胃腺癌组织Survivin和Ki67表达及其意义

【摘要】  目的 探讨Survivin与Ki67在胃腺癌组织表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测20例正常胃黏膜组织和50例胃腺癌组织Survivin和Ki67表达情况。结果 胃腺癌组织组织Survivin与Ki67阳性表达率均明显高于正常胃黏膜组织（Uc=3.693、5.640,P＜0.001）；Survivin阳性表达与病人性别、年龄、组织分化程度、TNM分期及浸润深度均无关（Uc=1.299、0.679，Hc=0.488、0.369、0.756，P＞0.05），而与淋巴结转移有关（Uc=2.138，P＜0.05）；Ki67阳性表达与TNM分期及淋巴结转移有关（Hc=6.539，Uc=2.987，P＜0.05、0.01），而与病人性别、年龄、组织分化程度和浸润深度均无关（Uc=0.645、0.976，Hc=4.070、3.243，P＞0.05）。胃腺癌组织Survivin的表达与Ki67呈正相关（rs=0.321，P＜0.05）。结论 Survivin蛋白可能具有促进肿瘤细胞增殖活性的作用，联合检测Survivin和Ki67对判断淋巴结转移的危险性具有较高的价值。

【关键词】  胃肿瘤；Survivin蛋白；Ki67蛋白；免疫组织化学

EXPRESSIONS OF Survivin AND Ki67 IN GASTRIC ADENOCARCINOMA AND THEIR  CLINICAL SIGNIFICANCE WANG JUN, NIU ZHAOSHAN  (Editorial Office of Journal of Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China); ［ABSTRACT］ Objective To investigate the expressions of Survivin and Ki67 in gastric adenocarcinoma and their clinical significance.  Methods Expressions of Survivin and Ki67 in 20 cases of normal gastric mucosa and 50 cancer patients were checked by immunohistochemical method.  Results Expressions of Survivin and Ki67 in cancer tissue were significantly higher than that in normal gastric mucosa (Uc=3.693,5.640;P<0.001). The expression was not associated with the patients’ gender, age, histological differentiation,TNM stage and depth of invasion (Uc=1.299，0.679；Hc=0.369-0.756；P>0.05), but  related to the lymphnode metastasis (Uc=2.138,P<0.05). The Ki67 was significantly related to TNM stage and lymphnode metastasis (Hc=6.539;Uc=2.987;P<0.05,0.01), but not related to gender, age, histological differentiation and depth of invasion (Uc=0.645,0.976;Hc=4.070,3.243;P>0.05). The expression of Survivin was positively correlated with  Ki67 (rs=0.321,P<0.05).  Conclusion Survivin plays a role in promoting tumor cell proliferation. Combined detection of the above two expressions may have a higher value in judgement of lymphnode metastasis of gastric adenocarcinoma.

    ［KEY WORDS］ Gastric neoplasms; Survivin protein; Ki67 protein; Immunohistochemistry

    胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤, 占恶性肿瘤死亡的第一位，且发病率和死亡率呈逐年上升趋势。目前胃癌的发病机制尚不清楚，但越来越多的研究表明，肿瘤的发生机制不仅涉及到肿瘤细胞的失控性增殖，而且与细胞凋亡的调节平衡有关。Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP) 家族中的一个重要成员,在正常组织中不表达，而在多种恶性肿瘤中呈阳性表达[1]。Ki67蛋白作为一种增殖细胞核抗原，可准确反映细胞增殖的情况。本研究旨在通过免疫组化方法检测Survivin及Ki67蛋白在胃腺癌组织中的表达情况，探讨二者在胃腺癌发生、转移和浸润中的作用及相互关系。现将结果报告如下。

    1  材料和方法

    1.1  材料

    收集青岛大学医学院附属医院病理科2001年5月～2006年3月胃腺癌手术切除标本50例，术前均未行化放疗。其中男37例，女13例；年龄28～72岁，平均54.6岁。高分化癌7例，中分化癌24例，低分化癌19例。按国际抗癌联盟（UICC）关于胃癌TNM分期分为：Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期22例。按浸润深度分为：黏膜及黏膜下层者12例，肌层者17例，浆膜层者21例；无淋巴结转移者16例，有淋巴结转移者34例。另选择正常胃黏膜组织20例作为对照。所有标本均用40 g/L甲醛固定，石蜡包埋。

    1.2  Survivin及Ki67蛋白表达检测方法

    采用PV9000二步免疫组化方法,按试剂盒说明操作。 Survivin兔抗人多克隆抗体、Ki67鼠抗人单克隆抗体及PV9000免疫组化试剂盒均购自北京中山生物试剂有限公司。用已知阳性片作为阳性对照；阴性对照省略Ⅰ抗，以PBS代替。

    1.3  结果判断

    Survivin蛋白阳性染色呈淡黄至黄棕色，主要定位于细胞质，也可见于细胞核。参照文献[1]将Survivin蛋白阳性细胞按数量及显色强度分为3级：弱阳性(+)，即阳性细胞数<10%，显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;中度阳性()，即阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间；强阳性()，即阳性细胞数>60%，多数细胞呈黄至棕黄色染色。

    参照文献[2,3]，细胞核染棕黄色为Ki67蛋白表达阳性。光镜下(400倍)分4区各计数200个细胞，观察2个视野，Ki67蛋白染色阳性细胞＜10%为低表达(+)，10%～30%为中度表达()，＞30%为高表达()，未见着色为阴性(-)。

    1.4  统计学处理

    采用SPSS统计软件包进行统计学分析，等级资料比较采用秩和检验，相关性检验采用Spearman等级相关分析。

    2  结    果

    2.1  Survivin蛋白和Ki67蛋白在正常胃黏膜及胃腺癌组织中的表达比较

    胃腺癌组织中Survivin蛋白及Ki67蛋白的阳性表达率分别为48%和82%，均明显高于正常胃黏膜组织(Uc=3.693、5.640，P＜0.001)。见表1。表1  Survivin蛋白及Ki67蛋白在胃腺癌和正常胃黏膜组织中的表达比较

    2.2  Survivin蛋白和Ki67蛋白表达与胃腺癌临床病理特征的关系

    Survivin蛋白表达与病人性别、年龄、组织分化程度、TNM分期及浸润深度均无关（Uc=1.229、0.679，Hc=0.369～0.756，P>0.05），而与淋巴结转移有关（Uc=2.138，P<0.05）。Ki67蛋白表达与病人性别、年龄、组织分化程度及浸润深度均无关（Uc=0.645、0.976，Hc=4.070、3.243，P>0.05），而与TNM分期及淋巴结转移有关（Hc=6.539，P＜0.05；Uc=2.987，P<0.01）。见表2。

    2.3  胃腺癌中Survivin蛋白与Ki67蛋白的关系

    相关分析表明，Survivin蛋白的表达与Ki67蛋白呈正相关（rs=0.321，P<0.05）。见表3。

    3  讨    论

　   表2  Survivin蛋白及Ki67蛋白表达与胃腺癌临床病理特征的关系表3  胃腺癌组织Survivin蛋白与Ki67蛋白表达关系

    Survivin蛋白是迄今发现的最强的细胞凋亡抑制因子, 可抑制多种凋亡刺激因子(如Caspase)引起的细胞凋亡。Survivin蛋白在肿瘤中以细胞周期依赖的形式在G2/M期高表达, 能对抗异常因素诱导的细胞凋亡；在G1期其mRNA和蛋白水平迅速下降。有研究表明，Survivin蛋白的组织分布特征有明显的细胞选择性, 在癌旁正常组织和成人分化组织不表达，而在大多数肿瘤组织中表达，并与肿瘤的发生和发展、组织分化程度密切相关, 是许多肿瘤的预后影响因子之一[4]。郭燕等[5]研究结果表明，Survivin蛋白在胃癌组织中高表达，在相应癌旁组织中无表达。本文研究结果显示, Survivin蛋白在胃腺癌中有阳性表达, 阳性表达率为48 %, 而在正常胃黏膜组织中无表达, 与Survivin蛋白在其他恶性肿瘤中的表达情况一致。Survivin蛋白选择性高表达于胃腺癌组织，这为胃腺癌细胞顺利地完成有丝分裂而出现异常增生创造了先决条件。提示在正常胃黏膜向胃腺癌的转化过程中Survivin蛋白表达水平的改变可能发挥重要作用。朱红霞等[6]研究表明，当组织发生恶变后，会再次出现Survivin蛋白的高表达，提示Survivin蛋白与各种组织的正常分化和自身稳定以及肿瘤的发生发展密切相关。

    本文研究结果显示，胃腺癌组织中Survivin蛋白阳性染色主要定位于细胞质，其中有部分病例同时伴有细胞核着色，但无单独胞核着色者。多数报道Survivin蛋白阳性定位于肿瘤细胞胞质，少数报道位于细胞核[7]。Survivin蛋白的这种定位情况可能与其表达具有严格的细胞周期性有关。文献报道，Survivin蛋白是一个在细胞核和细胞质之间穿梭的蛋白，从而进行细胞周期调节[8]。提示在肿瘤的发生发展中，Survivin蛋白的不同亚细胞定位可能发挥着不同的调控作用。

    Survivin蛋白表达与胃癌的组织学类型、分化程度、TNM分期及淋巴结转移的关系各家报道不一。LEE等[9]的研究显示，Survivin蛋白的表达与胃腺癌的肿瘤大小、浸润程度、肿瘤分期和淋巴结转移密切相关。任海军等[10]则认为，Survivin蛋白表达与胃癌组织学类型、浸润深度无关，与淋巴结转移有关。而张建娜等[11]认为，Survivin蛋白过表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关,而与胃癌组织分化程度无关。本文研究结果显示，Survivin蛋白表达与胃腺癌组织分化程度、TNM分期、浸润深度均无关，与淋巴结转移有关。提示Survivin蛋白表达可能在肿瘤转移过程中起作用。许多研究结果表明，肿瘤细胞的转移能力与瘤细胞的抗凋亡能力及肿瘤新生血管生成能力密切相关[12]。Survivin是目前发现的唯一既有抗凋亡作用又有促血管生成作用的细胞因子，因此其高表达的瘤细胞转移能力比较强。提示Survivin蛋白的过度表达可能是胃腺癌发生中较早出现的异常分子事件，可作为判断胃腺癌病人淋巴结转移危险性的有用指标。目前，对于Survivin蛋白与胃腺癌临床病理因素关系方面研究结果不一致的原因还不清楚，可能是由于技术上的差异引起的，如所选择的抗体不同、检测方法不同或对染色的解释不同；也可能是由于所研究人群的种族或地域上的差异引起的。本文在后续研究中将增加病例数，以探讨造成结果不一致的可能原因。

    Ki67蛋白为一种增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期密切相关。它在细胞周期的G1后期开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，而有丝分裂后迅速降解消失，其半衰期仅为1 h或更短，且不表达于DNA修复状态的细胞，因此能较全面准确地反映细胞的增殖活性。许多研究表明，Ki67蛋白的表达与恶性肿瘤的组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、术后复发率和病死率等呈显著正相关[13]。本研究中，胃腺癌组织中Ki67蛋白的阳性表达显著高于正常胃黏膜组织，提示细胞在受到各种致癌因素作用后，DNA合成增加，细胞增殖活性增加，最终导致癌变。Ki67蛋白可作为区分正常胃黏膜组织和恶性肿瘤组织的有效指标。许多研究认为，肿瘤细胞增殖产生的生长在肿瘤的转移中发挥重要作用。肿瘤细胞增殖能力越强，其转移的可能性越大。本研究结果显示，随着TNM分期和淋巴结转移的增加，Ki67蛋白阳性表达率呈上升趋势，其差异有显著性，提示Ki67蛋白可通过促进肿瘤细胞的增殖而促进肿瘤的进展和转移。GABBERT等[14]认为细胞增殖与浸润转移可能的原因是：①增殖将使有浸润潜能的肿瘤细胞数量增加；②肿瘤边缘细胞的分裂提供了肿瘤细胞解离的机会；③浸润的细胞仍能增殖形成扩张的瘤细胞巢，从而能完善浸润转移过程。

    本研究结果还显示，Survivin蛋白表达与Ki67蛋白表达呈正相关。Survivin蛋白具有一定的细胞周期性，主要表达于细胞的G2/M期，与Ki67蛋白在表达时相上相一致。说明Survivin蛋白可能具有促进肿瘤细胞增殖的活性，参与了胃腺癌细胞增殖，并与Ki67蛋白相互协同促进胃腺癌的发生和发展。

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作者单位：青岛大学医学院，山东 青岛 266021 1 学报编辑部； 2 人体显微结构学实验室