Ets1和VEGF在前列腺癌组织的表达及意义

【摘要】  目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF) 和E26 转录因子( Ets1) 的表达与前列腺癌生物学行为的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测44例前列腺增生组织、42例前列腺癌组织及其癌旁正常组织中VEGF和Ets1的表达，分析其与肿瘤之间的关系。结果 VEGF与Ets1在前列腺癌组织中的阳性表达率分别为71.4%和76.2%，在前列腺癌旁组织中的阳性表达率分别为11.9%和19.0%，在前列腺增生组织中的阳性表达率分别为13.6%和20.5%。前列腺癌组织中Ets1 和VEGF阳性表达率均高于癌旁组织和前列腺增生组织（χ2=38.041～44.596，P<0.01)，Ets1 和VEGF的表达在不同病理分级与临床分期间有显著性差异（χ2=3.910～11.357，P<0.05)，VEGF与Ets1的表达呈正相关 (r=0.64，P<0.01)。结论 前列腺癌组织中VEGF与Ets1表达明显相关，可以利用VEGF和Ets1来判定前列腺癌的生物学行为。

【关键词】  前列腺肿瘤 血管内皮生长因子类 转录因子 E26 免疫组织化学

    EXPRESSION AND SIGNIFICANCE Of Ets1 AND VEGF IN PROSTATIC CARCINOMAL SHUJIAN, LIU YONG(Department of Urology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China) ［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the expression and the relationship of Ets1 and VEGF in prostatic carcinoma.MethodsImmunohistochemical method was used to examine the expression of Ets1 and VEGF in 44 cases of BPH, 42 cases of prostatic carcinoma and the normal tissues sidecarcinoma. ResultsThe positive rates of VEGF and Ets1 in prostatic carcinoma were 71.4% and 76.2%； Sidecarcinoma tissue were 11.9% and 19.0%, BPH were 13.6% and 20.5%. The positive cases of VEGF and Ets1 in prostatic carcinoma were more than sidecarcinoma tissue and BPH (χ2=38.041-44.596，P<0.01）. The expression of VEGF and Ets1 in prostatic carcinomas were differed significantly with tumor differentiation and the clinical stages （χ2=3.910-11.357，P<0.05)；The expression of VEGF in prostatic carcinoma was highly correlated with Ets1 (r=0.64,P<0.01). ConclusionThe expression of VEGF and Ets1 in prostatic carcinoma are highly correlated,and may be one of parameters for understanding the biological behavior of prostatic carcinoma.

    ［KEY WORDS］prostatic neoplasms; vascular endothelial growth factors; transcription factor, E26; immunohistochemistry

    E26 转录因子 (Ets1)在恶性肿瘤的演进及肿瘤间质血管新生中的重要作用, 使其有望成为肿瘤治疗的新靶点及预测肿瘤病人预后的新指标。现有研究表明，Ets1与消化系统肿瘤发生和发展有密切关系，其与泌尿系统肿瘤之间的关系研究较少。因前列腺肿瘤特殊的生物学行为，尤其是对内分泌治疗耐受现象的存在，成为临床治疗的难题。本研究利用免疫组化方法检测前列腺癌组织中Ets1 和VEGF的表达,以探讨它们与前列腺癌生物学行为的关系,为前列腺癌的诊断和治疗探索新思路。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料

    收集青岛大学医学院附属医院2000～2004年泌尿外科手术切除的前列腺癌组织42例（高分化腺癌13例,中分化腺癌13例, 低分化癌16例），前列腺增生组织44例。前列腺癌旁正常组织42例，取自前列腺癌旁距肿瘤2 cm处。所有病例均有完整的临床资料。TNM分期: T1期8例, T2期14例, T3期11例,T4期9例。

    1.2  实验方法与试剂

    标本均经40 g/L的多聚甲醛固定，石蜡包埋,连续切取4 μm 厚切片3 张。2 张分别做Ets1 和VEGF 免疫组化染色,另一张做苏木精伊红染色以核实诊断。采用SP 法进行免疫组织化学染色，SP免疫组织化学试剂盒和VEGF多克隆抗体均购于Booster公司。Ets1多克隆抗体试剂盒购于SantaCruz公司。石蜡切片常规脱蜡,热修复,降至室温, 滴加山羊血清封闭液,室温20 min，封闭非特异性抗原。分别滴加一抗兔抗人Ets1多克隆抗体、兔抗人VEGF多克隆抗体 (VEGF为1∶200， Ets1为1∶500)，室温过夜，滴加二抗生物素化羊抗兔IgG，37 ℃ 90 min, 加辣根酶标记的链酶卵白素，37 ℃ 30 min, DAB孵育15 min。 各步骤结束后均以PBS 冲洗，免疫反应显影，逐层脱水,透明封片。显微镜下观察，细胞浆或细胞核内出现棕黄色或棕褐色为染色阳性细胞。在400倍光镜下随机计数10个不同视野的阳性肿瘤细胞数,以阳性肿瘤细胞数<10%为阴性表达，阳性肿瘤细胞数≥10%为阳性表达。

    2  结    果

    2.1  Ets1和VEGF在前列腺癌及良性前列腺病变组织中的表达

    前列腺各组织中均有Ets1 和VEGF的阳性表达，在癌组织中的表达率分别为76.2％、71.4％，较癌旁组织及前列腺增生组织明显增高，差异有显著意义（χ2=38.041～44.596，P<0.01)。Ets1 和VEGF在癌旁组织及前列腺增生组织中的表达差异无显著性。见表1。

    2.2  前列腺癌组织中Ets1和VEGF表达与肿瘤生物学行为的关系

    随临床分期的增加及分化程度的降低，Ets1和VEGF在前列腺癌组织阳性表达率升高。T2～T4期前列腺癌与T1期前列腺癌相比，VEGF阳性表达率增高，差异具有显著意义(χ2=4.426～10.432，P<0.05);T3、T4期前列腺癌与T1期前列腺癌相比， Ets1阳性表达率增高,差异有显著意义(χ2=3.910～7.967，P<0.05);Ets1和VEGF在低分化前列腺癌组织中均呈阳性表达，其阳性表达率明显高于高、中分化组织,差异有显著意义(χ2=5.711～11.357，P<0.05)。见表2。

    2.3  Ets1 和VEGF 在前列腺癌组织中表达的相互关系

    Ets1 和VEGF 在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.64,P<0.01)。见表3。

    3  讨    论

    Ets家族是细胞内最大的信号依赖转录调控因子家族之一，依据Ets结构域的同源性，可将Ets基因家族分为几个亚族。在细胞、组织和器官水平，Ets家族作为转录因子参与多种哺乳动物的生长发育过程，包括细胞增殖、分化、迁移、凋亡和细胞间相互作用，与肿瘤的发生密切相关。Ets1是Ets 转录因子家族的一员,它是Ets癌基因家族中的起源基因,主要通过转录调节来发挥作用。Ets1蛋白参与了细胞外基质(ECM) 的重建,在防止肿瘤向外周侵袭和转移中发挥重要作用;Ets1 蛋白在肿瘤的浸表1  癌组织和良性前列腺组织中VEGF和Ets1 的阳性表达表2  Ets1和VEGF阳性表达与前列腺癌分级、分期的关系表3  VEGF和Ets1 在前列腺癌中表达的相关性（例）VEGFEts1+-+284-28

    润过程中主要参与了ECM降解酶的转录活性调节,如丝氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶(MMP),此类酶能破坏肿瘤周围结缔组织导致肿瘤的浸润[1]。ALIPOV等[2]采用免疫组化方法对95例前列腺标本进行了检测，结果表明，Ets1在恶性组织中的阳性表达率为77%，与良性前列腺组织相比存在显著性差异。本研究中Ets1在前列腺癌组织中的表达明显高于前列腺增生和癌旁组织，且与前列腺癌的病理分级及临床分期相关，提示Ets1与前列腺癌的发生和发展有密切关系。

    VEGF是至今发现的最重要的促血管生成因子，在内皮细胞分裂和迁移方面发挥重要作用。有研究结果表明,阻断Ets1的合成则可抑制表皮生长因子及FGF诱导的细胞迁移，从而抑制体外血管生成[3]；另一方面，Ets1 可由血管内皮细胞中的血管内皮刺激因子诱导生成,如VEGF、bFGF、低氧等[4]。许风莲等[5]认为，VEGF、KDR、MMP1以及Ets1四者间存在相辅相成的关系，VEGF 血管新生的信号主要通过KDR来传导，KDR和MMP1的产生又受Ets1的转录调节，而Ets1的产生又受VEGF的调控，表明Ets1及VEGF与肿瘤血管生成关系密切。本研究显示,它们在前列腺癌的表达均明显高于良性前列腺组织，且两者之间表达呈正相关, 与有关文献报道相一致。我们认为Ets1 和VEGF 的表达与前列腺癌的临床分期和病理分级关系密切，检测VEGF 和Ets1 的表达可以作为了解前列腺癌生物学行为的参考指标。

【参考文献】
  [1]于涌. Ets家族转录因子及其肿瘤浸润转移的关系[J]. 国外医学：肿瘤学分册, 2003,30:177179.

[2]ALIPOV G, NAKAYAMA T, ITO M, et al. Overexpression of Ets1 protooncogene in latent and clinical prostatic carcinomas[J]. Histopathology, 2005,46:202208.[3]POURTIER A, VERCAMER C, VAN BELLE E, et al. Expression of an Ets1 dominantnegative mutant perturbs normal and tumor angiogenesis in a mouse ear mode[J]. Oncogene, 2003,22(12):17951806.

[4]曾亮,曹亚. 癌基因Ets在肿瘤转移中的转录调控研究进展[J]. 肿瘤杂志, 2002,22(1):8082.

[5]许风莲,范俊,孟岚,等. VEGF,KDR,MMP1及转录调节因子Ets1在卵巢癌组织中表达[J]. 肿瘤学杂志, 2005，11（4）：249251.

作者单位：青岛大学医学院附属医院泌尿外科，山东 青岛 266003