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【摘要】 目的 分析龈沟液（gingival crevicular fluid，GCF）白细胞介素-1β（interleukin-1 beta，IL-1β）的含量变化规律及其与牙周炎的关系。方法 采用酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试验对健康人以及慢性牙周炎患者牙周基础治疗前后龈沟液中IL-1β的含量进行检测。结果 IL-1β总量在治疗前牙周炎位点明显高于健康位点，差异有非常显著性（P<0.01）。经牙周治疗后，IL-1β总量明显减少，且差异有非常显著性（P<0.01）。结论 龈沟液中IL-1β水平与牙周炎症程度密切相关。
【关键词】 牙周炎；龈沟液；IL-1β；酶联免疫吸附试验
The research of relation between periodontitis and content of HGF and IL-1β in gingival crevicular fluid
LIU Li-ying，ZHAO Man-lin，CUI Zhan-qin，et al.The Second Hospital of Baoding，Baoding，071051 China
【Abstract】 Objective To discuss the relationship between the level IL-1β in GCF and periodontitis.Methods The content of IL-1β in healthy periodontal sites and in periodontitis sites before and after periodontal treatment were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results The level of IL-1β in periodontitis sites is significantly higher than in healthy sites.After scaling and root planing，the level of IL-1β in GCF decreased apparently.Conclusion There is a closely correlation between the level of IL-1β in GCF and the degree of periodontal inflammation.
【Key words】 periodontitis；gingival crevicular fluid；interleukin-1 beta；enzyme-linked immunosorbent assay
牙周炎是最常见的口腔疾病之一，龈沟液中含有各种宿主反应因子和细菌因子等成分。这些成分在牙周炎症的发生发展中有重要意义。白细胞介素-1β(IL-1β)是一种存在于龈沟液中的具有多种生物学活性的细胞因子，在牙周免疫破坏中起重要作用。本研究应用酶联免疫吸附试验检测龈沟液中IL-1β治疗前后的变化，探讨该细胞因子在牙周炎发生发展过程中的作用。
1 资料与方法
1.1 病例选择 在2002年9月~2003年9月期间，从河北医科大学第二医院口腔内科门诊患者中选择自愿参加本研究的慢性牙周炎患者12例，其中男7例，年龄31~43岁，女5例，年龄35~45岁，平均年龄40.5岁。要求牙周探诊深度（PD）≥4mm，牙龈指数（GI）≥1，附着丧失（AL）≥2mm。从每位患者口腔中选择2~4个不相邻牙周位点，所取位点均为单根牙近中唇侧，共35个位点。再随机选取15例牙周健康者，男8例，年龄28~35岁，女7例，年龄26~31岁，平均年龄31.75岁。从每人口腔中选取1个健康牙周位点。要求PD<2mm，GI为0，AL为0。所取位点均为单根牙近中唇侧，共15个位点。要求所有研究对象没有系统性疾病。在检查前至少6个月内未接受过牙周治疗，3个月内未服用过抗生素、免疫调节剂、避孕药等，妇女未妊娠。试验分为两组，对照组试验组。
1.2 GCF样本的收集及测量 用滤纸条浸润法收集GCF样本并定量和贮存，取样后记录GI、PD和AL。每个位点用2条滤纸，每条滤纸的测量间隔1min。测量前将2条滤纸放入Eppendorf（EP）管中用电子天平测量其重量。隔湿取样牙，轻轻吹干牙面，将已裁好的滤纸条（2mm×8mm）轻轻插入牙周袋，直至遇有轻微阻力为止。置30s后取出。如滤纸条沾有血则弃去不要。将2条滤纸作为一个样本放入EP管中，用电子天平称重后再按比重为1mg/μl换算为体积。将装有滤纸条的微离心管用锡纸包好立即放入-70℃的冰箱中。然后对患者行全口洁治及取样牙位刮治，并进行口腔卫生指导等基础治疗。洁刮治均由同一名有经验的临床医师完成。取样牙位治疗后4周复查，重复前述步骤。
1.3 IL-1β的检测 将受检样本及试剂盒平衡至室温后，在装有GCF样本的EP管中加入110μl标准品稀释液，用1500转/min的离心机离心3min洗脱滤纸条上的GCF。然后用移液管取出100μl加入相应的反应板中用于分析。分析过程严格按照试剂盒所附说明进行操作。
1.4 统计学方法 数据统计分析采用SPSS 11.0统计软件进行统计分析。计量资料采用配对t检验，Pearson相关性检验，等级资料采用秩和检验及Spearman相关性检验。
2 结果
2.1 试验组与对照组IL-1β总量比较 见表1。
表1 试验组与对照组IL-1β总量比较 （略）
2.2 治疗前后PD、GI、AL、GCF的比较 见表2。
表2 治疗前后PD、GI、AL、GCF的比较 （略）
2.3 治疗前后IL-1β总量的比较 见表3。
表3 治疗前后IL-1β总量的比较 （略）
3 讨论
牙周炎以牙周组织的进行性破坏为特点。越来越多的实验证明，细胞因子在牙周组织的破坏机制中起到重要的免疫调节作用和直接介导作用。IL-1是由多种细胞分泌的一种免疫调节因子，是一种单核细胞因子。在炎症反应和免疫应答过程中有着广泛的生物学效应［1］。人体内IL-1活性主要由IL-1β介导。研究表明：IL-1β能直接或协同其他细胞因子间接刺激骨吸收，可抑制骨形成，抑制金属蛋白酶组织抑制因子，导致结缔组织降解；抑制人牙周纤维成纤维细胞碱性磷酸酶基因的表达，在牙周病灶中，不利于硬组织的形成和骨性愈合［2，3］。
试验结果表明牙周炎位点IL-1β总量是（95.78±5.17）pg/site，是健康位点的4.47倍，推测可能是由于龈沟液中的细菌产物脂多糖等诱导IL-1合成，许多与牙周炎有关的G-菌都能介导IL-1产生，其中细胞壁上的脂多糖是诱导IL-1产生的强刺激剂。IL-1激活T淋巴细胞、巨噬细胞、内皮细胞等，释放大量的细胞因子，直接趋化激活中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞及肥大细胞等在牙周组织的聚集和浸润，并释放前列腺素、白三烯B4等多种酶和炎症介质，参与牙周炎的形成。Hoenig等［4］用ELISA法检测牙周炎患者牙龈组织中IL-1β含量，发现试验组织中IL-1β的含量高达126~2161pg/mg，而正常的牙龈组织中未能检测出IL-1β，且牙周病变部位的龈沟液中IL-1β含量也高于健康对照组。GI为判断龈炎严重程度的特征性指标，PD和AL为诊治牙周炎和判断预后的重要指标，经牙周基础治疗后，这些临床指数有很大改进。本试验结果表明，治疗后GCF中IL-1β总量明显降低，其差异有显著性，且IL-1β总量下降的变化趋势与牙周临床症状改善相一致，这与Houl等［5］的研究结果相似。可能是由于牙周洁刮治使牙周致病菌减少，从而使牙周组织受脂多糖刺激而产生的IL-1减少，缓解了牙周组织的炎症反应和免疫反应。据此我们认为IL-1β总量可以反映牙周疾病状态。
目前对于IL-1β的研究尚不够透彻，仍有许多问题如IL-1β与其他的细胞因子的关系，IL-1β在牙周炎形成、发展中所起作用的具体分子学机制等；还有待于更加深入的研究和进一步的探讨。
【参考文献】
1 冯雪.介导牙槽骨吸收的主要细胞因子.牙体牙髓牙周病学杂志，1997，7（3）：206-208.
2 Birkedal-Hansen H.Role of cytokines and inflammatory mediators in tissue destruction.J Periondont Res，1993，28：500-510.
3 牛忠英，史俊南，肖明振，等.IL-1β对HPLF碱性磷酸酶基因表达的影响.中华口腔医学杂志，1993，28（2）：73-74.
4 Hoenig JF，Rordorf-Adam C，Siegmund C，et al.Measurement of interleukin 1 alpha and 1 beta in human cystic lesions of the jaw.Implications for the pathoge-nesis of radicular cysts.J Periodont Res，1990，25(4)：156.
5 Houl T，LinC M，Rossomando EF.Crevicular interleukin-1β in moderace and severe periodontitis patients and the effect of phase I periodontal treatment.J Clin Periodontal，1995，22：162-167.
作者单位： 1 071051 河北保定，保定市第二医院口腔科
2 050000 河北石家庄，河北医科大学第二医院
(编辑：于 伽)