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【摘要】 目的 探讨雷公藤多苷治疗类风湿关节炎的部分作用机制。 方法 采用Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型，对大鼠的关节肿胀指数、外周血IL—1β及TNF-α和关节滑膜的病理变化进行观察。 结果 雷公藤多苷能显著减轻大鼠关节肿胀指数、显著降低外周血IL-1β和TNF-α、减轻关节滑膜病理改变。 结论 雷公藤抑制IL-1β和TNF-α，是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。
关键词 雷公藤多苷 大鼠关节炎模型 类风湿关节炎
Effects of Tripterygium glycosides（TG）on IL-1βand TNF-αin collagenⅡ-induced arthritis rats model
Jiang Ting，He Dongyi，Feng Wei，et al.
Shanghai Guanghua Hospital of Combination of TCM and Western Medicine inTreating Rheumtoid Arthritis，Shanghai200052.
【Abstract】 Objective To study the mechanism of TG treating rats collagenⅡ-induced arthritis（CIA）which is similar to human Rheumatoid Arthritis（RA）.Methods The rats were immunized with the complex of colla-gen-Ⅱand complete Frund's adjuvant.After treated with TG，swelling index of joints，histopathology of joint's synovium and serum IL-1βand TNF-αin these rats were examined.Results The results showed that the TG can decrease the swelling index of joints and level of IL-1βand TNF-αand also relieve the change of histopathology in joint's synovium in these rats.Conclusion To regulate the level of IL-1βand TNF-αis the main mechanism of TG to treat RA.
Key words Tripterygium glycosides collagenⅡ-induced arthritis rats model rheumatoid arthritis
近年来中药雷公藤在类风湿关节炎（以下简称类风关）的治疗中得到广泛应用 ［1，2］ 。雷公藤具有抗炎、镇痛、免疫作用，是临床较为理想的中药之一，本研究采用Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型 ［3］ ，以甲氨蝶呤作阳性对照，研究观察大鼠的关节肿胀指数、外周血IL-1β及TNF-α和关节滑膜病理的变化，探讨雷公藤多苷治疗类风湿关节炎的部分作用机制。
1 材料与方法
1.1 主要药物及试剂
1.1.1 主要药物 雷公藤多苷（泰州美通药业有限公司，批号z32021007）。
1.1.2 主要试剂 弗氏完全佐剂（CALBIOCHEM lot B47895）、醋酸、卡介苗（国产）、鸡Ⅱ型胶原（由上海本草生物医学工程研究所费桂军老师馈赠），IL-1β（TPI Inc IR043）和TNF-α（TPI Inc IR0820）ELISA试剂盒。
1.2 动物模型制备
1.2.1 动物 清洁级雌性Wistar大鼠34只，4～6周龄，体重（180±10）g，由中科院动物中心提供。
1.2.2 造模方法 ［4］ 将鸡Ⅱ型胶原用5g/L的浓度溶于0.01mol/L的醋酸溶液中，与等体积弗氏完全佐剂混合，制成乳剂，加入卡介苗，其中卡介苗的浓度为2g/L;以0.1ml/只的剂量在实验大鼠的尾部和背部进行皮内注射免疫;14天后足部皮下加强免疫1次（0.01ml）。普通饲料喂养在清洁级环境中;饮料为自来水，自由饮用。
1.3 分组与治疗 模型完成后分组。空白组:10只，生理盐水2ml/100g灌胃，每日1次;模型组:12只，生理盐水2ml/100g灌胃，每日1次;治疗组:12只，雷公藤多苷溶液2.5ml/100g灌胃，每日1次（含生药1.6mg，相当成人的等效剂量）。
1.4 观测标本的采取 造模18天给药，治疗时间为3周;造模后39天取材，将大鼠麻醉后，抽血，分离血清，-70℃保存生化检测备用，同时打开关节腔，取出滑膜组织，70%酒精固定，备用组织切片。
1.5 检测项目和方法
1.5.1 关节肿胀指数 采用0～4级关节评分法 ［5］ ，0分:无关节炎;1分:小趾关节轻度肿胀;2分:小趾关节和足跖肿胀;3分:踝关节以下的足爪肿胀;4分:包括踝关节在内全部关节肿胀;给药前为观察点1，以后喂药，每周1次，共3周，有3个观察点。
1.5.2 生化检测 IL-1β（TPI Inc IR043）和TNF-α（TPI Inc IR0820）ELISA试剂盒购自TPI Inc公司;酶标仪Wellscan MKⅡ型。方法:标准品和血清均加100μl2℃～8℃孵浴2h，冲洗4次;加入100μl过氧化物联接酶底物，2℃～8℃孵浴1h;冲洗4次;室温下加入TMB底物，孵浴30min;1M的硫酸终止反应;30min内完成光密度测定，λ=450nm。
1.5.3 病理切片 常规HE染色。
1.6 统计学方法 计量资料采用t检验。
2 结果
2.1 关节肿胀指数 见表1。
表1 关节肿胀指数 （略）注:与模型组比较， ★ P<0.01
空白组大鼠关节肿胀指数在各观察点关节指数为0，在观察点1:治疗组与模型组间差异无显著性。在观察点2:各组间差异无显著性。在观察点3:治疗组与模型组间差异无显著性。在观察点4:治疗组与模型组间差异无显著性。
2.2 血清TNF测定 见表2。
表2 血清TNF的测定 （略）注:治疗组与模型组比较， ★ P<0.01 2.3 血清IL-1β测定 见表3。
表3 三组血清IL-1β的测定 （略）注:治疗组与模型组比较， ★ P<0.01
2.4 大鼠膝关节滑膜的组织学观察 （1）正常大鼠滑膜及关节面未见病变，滑膜衬里层由1～2层滑膜细胞组成且部分不连续，滑膜衬里下层则为脂肪细胞和血管，未见炎症细胞浸润、成纤维细胞及胶原纤维，见图1;（2）模型组动物膝关节内滑膜组织肿胀，滑膜上皮层增厚，滑膜细胞增大，数量增多，滑膜下明显炎症。滑膜组织内结缔组织中血管充血，毛细血管明显增多，纤维组织疏松，可见较多的慢性炎细胞浸润，关节软骨可见大小不等的片状坏死灶，边缘不整，见图2;（3）治疗组上述病变均程度不同地较关节炎模型组为轻，主要表现在关节软组织内炎细胞数量减少，少见血管翳形成，关节软骨破坏，边缘不整，见图3。
3 讨论
类风湿关节炎是一种以慢性进行性关节病变为主的自身免疫性疾病，目前发病机制尚不完全清楚，近年来大量研究表明:在类风关患者中Th1细胞及其分泌细胞因子占显著优势 ［6］ ，滑液中Th1/Th2细胞比值明显升高，且与血沉、C-反应蛋白呈正相关 ［7］ ，其中Th1细胞分泌IL-1和TNF是类风关发病机制中居中心地位的促炎细胞因子，主要参与激活血管内皮细胞、增加内皮细胞及内皮细胞黏附分子的表达，使中性粒细胞在滑膜腔内聚集，刺激滑膜细胞和中性粒细胞产生前列腺素等炎性介质，还能刺激软骨细胞和破骨细胞减少糖蛋白合成，增加糖蛋白降解，并产生胶原酶及其他中性蛋白酶，从而导致类风关滑膜、软骨和软骨下骨的破坏，在类风关炎症中处于中心地位 ［8］ 。因此，如何调节Th1细胞分泌的IL-1和TNF平衡，控制类风关炎症是目前国内外研究的热点 ［9］ 。Ⅱ型胶原诱导关节炎（collagenⅡ-induced arthritis，CIA）模型是目前国际公认的研究人类类风关的模型，在临床、免疫病理反应等方面极为相似 ［3］ ，本研究采用CIA大鼠模型来探讨雷公藤多苷治疗类风关的部分作用机制。雷公藤多苷是临床治疗类风关的常用药物，本实验结果显示:其能减轻模型大鼠关节肿胀指数，降低IL-1β、TNF-α水平，减轻关节滑膜的炎症，提示雷公藤多苷能调节Th1细胞分泌细胞因子IL-1β、TNF-α水平，为雷公藤多苷治疗类风关提供了一定的理论依据。 （本文图片见封三）
参考文献
1 黎桃英，肖宛平，熊伟，等.雷公藤煎剂治疗类风湿关节炎70例临床分析.中国中西医结合风湿病杂志，1998，7（4）:230-231.
2 傅建斌，梁遂兴，任利群，等.雷公藤多甙对类风湿关节炎患者血浆TNF-α水平影响的研究.中医正骨，2001，13（9）:13-14.
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8 蔡青，盂济明.IL-1和TNF与类风湿关节炎.上海免疫学杂志，1998，18（11）:62.
9 Maini，RN，Taylor PC.Anti-cytokine therapy for rheumatoid arthritis.Annu Rev Med，2000，51:207-229.
（编辑新 竹）
作者单位:200052上海市光华中西医结合类风关专科医院
200020上海市骨伤科研究所