过敏性紫癜病儿血清LXA4 、LTB4 、IL5与CRP变化及意义

【摘要】  目的 测定过敏性紫癜病儿在不同发病阶段的血清脂氧素A4（LXA4）、白三烯B4(LTB4)、白介素5(IL5)以及C反应蛋白(CRP)变化，以探讨LXA4、LTB4、IL5和CRP在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用。方法 采集31例过敏性紫癜病儿急性期和恢复早期血清，以及27例正常儿童（正常组）血清，用酶联免疫吸附试验检测血清中LXA4、LTB4、IL5和CRP含量。结果 过敏性紫癜病儿急性期和恢复早期血清LXA4、LTB4、IL5和CRP水平均显著高于正常组(F=85.15～345.81,q=7.60～36.98,P<0.01)。过敏性紫癜病儿急性期血清LTB4、IL5和CRP水平均显著高于恢复早期（q=10.68～20.82,P<0.01）;而急性期血清LXA4水平显著低于恢复早期（q=14.72,P<0.01）。结论 LTB4和IL5可能参与过敏性紫癜的病变过程，而LXA4具有抗炎作用。

【关键词】  紫癜 过敏性 脂氧素 白三烯B4 白细胞介素5 C反应蛋白质 儿童

    CHANGES IN SERUM LEVELS OF LIPOXIN A4, TB4, IL5 AND CRP IN CHILDREN WITH HENOCHSCHONLEIN PURPURA AND THE CORRESPONDING SIGNIFICANCELIAO PEIYUAN, WU SHENGHUA(Department of Pediatrics, Central Hospital of Tengzhou, Tengzhou 277500, China) ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the serum levels of lipoxin A4 (LXA4), leukotriene B4(LTB4), interleukin5 (IL5) and Creactive protein (CRP) in children with HenochSchonlein purpura (HSP) in different phases and to explore the role of LXA4, LTB4, IL5 and CRP in the pathogenesis of the disease.MethodsThe serum LXA4, LTB4, IL5 and CRP in 27 normal children and 31 HSP in cute phase and early recovery phase were detected by ELISA, respectively.ResultsThe serum LXA4, LTB4, IL5 and CRP in the patients in acute and early recovery phase were significantly higher than that in normal group (F=85.15-345.81,q=7.60-36.98,P<0.01), LTB4, IL5 and CRP in  acute phase were significantly higher than that in early recovery phase (q=10.68-20.82,P<0.01). However, the serum level of LXA4 in the patients in acute phase was significantly lower than that in the early recovery phase (q=14.72,P<0.01).ConclusionLTB4 and IL5 may be involved in the pathological changes of HSP and LXA4 possesses an antiinflammatory action.

    ［KEY WORDS］purpura,HenochSchonlein; lipoxin; leukotriene B4; interleukin5, Creactive protein; children

    脂氧素A4（LXA4）是花生四烯酸的脂氧化酶代谢产物，通过抑制中性粒细胞的趋化、黏附及调节几种炎性细胞因子的作用而起抗炎作用，是重要的炎症“刹车信号”[1]。而在过敏性炎症迟发相阶段，白三烯（LT）作为重要的炎症递质，参与了包括哮喘、变态反应性鼻炎等多种炎症性疾病的病理过程[2]。白三烯B4（LTB4）是重要的嗜中性粒细胞趋化因子，白细胞介素5(IL5)是重要的嗜酸性粒细胞趋化因子，C反应蛋白(CRP)为一种敏感的炎症标记物[3]，以上因子在过敏性紫癜病儿发病中的作用报道较少。2005年3～7月，我们对我院 31例住院过敏性紫癜病儿血清LXA4、LTB4、IL5和CRP的含量进行了检测。现将结果报告如下。

1  对象与方法

1.1  研究对象

    过敏性紫癜病儿组31例，男22例,女9例；年龄3 ～14岁 ，平均（8.0±2.5）岁。均符合1990年美国风湿病协会制定的过敏性紫癜的诊断标准[3]。病儿均为首次发病，入院前未给予任何治疗，不伴有明显感染的症状和体征，尿常规检查正常。正常组（A组）27例，男21例，女6例；年龄4～13岁，平均为（7.7±2.0）岁，均为健康儿童。两组年龄和性别比较差异无显著性（P>0.05）。

    1.2  检测方法

    1.2.1  标本采集  急性期组（B组）：过敏性紫癜病儿在入院后未给予治疗，于次日清晨空腹采集肘静脉血5 mL；恢复早期组（C组）在皮疹、腹痛、关节肿胀疼痛消失后3 d采集恢复早期清晨空腹肘静脉血5 mL。正常组在清晨空腹时采集肘静脉血5 mL。

    1.2.2  标本预处理  将新鲜血标本5 mL缓慢注入非抗凝管内，立即放入 37 ℃水浴箱内助凝后，以1 500 r/min离心10 min后提取血清，放入低温存储管内密封。将血清标本置于-80 ℃低温冰箱内冻藏保存待测。

    1.2.3  血清LXA4的提取  将1 mL的血清样本用 1 mol/L  HCl酸化至pH值3.5，用 2 mL乙醇及2 mL 水预处理C18分离用填充柱，将上述样本加入填充柱，然后分别用1 mL水及1 mL石油醚先后冲洗该填充柱，用2 mL甲酸甲酯洗涤LXA4，用氮气流使甲酸甲酯挥发掉，将残渣溶于1 mL稀释过的提取物缓冲液中，用于LXA4内容物的测定。

    1.2.4  标本检测  仪器为意大利生产的Alisei全自动酶标仪(Alisei  Quality  System)。血清LXA4的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA方法)，试剂盒购于美国Neogen公司。血清LTB4的检测采用ELISA方法，试剂盒购于美国Cayman化学公司。血清IL5的检测采用双抗体酶联免疫吸附试验(ELISA方法)，试剂盒购于深圳晶美生物工程有限公司。血清C反应蛋白(CRP)的检测采用ELISA方法，试剂盒购于北京环亚泰克生物医学技术有限公司。上述实验操作按试剂盒说明进行。

    2  结    果

    2.1  各组血清中LXA4、LTB4、IL5和CRP水平 

    过敏性紫癜病儿急性期和恢复早期的血清LXA4、LTB4、IL5和CRP水平均显著高于正常组(F=85.15～345.81,q=7.60～36.98,P<0.01)。过敏性紫癜病儿急性期血清LTB4、IL5和CRP水平均显著高于恢复早期（q=10.68～20.82,P<0.01）;而急性期血清LXA4水平显著低于恢复早期（q=14.72,P<0.01）。见表1。

    2.2  过敏性紫癜病儿血清LXA4、LTB4、IL5和CRP的相关性

    过敏性紫癜病儿LTB4、IL5和CRP水平呈显著正相关（r=0.848、0.876,P<0.05）；LXA4与IL5水平呈显著的正相关（r=0.382,P<0.05）；而LXA4与LTB4和CRP水平则无显著相关性（r=0.078、0.120,P<0.05）。见表1。表1  各组血清LXA4、LTB4、IL5和CRP水平的检测结果

　　3  讨    论

    花生四烯酸在代谢成LT等促炎递质的同时，也合成与LT相拮抗的抗炎递质LX。LXA4是LX的一种。目前已有大量资料表明，LXA4的抗炎作用与细胞因子网络密切相关，它是一些内源性促炎、促增殖递质的负调控信号，能强有力地抑制体内的炎症反应，抑制中性粒细胞的趋化和黏附, 被称为炎症的“刹车信号”或“终止信号”[1,4～6]。LTB4主要由中性粒细胞产生。在过敏性炎症迟发相阶段，LT大量释放，参与全身过敏反应，影响血管通透性，并参与白细胞的黏附和聚集，使其释放蛋白酶和自由基等，加速花生四烯酸的瀑布反应。LTB4是目前已知最强的细胞趋化剂[7]，吸引中性粒细胞、巨噬细胞、血小板、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞，使其在炎症区域募集和激活。而中性核细胞的募集和激活，可产生更多的LTB4，引起更多的细胞游走，这种递质的自身放大效应会导致多种炎性疾病的病理表现。本研究结果显示，过敏性紫癜病儿急性期和恢复早期血清LXA4和LTB4均显著高于正常组，提示在过敏性紫癜的血管炎症中，白细胞、血管内皮细胞等细胞的花生四烯酸代谢亢进，合成LX和LT，从而使血清LXA4和LTB4显著升高。

    在免疫炎性反应中，嗜酸性粒细胞在炎症部位募集和激活，产生大量的IL5，IL5能促进血管内皮细胞黏附分子的表达,从而增强嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和内皮细胞结合[8];引起更多的嗜酸性粒细胞渗出、浸润并合成LT，引起自身放大效应。一方面，LTB4可促进单核细胞和T淋巴细胞合成IL1、IL5、IL6和IL8等多种IL；另一方面，IL又可促进白细胞合成LT，二者互为因果，使炎性反应放大。而LX作为一类独特的抗炎递质，能减少IL13、IL5和半胱氨酰白三烯、IgE的形成[9]，能降低多形核白细胞合成和释放LTB4及人单核细胞合成和释放IL8[10], 亦通过抑制IL1、TNFα的作用而减少IL6、IL8的产生[5,11]； 同时抑制嗜酸性粒细胞的游走[9]。通过激活吞噬细胞介导的对凋亡白细胞吞噬作用来促进炎症消退[9,10]。这些结果说明了LXA4、LTB4与IL之间有复杂的作用关系。

    本研究显示，过敏性紫癜病儿急性期和恢复早期血清LXA4、LTB4和 IL5均显著高于正常组。病儿在恢复早期时血清IL5和LTB4均显著下降；但恢复早期血清LXA4不仅不降，反而进一步升高。可以推测，在过敏性紫癜的急性期，LTB4、IL5二者互为因果，直接引起多种炎性细胞浸润，刺激多种致炎因子的产生。同时，由于LXA4合成相对较少，使LTB4 和LXA4的失衡加剧，凸显IL5和LTB4的致炎作用，导致并加剧微血管的坏死性炎症，引起临床症状。恢复早期免疫功能的改善，多种抗炎因子的合成与释放增加，如LXA4和LT受体拮抗剂前列腺素合成增加，可以抑制致炎因子IL5、IL6、IL8、TNFα和LTB4的致炎作用，可通过下调p选择素的表达抑制PMN对微血管的黏附作用[12]，使炎性细胞浸润减少，同时激活吞噬细胞介导的对凋亡白细胞的吞噬作用，促进炎症消退。在过敏性紫癜的恢复早期LTB4和IL5显著下降，LXA4显著升高；同时，恢复早期血清LTB4、IL5和LXA4仍高于正常对照组，说明过敏性紫癜的病理生理恢复迟于临床恢复，恢复早期血管炎症尚未完全恢复正常。

    CRP是一种敏感的炎症标记物。在过敏性紫癜病儿急性期，CRP等反应炎症的指标可升高[3]。本研究显示，过敏性紫癜病儿急性期血清CRP显著高于恢复早期和正常组。同时，病儿恢复早期血清CRP显著高于正常组，提示CRP参与了血管炎症反应。本文研究结果亦显示，急性期所测定的病儿血清LTB4、IL5与CRP水平呈显著正相关，这说明LTB4、IL5也反应了炎症的变化，可作为敏感的炎症指标；而在急性期抗炎因子LXA4合成相对不足，不能有效抑制IL5和LTB4 等致炎因子的合成及其致炎作用。

【参考文献】
  [1]吴升华,何祚光. 脂氧素研究进展[J]. 国外医学:临床生物化学与检验学分册, 2003,24(5):255257.

[2]YAN C, LIAO K. The role of leukotrienes in the pathogenesis of atopic dermatitis and chronic urticaria[J]. J Clin Dermatol, 2003,32(10):623626.

[3]胡亚美,江载芳. 诸福棠实用儿科学[M]. 第7版.北京:人民卫生出版社, 2002：688697.

[4]WU S H, WU X H, LU C, et al. Lipoxin A4 inhibits connective tissue growth factorinduced production of chemokines in rat mesangial cells[J]. Kidney Int, 2006,69(2):248256.

[5]WU S H, LU C, DONG L, et al. Lipoxin A4 inhibits TNFαinduced production of interleukins and proliferation of rat messangial cells[J]. Kidney Int, 2005(68):3546.

[6]陆超, 陈吉庆,吴升华,等. Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖[J]. 中华儿科杂志, 2005,43(4):288292.

[7]陈小菊. 白三烯与慢性阻塞性肺疾病的研究新进展[J]. 国外医学:呼吸系统分册, 2003,23(1):207208.

[8]时衍同,费立升,刘伟,等. 茶碱对哮喘病人外周血IL4、IL5及ＩｇＥ合成的抑制作用[J]. 齐鲁医学杂志, 2005,20(3): 251252.

[9]LEVY B D, BONNANS C, SILVERMAN E S, et al. Diminished lipoxin biosynthesis in severe asthma[J]. Am J Respir Crit Care Med, 2005,172(7):824830.

[10]VACHIER I, BONNANS C, CHAVIS C, et al. Severe asthma is associated with a loss of LXA4, an endogenous antiinflammatory compound[J]. J Allergy Clin Immunol, 2005,115(1):5560.

[11]吴升华,陆超, 董玲,等. 蛋白酪氨酸磷酸酶2/核因子kB途径介导脂氧素A4拮抗系膜细胞白介素6的合成[J]. 中华肾脏病杂志, 2005,21(7):413416.

[12]GANGEMI S, LUCIOTTI G, URBANO E D, et al. Physical exercise increases urinary excretion of lipoxin A4 and related compounds [J]. J Appl Physiol, 2003,94(6):22372240.

作者单位：滕州市中心人民医院儿科,山东 滕州 277500