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【摘要】 目的 探讨脑梗死后脑心损伤的自由基病理机制及针刺的拮抗效应。 方法 以一侧大脑中动脉阻断大鼠（MCAo）为脑梗死实验模型，检测三组（正常组、模型组、针刺组）大鼠四个时相（模型组与针刺组分为3h、6h、24h、48h四个时相）脑心组织及血液超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量。SOD用放射免疫分析法检测，MDA用硫代巴比妥酸比色法测定。 结果 模型组大鼠脑心组织及血液SOD在3h、6h、24h、48h四个时相均较正常组显著下降（P<0.05或P<0.01），MDA含量在3h、6h、24h、48h四个时相均较正常组显著升高（P<0.05或P<0.01）。针刺组与模型组比较，各个时相大鼠脑心组织及血液SOD明显升高，MDA明显下降（P<0.05或P<0.01）。 结论 脑梗死后自由基参与了脑心损伤病理过程，针刺人中、内关穴能有效拮抗自由基的损伤。
关键词 脑梗死 大鼠 脑心组织 针刺 丙二醛 超氧化物歧化酶
Influence of acupuncture on contents of SOD and MDA in cerebro-cardiac tissue and blood in cerebral infarct rats
Meng Zhihong，Du Yuanhao
The First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM，Tianjin300193.
【Abstract】 Objective To discuss free radical pathologic mechanism and antagonistic effect of acupuncture on organ of brain and heart after cerebral infarction.Methods Animal model was established byMCAO，measuring con-tent of SOD，MDA in Cerebro-cardiac tissue and blood on normal group，model group and acupuncture group（on MCAO group and acupuncture group at3h，6h，24h and48h）.SOD was measured by radio-immunity method，MDA by thio-malonylurea colorimetric method.Results In contrast with normal group，SOD was markedly de-creased at3h，6h，24h and48h in model group（P<0.05or P<0.01），while MDA was evidently elevated.In contrast with model group，SOD was markedly elevated and MDA was evidently decreased on model group（P<0.05or P<0.01）.Conclusion After MCAO，free radical was concerned with pathologic process of impairment on brain and heart.Acupuncturing Ren-zhong and Nei-guan has efficiently antagonistic action to free radical impairment.
Key words cerebral infarct rat cerebro-cardiac tissue acupuncture MDA SOD
脑梗死易引发心脏损伤而出现心脏并发症 ［1～4］ 。自由基的损伤是脑梗死的重要病理环节之一。自由基是否参与了脑梗死所致心脏损伤的过程，针刺是否能通过有效地拮抗自由基损伤而起到保护心脑组织作用，为探讨这一问题我们利用一侧大脑中动脉阻断大鼠（MCAo）模型，动态观察一侧大脑中动脉阻断后大鼠脑心组织及血液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）变化及针刺的干预作用，旨在从自由基病理学角度探讨脑梗死所致脑心损伤的机制并揭示针刺保护脑心组织的机制。
1 材料与方法
1.1 动物分组 Wistar大鼠103只，雄鼠51只，雌鼠52只，体重180～220g，购于天津药物研究院，清洁级。随机分为正常组、模型组、针刺组。模型组与针刺组又分为3h、6h、24h、48h四个时相。正常组20只，模型组3h、6h、24h时相各10只，48h时相12只;针刺组3h、6h、24h时相各10只，48h时相11只。
1.2 动物模型的制作 动物经1%戊巴比妥钠（60mg/kg）腹腔麻醉后，侧卧位。于眼眶后至耳的中点纵形切开皮肤约1cm左右，分离并去部分颞肌，暴露颞骨，做1个约3～5mm的骨窗，轻抬脑，可见横过嗅束向上走行的大脑中动脉，用加热的不锈钢丝轻触靠近嗅束上缘的大脑中动脉，使之快速凝闭，如有血管破裂出血，可用小棉球局部轻压止血，术后创面撒少许抗生素（先锋Ⅳ），缝合切口。手术后动物单笼饲养。
1.3 针刺方法 针刺组动物于阻断血管后60min针刺人中和内关穴。具体操作:先针刺双侧内关穴，动物前桡侧骨内侧，桡骨尺骨接合部下1/3交接处（腕横纹上3～4mm），直刺皮达筋间，用捻转提插结合泻法持续手法操作1min。继刺人中穴，在鼻中隔下部向上斜刺入约1分左右，施雀啄手法刺激10次左右，两穴均留针10～15min，24h、48h两个时相组每日针刺2次。
1.4 检测方法 按规定时间取动脉血后活杀动物，迅速取脑、心置液氮中速冻。用生理盐水洗净外部血渍，滤纸吸干，在微量天平上称湿重，用微型组织匀浆器匀浆，然后高速离心（4000转/min）5min，吸取上清液备检。动脉血放置30min后离心（3000转/min）5min。分离取血清置冰箱中速冻备检。SOD用放射免疫分析法（RIA法）检测，试剂盒由中国同位素公司北方试剂研究所供应，MDA用硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定。
2 结果
2.1 针刺对脑梗死大鼠脑组织SOD、MDA的影响 见表1。
表1 各组动物脑组织SOD、MDA含量比较 （略） 注:与正常组比较， △ P<0.01;与模型组比较， + P<0.05， ++ P<0.01
模型组大鼠各时相脑组织SOD显著下降（P<0.01），其中尤以3h时相下降最为显著。针刺组各时相脑组织SOD均显著高于模型组（P<0.05或P<0.01），与正常组比较差异无显著性。模型组大鼠各时相脑组织MDA含量显著升高（P<0.01）。针刺组3h、6h、48h时相大鼠脑组织MDA均较模型组明显降低（P<0.05或P<0.01），接近正常组。
2.2 针刺对脑梗死大鼠心脏SOD、MDA的影响 见表2。
表2 各组动物心脏SOD、MDA含量比较 （略）注:与正常组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与模型组比较， + P<0.05， ++ P<0.01
由表2可见，模型组各时相大鼠心肌组织SOD均较正常组显著下降（P<0.05或P<0.01），其中6h时相SOD最低。针刺组各时相心肌组织SOD均较模型组显著提高，24h时相除外，差异均有显著性（P<0.05），与正常组相近。模型组各时相大鼠心肌组织MDA含量呈逐渐上升趋势，各时相值均明显高于正常组（P<0.05或P<0.01）。针刺组心肌组织MDA含量除3h时相外，其余时相均较模型组显著下降（P<0.05或P<0.01），其中24h时相下降最显著。
2.3 针刺对脑梗死大鼠血液SOD、MDA含量的影响 见表3。模型组大鼠血液各时相SOD含量均较正常组显著下降（P<0.05或P<0.01），3h时相最低。针刺组大鼠血液各时相SOD值均有回升，并呈不断上升之势，6h时相除外，差异均有显著性（P<0.05或P<0.01）血液MDA含量的变化表现为模型组鼠各时相值均显 著高于正常组（P<0.01）。针刺组相应各时相MDA值均较模型组显著下降（P<0.05或P<0.01）。
表3 各组动物血液SOD、MDA含量比较 （略）注:与正常组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与模型组比较， + P<0.05， ++ P<0.01
3 讨论
3.1 自由基在脑梗死致脑心损伤中的作用 自由基是指某些外层轨道具有不配对电子的原子、分子或基团，它具有非常活泼的化学性质，可以直接或间接攻击细胞或损伤并产生更多的自由基基团，甚至引起链式反应。在正常代谢过程中可产生自由基，但体内存在抗氧化系统，如SOD、过氧化物酶等，通过一系列化学反应可以缓冲及清除自由基而避免其伤害作用。氧自由基攻击生物膜磷脂中的多不饱和酸引发脂质过氧化作用。一方面可引起细胞代谢和功能障碍，甚至死亡。另一方面形成新的氧自由基，MDA为脂质过氧化的代谢产物，其量的测定在一定程度上间接反应细胞损伤的程度。SOD是机体清除氧自由基、防止生成羟自由基、阻断自由基病理性连锁反应最重要的防御酶。我们的实验结果显示:脑梗死后大鼠脑组织及血液中MDA含量显著上升，SOD含量显著下降，与正常组比较差异有显著性，与有关报道一致 ［5～7］ 。实验还发现，脑梗死发生后，不仅脑组织中MDA含量升高，SOD下降;心肌组织中MDA含量也显著升高，SOD含量显著下降。迄今有关脑梗死后心肌组织自由基损伤的报道很少。提示脑梗死发生后，不仅脑组织发生了自由基的损伤，而且心肌组织也发生了自由基的脂质过氧化损伤。可见，自由基损伤是脑梗死致脑心组织损伤的一个共同的重要病理环节。那么，与此相对的拮抗自由基损伤便成为重要的治疗手段。此外，模型组3h时相大鼠脑心组织及血液中SOD含量明显下降，48h内持续在低水平，无上升迹象。SOD是体清除氧自由基、防止生成羟自由基、阻断自由基病理性连锁反应最重要的防御酶。提示脑梗死时脑心组织及血液自由基清除能力快速持续低下，这是造成自由基对脑心组织损伤的一个重要因素。提高自由基清除能力是防治自由基损伤的一个重要治疗方法。模型组3h时相脑心组织及血液中SOD均显著下降，MDA均显著升高。模型组动物在48h内，脑组织SOD持续在一较低水平，MDA含量进行性增高;而心肌组织及血液中SOD、MDA含量也出现了同样的变化趋势。提示:脑梗死发生后心肌组织及血液的脂质过氧化损伤与脑组织的脂质过氧化损伤同步进行。血液中SOD、MDA含量变化在一定程度上可以反映脑心组织SOD、MDA含量变化。
3.2 脑梗死后自由基损伤脑心机制 一般认为，由于自由基化学活性特高，因而其半衰期和作用半径极小，如OH - 的半衰期仅为几个微秒，作用幅射半径<100nm，故自由基的作用是一种量子效价。但是自由基的脂质过氧化产物却可作用于其他亚细胞器，并可进入细胞外间隙发挥远距离作用。脑梗死后脑组织因缺血缺氧产生大量自由基，大量自由基可释放入血，随血流到达心肌组织，在此增殖和再循环而损伤心肌组织。另外，脑梗死后产生皮层-下丘脑-垂体-靶腺这样一个连锁应激反应，使血液中儿茶酚胺、去甲肾上腺素等一些神经递质及介质大量增加，作用于心血管系统，使心肌组织血流量下降。心肌组织细胞因缺血缺氧产生自由基增多，脑心组织中活性自由基过量增多，一方面消耗了大量SOD;另一方抑制SOD活性。因此，SOD也明显减少。细胞膜磷脂中多聚不饱和脂肪酸和脂肪酸的不饱和双键，极易受到自由基的影响，导致脂质过氧化反应，形成一系列脂质自由基LPO。这些脂质自由基将进一步引起膜的流动性降低，通透性增高，线粒体肿胀，溶酶体破坏和释放，造成细胞水肿、代谢及微循环障碍。微循环障碍致组织灌注量进一步下降，组织缺血缺氧又促使自由基产生增多，形成恶性循环，使脏器损伤加重甚至衰竭。
3.3 拮抗自由基损伤是针刺防治脑梗死致脑心损伤的重制 实验结果显示，针刺组大鼠脑、心组织及血液中SOD明显升高，MDA含量显著下降，与模型组比较差异均有显著性（P<0.05或P<0.01），与正常组差异无显著性（P>0.05）。MDA反映组织细胞氧化损伤程度，SOD能使自由基转化、清除和保护组织细胞，它的活性变化代表抗氧化损伤能力。以上结果说明，针刺人中、内关能明显拮抗自由基损伤，显著提高机体自由基的清除能力，从而减少脑梗死病理过程中自由基对脑心组织的损害，保护脏器组织细胞。其具体机制有待进一步探讨。
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（编辑新 竹）
作者单位:300193天津中医学院第一附属医院急诊部