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【摘要】 目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、uPA受体(uPAR)及其抑制剂(PAI1)在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学PV9000法检测60例上皮性卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及30例正常卵巢组织中uPA、uPAR及PAI1蛋白表达，并结合临床病理因素进行分析。结果 uPA、uPAR、PAI1在上皮性卵巢癌中的表达率（75.0%、65.0%、66.7%）明显高于良性肿瘤（40.0%、33.3%、30.0%）及正常组织（30.0%、26.7%、33.3%），差异均有显著性（χ2=11.779～19.510，P<0.05)，而良性肿瘤与正常组织比较无明显差异。uPA、uPAR、PAI1在上皮性卵巢癌组织表达与手术病理分期、组织分级和有无淋巴结转移有关(χ2=8.242～36.906，P<0.05)。结论 uPA、uPAR、PAI1在上皮性卵巢癌组织高表达，可能与卵巢癌发生、发展及浸润有关。
【关键词】 卵巢肿瘤；尿纤溶酶原激活物；纤溶酶原激活物抑制物1；免疫组织化学
EXPRESSIONS OF uPA, uPAR AND PAI1 IN EPITHELIAL OVARIAN CANCER AND THEIR SIGNIFICANCE
HUANG CUIPING, ZHAO JIE, LI XIA, et al
(Department of Obstetrics and Gynecology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China);
［ABSTRACT］ Objective To investigate the expressions of urokinasetype plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) and plasimnogen activator inhibitors (PAI1) in epithelial ovarian cancer (EOC) and their significance. Methods Immunohistochemistry was applied to examine the protein expressions of uPA, uPAR and PAI1 in 60 specimens of EOC and 30 specimens of benign ovarian tumor (BOT) and 30 specimens of normal ovary. The results were analyzed in combined with clinicopathology. Results The positive rates of uPA, uPAR and PAI1 were significantly higher in EOC (75.0%,65.0% and 66.7%, respectively,) than that in BOT (40.0%,33.3% and 30.0%) and normal ovarian tissue (30.0%,26.7% and 33.3%) (χ2=11.779-19.510,P<0.05), and no significant difference was noted between BOT and normal tissue expressions in terms of theabove three expressions. These three expressions, uPA,uPAR and PAI1, in malignant tumors were associated with pathologic staging, histologic grading and lymph node metastasis (χ2=8.242-36.906,P<0.05). Conclusion The high expressions of uPA, uPAR and PAI1 in EOC are possibly related to the occurrence, development and metastasis of this malignancy.
［KEY WORDS］ ovarian neoplasms; urine plasminogen activator; plasminogen activator inhibitor 1; immunohistochemistry
上皮性卵巢癌是女性生殖道最常见三大恶性肿瘤之一，极易发生浸润和远处转移，恶性程度高，预后差，病死率高。浸润和转移是造成上皮性卵巢癌治疗困难和预后不良的一个重要原因。肿瘤侵袭与血管生成是形成肿瘤转移的关键性因素，目前已经明确细胞外基质(ECM)及基膜成分的降解是肿瘤浸润和转移的重要步骤。近年发现，尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、uPA受体（uPAR）及其抑制剂(PAI1)能激活多种蛋白溶解酶，降解ECM、基膜，促进肿瘤浸润、转移[13]。本研究采用免疫组化法对上皮性卵巢癌组织中uPA、uPAR及PAI1的表达进行检测，探讨三者在上皮性卵巢癌发展过程中的意义。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本
2004年1月—2008年6月，选择在青岛大学医学院附属医院病理科存档的手术切除的上皮性卵巢癌组织蜡块60例（浆液性囊腺癌32例, 黏液性囊腺癌28例），良性卵巢肿瘤30例，正常卵巢组织30例。上皮性卵巢癌病人年龄24～76 岁，其中位年龄为50 岁。根据2000年国际妇产科联盟(FIGO)手术病理分期标准：Ⅰ～Ⅱ期20例， Ⅲ～Ⅳ期40例。高中分化癌(G1+G2)30例，低分化癌(G3)30例。所有病例均行肿瘤细胞减灭术，术前未进行放化疗。所有标本均经40 g/L甲醛固定,石蜡包埋，切片厚度3 μm。
1.2.1 试剂
兔抗人uPA单克隆抗体(一抗)购自北京博奥森公司，兔抗人uPAR、PAI1单克隆抗体(一抗)购自武汉博士德公司，PV9000二抗及DAB显色剂(棕色)均购自北京中杉金桥公司。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化染色方法
采用PV9000三步法，染色步骤按试剂盒说明书进行。阳性对照用已知阳性片；阴性对照省略一抗,以PBS 代替。
1.2.2 结果判断
采用双盲阅片法，镜下细胞质和（或）细胞膜内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。uPA、UPAR和PAI1 的判断标准相同。随机在显微镜下选择10个视野,每个视野观察100个细胞, 取10个视野中阳性细胞平均百分数作为每张切片的观察结果。阴性(-):阳性细胞数<10%;阳性(+):阳性细胞数≥10%。
1.2.3 统计学方法
采用SPSS 13. 0 统计软件包对数据进行χ2检验。
2 结果
2.1 uPA、uPAR、PAI1在不同卵巢组织中的表达及分布
uPA、uPAR及PAI1在上皮性卵巢癌组织中的表达均显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织(χ2=11.779～19.510，P<0.05)；而卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织三者的表达均无统计学差异(P>0.05)。见表1。表1 uPA、uPAR、PAI1在不同卵巢组织中的阳性表达（略）
2.2 上皮性卵巢癌组织中uPA、uPAR、PAI1蛋白表达与临床病理特征的关系
uPA、PAI1、uPAR表达与肿瘤手术病理分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关（χ2=8.242～36.906，P<0.05），但与病理类型无关（P>0.05）。见表2。表2 uPA、uPAR、PAI1与上皮性卵巢癌临床病理特征间的关系临床病理特征nuPA阳性（略）
3 讨论
上皮性卵巢癌主要的生物学特性是浸润和转移，这一特性是导致病人治疗失败的主要原因。近年来的研究结果表明，上皮性卵巢癌在浸润、转移过程中存在着ECM及基膜成分被相关蛋白降解的活动，uPA、uPAR、PAI1介导的纤维蛋白溶解系统与此密切相关[13]。
3.1 uPA、uPAR、PAI1系统介导的恶性肿瘤浸润转移机制
uPA是一种丝氨酸蛋白酶,由肿瘤细胞或其他细胞分泌,分泌时为无活性的单链酶原结构,它与肿瘤细胞膜上的uPAR 结合并激活成双链活性uPA,uPA酶原和 uPA都以很高的亲和力结合在uPAR上，活性uPA能将纤溶酶原激活成纤溶酶,后者有广泛的底物特异性,能够降解ECM和基膜成分,这种蛋白降解作用最终将导致肿瘤细胞发生侵袭和转移[4]。同时，uPAR与uPA结合后,将uPA蛋白溶解活性集中在细胞附着部位,并通过促进小凹蛋白β1 整合素复合物引起酪氨酸(Src)家族激酶释放和(或)活化以及信号的传递,以利于细胞进行游走。uPAR 还可通过与整合素结合而改变整合素的功能,进而抑制细胞与纤维连接蛋白和纤维蛋白原的黏附,促进细胞在纤维连接蛋白上的迁移[5]。另外, uPA与uPAR还具有趋化作用,诱导细胞的化学趋化及形状的改变。这些功能使得uPAR在细胞生长、组织重建及肿瘤浸润和转移等的生理病理过程中发挥着重要作用。PAI1是主要的uPA抑制剂，在这个过程中起着调节作用，PAI1和uPA 结合成复合物抑制uPA的活性[6]；PAI1与uPAR 都能与基质亲玻结合蛋白(VN)结合参与细胞侵袭。因此，PAI1与uPAR 竞争性与VN 结合，从而阻碍了VN与细胞膜上整和素受体及uPAR 结合，抑制了细胞的迁徙。PAI1可防止血管生成过程中的结缔组织过分降解，参与血管生成的调节；可以防止瘤组织自身的降解；并促使转移瘤细胞的定位[7]。PAI、uPA、uPAR三者复合体被细胞内摄, uPA在细胞内被降解,而 uPAR则又回到细胞表面。
3.2 uPA、uPAR、PAI1系统在上皮性卵巢癌组织的表达及意义
本文运用免疫组化的方法对上皮性卵巢肿瘤组织中uPA、PAI1的表达、定位及其与肿瘤良恶性和转移的关系进行了研究。结果显示，uPA主要定位于肿瘤细胞的胞浆，分布不均。上皮与基质交界处、肿瘤侵袭前沿及癌巢的周边组织常伴有uPA的高表达，这一现象也符合在肿瘤前沿肿瘤侵袭活跃性最高的学说。uPAR主要分布在癌细胞的膜表面及胞质中,间质中的成纤维细胞亦有阳性染色，uPAR的高表达对于恶性肿瘤细胞可能是相对特异的,因为uPAR为肿瘤细胞浸润转移过程中的蛋白溶解提供了特定的部位(细胞表面或细胞浸润前沿) 和特定的环境(酶激活区和蛋白溶解区)。PAI1与uPA/uPAR 特异结合后形成复合物,这种结合使肿瘤细胞对复合物产生内吞效应,结果uPA在溶酶体内降解,而uPAR再循环至细胞表面,这种结合过程可调节uPA 的活性,调节uPAR在细胞表面位置的变化。uPA、uPAR与PAI1在上皮性卵巢癌组织阳性表达率显著高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织，说明三者过度表达在卵巢癌发生发展过程中有重要作用。在手术病理分期晚、有淋巴结转移的病例中uPA、uPAR及PAI1的表达较手术病理分期早、无淋巴结转移的病例高；在不同分化程度的上皮性卵巢癌组织中，低分化癌组织uPA、uPAR及PAI1的表达最高。有作者研究显示，uPA、uPAR及PAI1表达水平自正常卵巢组织、良性、交界性肿瘤、早期腺癌、转移性腺癌依次升高，其表达与卵巢组织的恶性程度显著相关，其中低分化癌表达水平最高[89]。本文结果与之一致。表明三者的表达水平上调与卵巢癌细胞的浸润转移及预后有关。
综上所述，uPA、uPAR与PAI1与卵巢组织恶变有关，可能反映上皮性卵巢癌的转移和复发,对于病情估计、疾病分期、预后判断具有一定的价值，有望作为鉴别上皮性卵巢癌与良性肿瘤的指标及预测预后的重要参考指标。
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