧化酶对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用, 因其能清除超氧化物阴离子, 所以测定其活性可反应组织内清除自由基的能力［15］,本实验对此二指标检测后发现衰老大鼠服用丹参素溶液后SOD活性增强、MDA含量降低，提示丹参素具有延缓衰老的作用。
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作者单位：广东医学院药理教研室, 广东 湛江 524023