HPLC法测定维生素E片含量

【摘要】  　　目的 建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。方法 采用Shimadzu C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇为流动相；检测波长为284 nm，流速1.5 ml·min-1。结果 维生素E在0.125～5.0 mg·ml-1范围内，峰面积与其浓度线性关系良好（r＝0.999 9），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101.4％～102.7%，RSD为0.46％～0.71%，最低检测限为0.4μg·ml-1。结论 本法准确、简便、快速，适用于维生素E片的含量测定。

【关键词】  维生素E；高效液相色谱法；含量测定

　　Determination of Vitamin E in Tabellae VitE by HPLC

    DAI Jing,ZHU Jun,ZHAO Miao,YANG Wan-qing

    (Department of Pharmacuetical Analysis,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)

    Abstract：Objective To establish a RP-HPLC for determination of Vitamin E.Method Vitamin E was determinated on HPLC instrument fixed a Shimadzu C18 column (4.6mm×250mm，5μm) with UV detection at 284nm, and the mobile phase was MeOH, the flow rate was 1.5ml·min-1.Results The calibration curve was linear(r=0.9999)within the range of 0.125～5.0 mg·ml-1 for Vitamin E, the average recovery rates were from 101.4% to 102.7% for three different levels of the amount of Vitamin E,RSD was from 0.46％ to 0.71%,and LOD was 0.4μg·mL-1.Conclusion This method was simple，quick，accurate and effective for determination of Vitamin E.It was suitable for the quality control for tabella Vitamin E.

    Key words:Vitamin E;HPLC;determination

     维生素E又称生育酚，是一种脂溶性物质，在人体内主要参与生育功能、肌肉代谢等过程，具有强大的抗氧化性，是人体必须的微量元素之一。目前VitE的主要分析方法包括化学发光抑制法［1］、UV法［2］、GC法［3］、荧光法［4］和HPLC法［5］等。在这些方法中化学发光法仪器要求特殊，而荧光法、UV法、GC法易受到辅料干扰。本文采用反相HPLC法测定VitE片含量，方法准确，不受其他成分干扰，取得比较满意的效果。

    1  仪器及试剂

    SPD-M10A高效液相色谱仪（日本岛津）、LC-10AT 紫外检测器（日本岛津）；甲醇（分析纯，山东省禹王实业总公司禹城化工厂）、无水乙醇（分析纯，沈阳正信高科技研究所试剂部）、维生素E醋酸酯对照品（日本信越制药株式会社）、维生素E片（沈阳药科大学药分教研室提供）。

    2  色谱条件与系统适用性试验

    色谱柱：Shimadzu C18柱（5 μm,4.6 mm×250 mm）日本岛津公司；流动相：甲醇；流速：1.5 ml/min; 进样体积：20 μl；检测波长：284 nm；柱温：35 ℃；理论塔板数按维生素E峰计算应不低于5 000。

    3  溶液的配制

    3.1  对照品溶液制备  取VitE对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含VitE 1.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

    3.2  供试品溶液配制  取VitE片10片，精密称定、研细。精密称取细粉适量加无水乙醇制成每1ml中含VitE 1.5 mg的溶液，摇匀。过滤，弃去初滤液，取续滤液作为含量测定的供试品溶液。

    4  方法的专属性考察

    在上述色谱条件下, 分别取对照品溶液、供试品溶液及流动相20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的主峰与对照品溶液的主峰位置相同（约15 min），空白辅料在VitE峰位置处无色谱峰，VitE峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。试验表明该方法具有良好的专属性，见图1。

    5  方法学考察

    5.1  线性关系及检测限

    A.blank adfuvant solutionB.ControlC.Sample

    图1  维生素E HPLC色谱图

    Fig.1  HPLC chromatogram of Vitamin E

    取VitE对照品适量，精密称定，用无水乙醇制备成含VitE 0.125、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0 mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20(l注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y对维生素E浓度X进行线性回归，得回归方程为：y=3 149 247x+4781.6 r=0.999 9(n=6)。 VitE浓度与色谱峰面积在0.125～5.0 mg·ml-1范围内线性关系良好（r＝0.999 9），检测限为0.4(g·ml-1（S/N=3）。

    5.2  精密度试验

    取VitE 对照品适量，精密称定，用流动相制备成含VitE 0.5、1.0、2.0 mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20 μl注入液相色谱仪，重复进样5次。各浓度峰面积的RSD分别为0.95%、0.55%、0.63%(n=5)。

    5.3  重复性试验

    取维生素E片10片，按3.2项下方法平行制备6份，分别进样20 μl；同时取对照品溶液20μl进样，按外标法测定标示百分含量。测得VitE标示百分含量的RSD为0.65% (n=6)。

    5.4  回收率试验

    精密量取VitE 对照品适量，照处方比例分别按高、中、低三个浓度（每个浓度各3份）与处方量的辅料混合均匀。按3项下方法制得供试品溶液，分别进样20 μl进行测定，按外标法分别测得高、中、低3浓度的回收率分别为102.7％，102.2％，101.4％；RSD分别为0.54％，0.46％，0.71％。

    5.5  稳定性考察

    用供试品溶液（1.5mg·ml-1），在不同时间（1、2、3、4、6、8h）进样20μl，峰面积的RSD为1.2%。供试品溶液在8h内稳定。

    5.6  样品测定

    分别取VitE片（三批样品分别是690 213、690 219、690 226）及VitE对照品适量，照3项下方法制备。精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算出各处方样品含量，三批VitE片中VitE的标示百分含量分别是99.97%，98.76%，102.09%，RSD分别为0.75%、0.62%、0.38%。

    6  讨论

    本文比较甲醇/水、甲醇/乙腈、甲醇/冰醋酸

    几种流动相，因VitE为脂溶性维生素，在甲醇/水流动相中出峰时间延长（大于25min）,峰形较差，故而没被采用。而甲醇/乙腈、甲醇/冰醋酸作为流动相，虽然能够得到较好的峰形和出峰时间，但均因溶液配制复杂，价钱昂贵等原因没被采用。

【参考文献】
  ［1］李利军，钟招亨,等.流动注射化学发光抑制法测定维生素E［J］．分析试验室，2006，25（9）：107-111.

［2］张洪，马俊玲.二阶导数分光光度法测定维生素E霜的含量［J］．广东药学院学报，2000,16(2)：112-114.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典（第二部）［K］．2005年版.北京：化学工业出版，2005：798-799.

［4］王晋玲，许金钩.同步荧光分析法测定维生素E［J］．药物分析杂志，1993,13(2)：98-100.

［5］罗功才.高效液相色谱法测定维参锌胶囊中维生素E的含量［J］．药物分析杂志，2000,20（6）：424-425.