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【摘要】 目的 研究川芎嗪对任意型皮瓣存活率的影响，探讨其抗氧化作用与皮瓣成活的关系。方法 在大鼠任意皮瓣形成后分别应用不同剂量（低剂量组：20 mg·kg-1/d、高剂量组80 mg·kg-1/d的盐酸川芎嗪注射液行腹腔注射，计算皮瓣存活率，检测远端皮瓣组织丙二醛含量。结果 川芎嗪高剂量实验组皮瓣存活率较对照组增高(P<0.05)，对照组与低剂量实验组差异无统计学意义；高剂量实验组远端皮瓣组织丙二醛含量出现明显下降(P<0.05)。结论 一定剂量川芎嗪的应用能够提高大鼠任意型皮瓣的存活率，其作用机制可能与其拮抗氧自由基损伤作用有关。
【关键词】 皮瓣； 川芎嗪； 氧自由基
Preliminary Investigation of the Influence of Tetramethylpyrazie on the Survival of a Random Skin Flap
LIU Yilun1，SUN Jing2. (1.Department of Burn & Plastic Surgery, First Affiliated Hospital of Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China； 2.Department of Pathology，Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)
【Abstract】 Objective To investigate the influence of tetramethylpyrazie on the survival of a random pattern skin flap and the role of antioxidation of tetramethylpyrazie. Methods A random pattern skin flap(7cm×2cm) was cranially designed and elevated on the back of Wistar rats. An image analysis technology was used to evaluate the survival rate of the skin flap, while a biochemistry method was used to test the concentrations of the malondialdehyde in the tissue. Results The survival area of the flap in the high dose tetramethylpyrazietreated group was significantly enlarged (P< 0.05) in seven days postoperatively compared with the control group. The malondialdehyde concentration decreased significantly in the high dose group compared with the control group. There was no statistical difference between the control group and the low dose group. Conclusion The survival rate of the random pattern skin flap was improved after application of high dose of tetramethylpyrazie.The mechanism may be correlated with the antioxidation of tetramethylpyrazie.
【Key words】 skin flap; tetramethylpyrazie; oxygen free radical
皮瓣移植是修复组织缺损、重建功能的重要措施之一。提高皮瓣的成活率仍是目前临床工作中需要解决的问题。川芎嗪化学名为四甲基吡嗪（Tetramethylpyrazie,TMP；Lingustrazine LIG）,有研究证明，川芎嗪不仅可扩张血管、增加血流量、抑制血小板聚集和降低血小板活性，亦具有拮抗氧自由基损伤的作用，目前已有大量有关其防治心、脑、肾等器官缺血再灌注损伤的研究［1～3］。而川芎嗪对皮瓣的作用少有报道。本实验采用川芎嗪干预任意皮瓣的成活，并检测皮瓣组织中丙二醛(MDA)含量的变化情况，探讨其相关作用机制。
1 材料和方法
1.1 实验分组与给药方法 健康Wistar大白鼠63只(购自四川大学实验动物中心)，雌雄不拘，体重170±20 g，室温20±2 ℃.随机分为对照组、实验1组、实验2组。每组21只，各分出7只作为观察术后皮瓣成活情况的对象，另外14只分2批作远端皮瓣组织MDA指标检测用。
采取大鼠腹腔注射给药，盐酸川芎嗪注射液为山西康意制药有限公司生产(批号：070509,规格：2 ml(40 mg)/支)；对照组予生理盐水4 mg·kg-1/d，实验1组（低剂量实验组）盐酸川芎嗪注射液剂量为20 mg·kg-1/d，实验2组（高剂量实验组）药物剂量为80 mg·kg-1/d，各组均于术后即刻第1次给药，每日分2次给药，至术后第7 d.
1.2 动物模型制备
术前2 d以8%硫化钠脱背部毛，备皮范围约3 cm×8 cm，手术前夜，实验动物禁饮食，术前腹腔内注射4 ml/kg 1%硫喷妥钠注射液，麻醉成功后俯卧位固定，鼠背中线为皮瓣纵轴，设计以鼠肩胛骨下缘处为蒂，长宽分别为：7 cm、2 cm，皮瓣在内膜深面和深筋膜浅面掀起，按照有关文献处理［4］，使皮瓣成为任意型皮瓣,30丝线原位缝合；距蒂部4 cm以远为远端皮瓣。
1.3 观察指标
1.3.1 皮瓣成活率 术后7 d,麻醉动物，美蓝描画皮瓣范围及坏死部位，以硫酸纸临描，以不同颜色区分坏死与成活区域，扫描后，利用计算机全自动图像分析系统求出皮瓣成活面积与总面积之比，即皮瓣成活率。
1.3.2 皮瓣远端组织匀浆MDA含量 各组均于任意皮瓣形成后2 h、72 h取远端皮瓣组织，参照晏泽等的实验方法制成匀浆后测定MDA含量［5］。测定试剂盒购于北京莱博生物实验材料研究所。MDA以硫代巴比妥酸法测定。MDA与硫代巴比妥酸结合后形成红色产物，在532 nm处测定标本吸光度A值，参照标准品A值以换算出标本MDA含量。
1.4 统计学方法
所有数据均采用均数±标准差表示，使用SPSS软件12.0版本，采用方差分析。
2 结果
2.1 皮瓣成活率
术后7 d，对照组皮瓣成活率为47.74%±6.35%，实验1组为49.38%±8.64%，实验2组为62.44%±7.21%；实验2组与对照组、实验2组与实验1组间差异均有统计学意义(P<0.05)，而实验1组与对照组间差异无统计学意义。
2.2 皮瓣远端组织匀浆MDA含量
皮瓣形成术后2 h、72 h，实验2组大鼠任意皮瓣远端组织匀浆MDA含量均低于对照组及实验1组，而对照组与实验1组间差异无统计学意义（见表1）。表1 大鼠任意皮瓣远端组织MDA含量的变化注：与对照组比较: a ﹡P<0.05；与实验1组比较: b P<0.05。
3 讨论
任意皮瓣在掀起后其远端组织在低灌流状态下常常发生局部缺氧。在此过程中，氧自由基增多直至局部氧化还原态失衡，并通过一系列的氧化反应使得细胞产生功能和结构改变，造成组织损伤。因此，研究氧自由基损伤对于任意皮瓣存活的影响具有重要意义。MDA是氧自由基作用下的过氧化产物，可间接反映出细胞受损程度，所以测定皮瓣远端MDA含量可反映皮瓣缺血后局部组织的损伤情况。
川芎嗪可有效清除氧自由基，在一些缺血再灌注损伤的研究中表现出积极的干预作用，并且认为其能够增加组织内源性超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，减轻毛细血管内皮细胞损伤［2,3］；另外，川芎嗪还具有扩张血管、增加血流量、抑制血小板聚集和降低血小板活性等作用。
本实验研究显示，在川芎嗪应用剂量达到一定程度时能够促进大鼠任意皮瓣的成活率，同时能够降低任意皮瓣远端组织MDA含量；由于MDA是生物膜中多不饱和脂肪酸在氧自由基作用下的过氧化产物，间接反映组织氧自由基损伤程度，MDA含量的下降说明氧自由基的损伤作用得到抑制，因此本实验提示川芎嗪提高任意皮瓣存活率的原因可能与其拮抗氧自由基损伤作用有关。
本实验结果证明了川芎嗪在任意皮瓣存活中的良性干预作用，但是在应用剂量、时间以及其相关毒副作用等方面还需深入研究。本实验在氧自由基损伤机制方面仅检测了MDA一项指标，因此很难反映川芎嗪在抗氧化作用方面的整体作用情况，若要探寻其详细机制，还需做进一步的研究。
【参考文献】
［1］王万铁，陈寿权，徐正阶,等.川芎嗪注射液抗脑缺血再灌注作用机制的实验研究［J］.中华急诊医学杂志，2000，10（3）：182184.
［2］李建生，赵君玫，郭盛典,等.川芎嗪和参麦注射液对缺血再灌注损伤老龄大鼠心肌组织ATP酶和自由基代谢的影响［J］.中国中西医结合急救杂志，2001，8（4）：210212.
［3］孙立江，李玉军，石景森,等.川芎嗪对缺血再灌注损伤肾脏细胞凋亡的影响［J］.第四军医大学学报，2002,23(18):1 6831 685.
［4］Um SC,Suzuki S,Toyokuni S,et al. Involvement of Nitric Oxide in Survival of Random Pattern Skin Flap［J］. Plast Reconstr Surg, 1998,101(3):785792.
［5］晏泽，肖能坎，肖添有,等.任意皮瓣掀起后内皮素、一氧化氮动态变化与皮瓣微循环的关系［J］.西南国防医药，2001,11(1):710.