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【摘要】 目的 研究促红细胞生成素对慢性肾衰患者红细胞免疫机制的影响及作用机制。方法 检测31例经促红细胞生成素（EPO）治疗的慢性肾衰患者的红细胞受体花环率（PCR），并与36例非EPO治疗慢性肾衰患者进行比较，同时对EPO治疗组患者从分子水平研究了红细胞分子流动性（Pf）及红细胞脂质过氧化产物丙二醛（MDA）测定。结果 发现血红蛋白与MDA呈负相关，MDA与Pf呈正相关，PCR与Pf呈负相关。EPO可以提高慢性肾衰患者的红细胞免疫功能。结论 EPO调节红细胞免疫功能的机制可能与EPO清除体内的氧自由基，改善慢性肾衰患者的红细胞膜脂蛋白构象，增强C3b受体的活性有关。
关键词 促红细胞生成素 红细胞免疫 红细胞膜脂分子流动性
The improvement of erythrocyte immune function of uremia patients
with rhu-EPO and its possible mechanism
Li Chunzheng，Gao Guizhi
Department of Nephrology，the First Hospital Affiliated of Jinzhou Medical University，Liaoning121001.
【Abstract】 Objective To find the infection of erythrocyte immune function of uremia patients treated with recombinat human erythropoietin（rhu-EPO）and its possible mechanism. Methods We detected erythrocyte C3b receptor rosette（RCR）of 31 cases uremia patients with rhu-EPO and contrasted with 36 cases non rhu-EPO patients. From molecule level we detected erythrocyte membrane fluidity（Pf）and erythrocyte lipid peroxidation Malondialdehyde（MDA）.Results Rhu-EPO may improve RCR of uremia patients. We found Hb was inversely correlated with MDA and MDA correlated negatively with Pf and RCR correlated negatively with Pf too. Conclusion rhu-EPO may increase erythrocyte immune function of uremia patients and its mechanism may be relatively with rhu-EPO can clear away oxygen free radicals in vivo. improve uremia patients RBC framework and increase C3b receptor activity.
Key words recombinat human erythropoietin（rhu-EPO） erythrocyte immune function erythocyte membrane fluidity
80年代初，国外学者提出红细胞免疫问题，指出红细胞具有携带及消除免疫复合物，促进吞噬细胞吞噬等多种免疫功能，近年来，随着人类重组红细胞生成素的合成并广泛应用于临床治疗肾性贫血，人们进一步观察到用药后慢性肾衰患者的感染率下降，更支持红细胞免疫学说，本文对31例慢性肾衰非透析治疗的患者应用促红细胞生成素（EPO），观察其红细胞免疫功能的变化，并通过对红细胞膜脂分子流动性测定及红细胞脂质过氧化产物丙二醛测定，从分子水平研究EPO提高红细胞免疫功能的机制，现报告如下。
1 资料和方法
1.1 临床资料 慢性肾功能不全患者67例，分为2组，其中EPO治疗组31例，男18例，女13例，年龄24～68岁，平均41.3岁，平均血肌酐浓度（Scr）1136.22±386.12μmol/L，平均尿素氮浓度（BUN）28.96±8.24mmol/L，非EPO治疗组36例，男21例，女15例，年龄21～58岁，平均31.8岁，平均Scr1080.06±594.02μmol/L，平均BUN29.38±10.36mmol/L，对照组为健康献血员，共28名，男20名，女8名，年龄26～35岁，平均29.7岁。
1.2 治疗方法 应用EPO治疗组患者，采用沈阳三生公司生产的益比奥（rhu-EPO）10000U1次/周注射，共用8周，用药期间均不使用免疫抑制剂和其他影响免疫的药物，并且未输血。
1.3 检测指标
1.3.1 红细胞免疫功能测定 记录红细胞C3b受体花环率，采用郭氏法［1］，清晨空腹采静脉血1ml，肝素抗凝，以结有2个或2个以上酵母菌的红细胞为一个花环，计数200个红细胞酵母花环百分率。
1.3.2 红细胞膜脂分子流动性测定 静脉血肝素抗凝以后，按Michael高速离心法制备红细胞膜，采用MPF-66荧光分光光度计及偏振光元件测Ⅰ11，Ⅰ2，Ⅳ，ⅠH，计算偏振度Pf值。
1.3.3 红细胞脂质过氧化产物丙二醛（MDA）测定 肝素抗凝血分离红细胞后采用硫代巴比妥酸显色法测定。
2 结果
2.1 慢性肾衰患者红细胞C3b受体花环率低于正常对照组，P<0.01，EPO治疗后与非EPO组相比，RCR升高，P<0.01，但仍未达健康人水平。见表1。
表1 EPO对慢性肾衰患者RCR的影响 （x±s）（略）注:与健康对照组比较 Δ P<0.01;与非EPO组比较 ˇ P<0.01
2.2 EPO组治疗前MDA、红细胞膜脂分子流动性Pf明显升高，P<0.01，治疗后Hb升高，MDA及Pf下降，P<0.01，但仍高于正常。见表2。
表2 治疗前后患者Hb、MDA、Pf变化情况 （x±s）（略）注:与治疗后比较， ˇ P<0.01;与健康对照组比较 Δ P<0.01
2.3 EPO治疗组患者睡眠改善，食欲增强，上呼吸道及泌尿道感染发生率下降，生活质量提高。
2.4 检测指标之间的相关分析与显著性，见表3。
表3 检测指标之间的相关分析与显著性（略）
3 讨论
促红细胞生成素是一重要的红细胞生成调节激素，主要由肾脏分泌并作用于骨髓红细胞系统，促进红细胞的产生和成熟［2］，因此用来治疗肾性贫血，但它对红细胞免疫功能的影响及其可能机制，国内外报道较少。
1981年，Siegel提出红细胞免疫系统的概念［3］证实红细胞膜上存在有免疫粘附活性的C3b受体，通过其免疫粘附作用，红细胞得以实现携带及消除免疫复合物，促进吞噬细胞吞噬等多种免疫功能。本文采用郭氏创立的红细胞C3b受体花环试验，检测红细胞免疫功能，结果显示，慢性肾衰患者RCR降低，说明其红细胞免疫吸附功能下降。
用荧光偏振法测定红细胞膜脂分子流动性发生慢性肾衰患者红细胞膜偏振度Pf值明显高于健康人，说明其流动性较健康人明显降低，（Pf值越大，膜流动性越小），红细胞膜的流动性与红细胞的变形能力，氧弥散及离子通道等多种功能密切相关，故膜流动性的损伤必然影响红细胞的寿命与功能，同时慢性肾衰患者存在自由基代谢紊乱，红细胞脂质过氧化产物丙二醛（MDA）增高，其含量与Pf值呈正相关，说明红细胞脂质过氧化是导致膜流动性下降的主要原因。MDA共价结合膜成分改变膜表面的抗原性，而被吞噬清除［4］。同时也使膜上的C3b各受体生成减少，活性减低。
应用EPO治疗8周后，红细胞MDA含量降低，红细胞膜脂分子流动性提高，EPO能够清除氧自由基，降低Pf从而提高红细胞膜脂分子流动性，减缓红细胞膜老化，并发现RCR与Pf值呈负相关。r=-0.61（P<0.01），可见红细胞膜脂流动性增强则RCR升高，从另一方面解释EPO提高RBC免疫粘附功能的机制是通过氧自由基的清除，红细胞膜微环境的改善，从而改善了C3b受体的活性。
综上我们得出结论慢性肾衰患者经EPO治疗后，Hb上升（P<0.01）证实了EPO能够促进红细胞生成，增加红细胞数量，接受EPO治疗的患者RCR明显升高，提示EPO在改善贫血的同时，能够增强红细胞免疫功能。本组患者于EPO治疗后，抗感染能力增强，也支持这一结论，至于EPO调节红细胞免疫的机制，可能与EPO清除氧自由基，改善慢性肾衰患者的红细胞膜微环境，提高了C3b受体活性有关。
参考文献
1 郭峰，赵中平.中华医学杂志，1982，62:715-716.
2 翟德佩.中华肾脏病杂志，1993，9:43-45.
3 Siegel I.Linliu T.Lancet，1981，2:556-559.
4 吴其原.体液因素和血液循环病理生理学，北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1991，230.
作者单位:121001辽宁省锦州医学院附属第一医院
（收稿日期:2004-02-04） （编辑 松石）