膀胱移行细胞癌组织中Ecadherin的表达及与血清CA125检测的关系

    Expression of Ecadherin in transitional cell carcinoma of bladder and its relationship with serum CA125

　　Zhang Jian

　　(Department of Urology, The Peoples Hospital of Xingtai, Xingtai 054031, China)

　　ABSTRACT: Objective  To investigate the expression of Ecadherin and its relationship with serum CA125. Methods  Immunohistochemical staining and radioimmunoassay were applied to detect the expression of Ecadherin in 60 cases of transitional cell carcinoma of bladder and the value of serum CA125, and to analyze the relationship between them. Results  34(40%) cases of the expressions of Ecadherin were normal, 36(60%) abnormal. The abnormal expression rate of Ecadherin and the ralue of CA125 rose with the clincal and pathological staging of the carcinoma; the abnormal expression rate of Ecadherin and the value of CA125 of those who had remote metastasis or recurrence of carcinoma were higher than those who had not. The ralue of CA125 was positively related with the abnormal expression of Ecadherin (P<0.01). Conclusion  CA125 could act as an indicator of the malignancy and prognosis of transitional cell carcinoma of bladder.

　　KEY WORDS: transitional cell carcinoma of bladder; Ecadherin; CA125

　　摘要：目的  探讨膀胱移行细胞癌组织中Ecadherin的表达及其与CA125的关系，以及两者与肿瘤临床特征的关系。方法  采用免疫组织化学染色法及放射免疫法检测60例膀胱移行细胞癌标本Ecadherin的表达及血清CA125值，分析表达水平与CA125值的关系。结果  Ecadherin正常表达24例(40%)，异常表达36例(60%)，Ecadherin异常表达率、CA125值随肿瘤临床分期、病理分级的升高而升高(P<0.05);有远处转移者或复发者高于无转移或无复发者(P<0.05)，CA125值与Ecadherin的异常表达呈正相关(P<0.01)。结论  CA125的检测可作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度及预后的指标。

　　关键词：膀胱移行细胞癌；Ecadherin；CA125

　　膀胱移行细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，特点是易复发和转移。Ecadherin是一种钙离子依赖的上皮间粘附分子。研究表明，Ecadherin与膀胱移行细胞癌的恶性程度和预后有关，被视为抑制肿瘤浸润和转移的因子而受到重视\[1\]。CA125是一种膜抗原，广泛存在于体腔上皮起源的各种组织及这些组织发生的肿瘤中。我们采用免疫组织化学方法对不同期级的膀胱移行细胞癌组织中Ecadherin表达情况与CA125值的关系进行研究，探讨CA125是否可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度及预后的指标。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  我院1998年9月至2001年10月间原发性膀胱移行细胞癌患者60例。男性42例，女性18例，年龄41-75岁，平均55.7岁。均行手术治疗，其中经尿道电切42例，膀胱部分切除14例，膀胱全切4例。标本经10%(体积分数)甲醛溶液固定，常规石蜡包埋。按WHO分级标准：G1 17例，G2 30例，G3 13例。临床分期按UICCTNM1998标准：Tis-T1 20例，T2-T4 40例，有远处转移9例，无转移51例。一年内复发6例。另取10例前列腺增生患者的正常膀胱黏膜作对照。术前患者CA125值资料60例，前列腺增生患者CA125值资料10例作对照。

　　1.2  方法

　　1.2.1  主要试剂  鼠抗人Ecadherin单克隆抗体为美国Zymed公司产品，免疫组化SP试剂盒及DAB均购自北京中山生物技术公司。

　　1.2.2  免疫组织化学染色法  4μm石蜡切片脱蜡，逐级乙醇入水，3%(体积分数)过氧化氢孵育，PBS冲洗，微波抗原修复。3%(体积分数)山羊血清封闭，加Ecadherin单抗(1∶100)，以PBS替代一抗作为阴性对照，4℃冰箱过夜，加二抗37℃温箱15min，辣根标记的链霉卵白素37℃温箱15min，DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封片。以乳腺癌组织切片作阳性对照。

　　1.2.3  结果判定标准  按文献\[23\]方法：Ecadherin阳性物质位于细胞膜，呈棕褐色颗粒状。正常表达(+)：阳性细胞数>90%；异常表达(-)：阳性细胞数<90%或仅存在细胞浆染色。

　　1.2.4  血清CA125检测  常规术前取静脉血，采用美国Chiron公司试剂，按仪器说明操作。正常值为20kU/L，>20kU/L为阳性。

　　1.2.5  统计学方法  组间比较采用χ2检验和确切概率法，相关分析采用Spearman相关分析，检验水准α=0.05。

　　2  结果

　　2.1  Ecadherin表达与肿瘤病理分级及临床表现的关系  60例膀胱移行细胞癌组织标本中，Ecadherin正常表达24例(40%)，异常表达36例(60%)，阳性物质位于细胞膜或细胞质近细胞膜处。正常膀胱黏膜Ecadherin均正常表达，正常前列腺增生患者CA125值均为阴性。Ecadherin异常表达率随肿瘤病理分级增高及临床分期增高而升高。有转移组Ecadherin异常表达率高于无转移组，复发组Ecadherin异常表达率高于无复发组(表1)。

　　表1  Ecadherin表达与肿瘤临床分期、病理分级、有无转移及复发的关系（略）

　　2.2  CA125与肿瘤临床分期、病理分级和有无转移的关系  如表2所示CA125阳性率随肿瘤病理分级增高而增高，但G1与G2之间差异无显著性(χ2=1.71，P>0.05)。CA125的阳性率随肿瘤临床分期增加而增高，有转移组CA125的阳性率高于无转移组。复发的6例患者术前CA125值为21.34±6.38，复发后测定为46.32±4.89，差异有显著性(P<0.05)。

　　2.3  CA125值与Ecadherin异常表达率的关系  Ecadherin异常表达组CA125值(34.67±2.74)显著高于正常表达组(15.38±3.56, r=0.756, P<0.01)，两者呈正相关关系。

　　表2  CA125与肿瘤临床分期、病理分级、有无转移的关系（略）

　　3  讨论

　　Ecadherin是相对分子质量为12000的跨膜糖蛋白。主要存在于上皮细胞，属依赖细胞外钙的经典Cad亚族成员，介导同种亲和性细胞细胞间的粘附，并参与建立和维持细胞间的连接，对维持上皮组织结构的完整性起重要作用\[4\]。最近的研究表明，上皮肿瘤的发生、发展与Ecadherin的表达缺失程度密切相关，Ecadherin被视为肿瘤浸润及转移的抑制因子。郝毅松等\[5\]报告，随着膀胱移行细胞癌细胞分化程度的降低，Ecadherin异常表达率明显升高，浅表膀胱癌和浸润性膀胱癌Ecadherin异常表达率显著不同，即Ecadherin异常表达率越高，肿瘤的分级、分期越高。胡强等\[6\]报道膀胱癌Ecadherin异常表达率G1期为0%-50%，G2、G3期为50%-96%。浅表性癌为20%-67%，浸润性癌为76%-97%，本组结果与其相符。Ecadherin分子本身可诱导细胞分化，因而下调时可导致腺体崩溃，并可诱导肿瘤细胞表型的形成和发展\[7\]。Rehel等\[8\]用共同培养模式研究了Ecadherin对6种不同人膀胱肿瘤细胞株在原代鼠尿系上皮内伸展扩散的作用时发现，当膀胱癌细胞缺乏Ecadherin时，是以单个细胞浸润进入原代鼠尿系上皮内。与此相反，在Ecadherin阳性细胞和原代尿系上皮之间，有明显的界限(原位癌样)，不易转移和复发。进一步研究证实，Ecadherin表达阳性和阴性的两类癌细胞的生物学行为也完全不同，Ecadherin阴性癌细胞，呈单个浮游状，从不贴附于完整的尿系上皮，但具有较强穿透单层尿系上皮的能力，直达固有膜而形成肿瘤。因此，Ecadherin阴性细胞的生物学行为更具有浸润性。Otto等\[9\]证实膀胱癌患者若Ecadherin降低而gp78升高，则为高危患者，临床意义甚至大于病理分级和临床分期。本研究中转移组的Ecadherin异常表达率高于无转移组，复发组的Ecadherin异常表达率高于无复发组，表明Ecadherin的异常表达或功能缺失能降低细胞间的粘连，有利于肿瘤细胞的分离，从而易形成多发灶，并使浅表性膀胱癌易复发和转移，高级别和肌肉浸润性膀胱癌更易丧失其Ecadherin在细胞膜上的表达。因此Ecadherin表达异常是膀胱移行细胞癌进展的晚期表现，癌组织恶性程度越高，Ecadherin表达异常的比率越高。

　　CA125是一类不均一的相对分子质量较高的糖蛋白,对卵巢癌是一种非常有用的瘤标。近来研究其在泌尿系肿瘤中含量明显升高\[10\]。Lzes\[11\]研究晚期尿路上皮肿瘤与CA125的关系时发现68例患者中48例(71%)CA125增高，其血清水平随疾病状态变化有显著的变化，在有转移或残余病变的患者中瘤标阳性者明显增加。本研究有同样的结果。与CA125水平关系密切的因素可能是肿瘤必须有一定的负荷才能产生足够的抗原。本组G1与G2期肿瘤CA125阳性率无显著性差异可能与肿瘤早期不能产生足够的抗原有关。临床分期与肿瘤的浸润、预后有关，分期越高，肿瘤播散范围越大，肿瘤的负荷越大，CA125的阳性率越高，预后越差。本研究中CA125阳性率随肿瘤临床分期升高而升高，就反映了上述情况。本资料中术后复发的6例患者复发后CA125值均明显高于复发前，表明应用测定CA125值可以反映肿瘤的进展和消退，为监测病情变化提供依据。

　　本研究还表明CA125的值与Ecadherin的异常表达率呈正相关，可能是Ecadherin的表达异常使肿瘤细胞间易分离，从而易向周围组织浸润及转移，且术后易复发，从而产生了足够多的CA125。目前大量研究证实Ecadherin可以作为独立的肿瘤预后指标，但临床上检测Ecadherin不方便，因此我们可以通过测定CA125值来帮助判断膀胱移行细胞癌的恶性程度和预后。

　　参考文献：

　　\[1\]JaeBeom K, Shahidul I, Yong JK, et al. Ncadherin extracellular repeat 4 mediates epithelial to mesenchymal transition and increased motility \[J\]. J Cell Biol, 2000,151:11931205.

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　　\[3\]Schipper JH, Frixen UH, Behrens J, et al. Ecadherin expression in squamous cell carcinoma of head and neck: inverse correlation with tumor dedifferentiation and lymph node metastasis \[J\]. Cancer Res,1991,51:6286337.

　　\[4\]刘海涛，周海燕，程继义，等. 膀胱癌组织微血管计数和上皮钙粘附素表达的临床意义 \[J\]. 临床泌尿外科杂志, 2000,15:397399.

　　\[5\]郝毅松，李芳，刘同才，等. ECD在膀胱移行细胞癌中表达的意义 \[J\]. 中华泌尿外科杂志, 1998, 19:401403.

　　\[6\]胡强. 钙粘蛋白E表达在泌尿系肿瘤中的意义 \[J\]. 国外医学泌尿系统分册, 1997,17:265267.

　　\[7\]刘国栋主编. 泌尿外科医师进修必读. 北京：人民军医出版社. 1999, 17:2829.

　　\[8\]Rehel JMJ, Thijissen CD EM, Vermey M, et al. Ecadherin expression determines the mode of replacement of normal urothelium and by human bladder carcinoma cells \[J\]. Cancer Res, 1994;54:5488.

　　\[9\]Otto T, Birchmeter W, Schmidt U, et al. Inverse relation of Ecadherin and autocrine motility fator in patients with bladder carcinoma \[J\]. Cancer Res,1994, 54:3120.

　　\[10\]Grankvisk K, Linngberg B, Rasmuson T. Enaluation of five glycoprotein tumor markers(CEA,CA50,CA199,CA125,CA153) for the prognosis of renal cell carcinoma \[J\]. Int J Cancer,1997,74:233236.

　　\[11\]Lzse JK, Dyer MW, Callum MG, et al. CA125 as a marker of tumor activity in advanced urothelial malignancy \[J\]. J Urol, 2001,165:19081913.

　　(编辑  雷立权)　

　　作者简介：张俭(1972)，男，硕士学位，主治医师.   

　　(邢台市人民医院泌尿外科，河北邢台  054031)