宫颈病变标本中人乳头瘤病毒感染情况分析

【摘要】  目的 检测妇科宫颈标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,探讨HPV不同基因型感染的致癌性，为临床早期诊断宫颈癌提供实验依据。方法 首先采用液基薄层细胞学技术(TCT)筛查各种宫颈标本，对可疑宫颈病变者(慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌)再采用基因杂交捕获技术进行HPVDNA检测, 并根据结果进行风险分析。结果 TCT共筛查出各种宫颈病变标本460例，包括慢性宫颈炎303例、宫颈上皮内瘤变(CIN)122例(其中CINⅠ30例，CINⅡ45例，CIN Ⅲ 47例)和宫颈癌35例。460例受检者治疗前宫颈HPV感染者211例，感染率为45.87%。慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌HPVDNA阳性率分别为27.06%、77.87%和97.14%，慢性宫颈炎和CIN、宫颈癌标本中的HPVDNA阳性率比较差异有统计学意义(χ2=79.396，P<0.01);而CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组间HPVDNA阳性率差异无显著性(χ2=1.21，P>0.05)。宫颈病变标本中常见的HPV感染基因型为 HPV16、52、58、68、18、39等。宫颈癌前病变及宫颈癌的HPVDNA含量高于慢性宫颈炎，差异有显著性(t=5.581、7.653，P<0.05);宫颈癌的HPVDNA含量也明显高于宫颈癌前病变(t=6.624，P<0.05); CINⅠ～Ⅲ的HPVDNA含量呈递增趋势，但差异无显著性(r=0.991，P>0.05)。结论 HPV感染在宫颈病变中起重要作用，对经阴道细胞学筛查异常和高危妇女进一步检测HPVDNA,对早期发现CIN和宫颈癌具有临床意义。

【关键词】  乳头状瘤病毒感染;宫颈上皮内瘤样病变;宫颈炎;宫颈肿瘤

AN ANALYSIS OF HUMAN PAPILLOMA VIRUS INFECTION IN CERVICAL SPECIMEN TANG TAO, HU XIAOFEN, ZHANG WENQING (Department of Gynecology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China); Objective To detect the human papilloma virus (HPV) infection in specimens of cervix in gynecology patients, explore the carcinogenicity of different genotypes of HPV infection, and provide experimental evidence for early diagnosis of cervical cancer. Methods Firstly, the thincytologic test (TCT) was used to screen various specimens of cervix, for doubtful specimens, such as chronic cervicitis (CC), cervical intraepthelial neoplasia (CIN) and cervical cancer, a secondgeneration hybrid capture 2 (HC Ⅱ) for HPVDNA detection and highrisk analysis was carried out. Results A total of 460 samples were detected by TCT, which included CC (303 cases), CIN Ⅰ(30), CINⅡ(45), CIN Ⅲ (47) and cervical cancer (35). Of 460 cases detected, 211 were infected with HPV before therapy, the infection rate being 45.87%. The HPVDNA positive rates were 27.06%,77.87% and 97.14%, respectively, in CC, CIN and cancer; the differences of positive rates of HPVDNA among CC, CIN and cancer were statistically significant (χ2=79.396,P<0.01). While positive rates of HPVDNA among CINⅠ, CINⅡ and CINⅢ were not statistically different (χ2=1.21,P>0.05). The commonly seen genotypes of HPV infection in the cervix were HPV16, 52, 58, 68, 18, 39, etc. HPVDNA content in CIN and cancer was higher than that of CC, the difference was significant (t=5.581,P<0.05); and that in cervical cancer was higher than that in CIN (t=7.653,P<0.05). HPVDNA value in cervical cancer was significantly higher than CIN (t=6.624,P<0.05). The HPVDNA levels in CINⅠ-Ⅲ showed an increase by degrees but with no significant differences among themt (r=0.991,P>0.05). Conclusion HPV infection plays an important effect on the pathological changes of cervix, for those with abnormal colpocytology findings and highrisk women, a further detection of HPVDNA is of great significance in early discovery of CIN and cervical cancer.

　　[KEY WORDS] papillomavirus infection; cervical intraepithelial neoplasia; cervicitis; cervix neoplasms

　　宫颈癌在我国的发病率占全世界的1/3,以每年2%～3%的速度增长,且发病年龄趋于年轻化，极大地危害了广大女性的健康[1]。因此，宫颈早期病变筛查的重要性日益突出, 筛查方法也在不断改进。人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌密切相关, 研究发现99%以上的宫颈癌有HPV感染, HPV是宫颈癌的主要致病因子[2]。近年来发展的HPVDNA检测和液基薄层细胞学检查(TCT)成为目前临床上广泛应用的宫颈癌的筛查方法。2007—2009年，我们对青岛大学医学院附属医院妇科门诊就诊者进行TCT检测，对其中可疑宫颈病变的标本进行HPVDNA检测，并以宫颈活组织病理检查结果为金标准，评价HPVDNA检测的筛查效果,以期为宫颈癌的早期筛查提供可靠的实验依据。现将结果报告如下。

　　1 资料和方法

　　1.1 标本及其来源

　　2007年3月—2009年3月，在我科门诊因宫颈病变行宫颈分泌物高危型HPV检测、宫颈上皮细胞TCT检查发现宫颈病变可疑者,阴道镜下取宫颈活组织行组织病理学检查确诊者共460例,其中慢性宫颈炎303例, 宫颈上皮内瘤变(CIN) 122例 (CINⅠ30例, CINⅡ45例，CIN Ⅲ 47例),宫颈癌35例。受检者年龄18～58岁,平均36.17岁。

　　1.2 方法

　　1.2.1 TCT检查 采用美国赛迪公司Thin Prep 2000仪进行TCT。经ThinPrep 2000处理系统制备成新柏氏薄层细胞涂片(如有必要，先用细胞溶解液处理掉标本中的红细胞和黏液)，进行巴氏染色，按TBS分级系统进行细胞学诊断。

　　1.2.2 HPVDNA检测 采用基因杂交捕获放大方法(HCⅡ), 应用美国Digene公司制造的HCⅡHPVDNA基因杂交信号放大系统及其配套试剂盒(南京协思扬公司提供)。HCⅡ检测采样使用专用的HPV采样刷，置于宫颈口逆时针方向旋转3周, 并停留10 s以上, 立即浸入专用的标本储存管,及时送检。HCⅡHPVDNA基因杂交检测按照试剂说明书进行操作。

　　1.3 诊断标准

　　HPVDNA检测阳性诊断标准：其结果为半定量检测宫颈HPVDNA的含量(以此含量表示宫颈HPV负荷量)，以标本的荧光光度值(RLU)与阳性定标阈值(CO)的比值表示。RLU/CO≥0.8为高危型HPV阳性，即标本中检出的HPVDNA负荷量≥0.8 ng/L，其比值越高，表示标本的病毒含量越高;RLU/CO<0.8为阴性。HCⅡ检测采用96孔平板法，可一次检测HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68等13种高危型HPV，并可同时检测样本中HPV负荷量。

　　1.4 统计学方法

　　应用SPSS 16.0统计学软件进行数据处理，数据间比较采用χ2检验和t检验。

　　2 结 果

　　2.1 宫颈不同程度病变的HPV感染率比较

　　本文460例受检者HPV感染211例，HPV感染率为45.87%。其中慢性宫颈炎HPV的感染率为27.06%，CIN者HPV的感染率为77.87%，宫颈癌HPV的感染率为97.14%。随宫颈病变程度的加重，HPV感染率呈上升趋势，慢性宫颈炎组与CIN组及宫颈癌组HPV感染率比较差异有显著意义(χ2=79.396，P<0.01);CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组间HPV的感染率比较差异无显著性(χ2=1.21，P>0.05)。见表1。表1 各类宫颈病变HPV感染率比较宫颈病变 nHCⅡ阳性例数HPV感染率

　　2.2 宫颈不同程度病变的HPV感染量比较

　　HPVDNA阳性的82例慢性宫颈炎RLU/CO最高值122.00，最低值0.88，平均值32.77。本文22例CINⅠ的RLU/CO最高值330.86，最低值14.22，平均值134.45;34例CINⅡ的RLU/CO最高值402.89，最低值177.28，平均值213.94;39例CIN Ⅲ的RLU/CO最高值592.47，最低值326.33，平均值为406.52。34例宫颈癌RLU/CO最高值723.66，最低值511.39，平均值603.28。宫颈癌前病变及宫颈癌的HPVDNA含量高于慢性宫颈炎，差异有显著性(t=5.581、7.653，P<0.05);宫颈癌的HPVDNA含量也明显高于宫颈癌前病变(t=6.624，P<0.05);CINⅠ～Ⅲ的HPVDNA含量呈递增趋势，但差异无显著性(r=0.991，P>0.05)。

　　2.3 宫颈病变HPV感染最常见的基因型

　　宫颈病变标本感染HPV最常见的3种基因型依次为：HPV16(16.4%)、HPV52(14.5%)、HPV58(8.8%)。本文慢性宫颈炎组为HPV52(14.4%)、HPV39(8.6%)、HPV68(7.1%)。在宫颈癌前病变组，其中CINⅠ组为HPV16(13.5%)、HPV68(10.7%)、HPV52(9.7%);CINⅡ组为HPV16(31.2%)、HPV52(18.8%)、HPV58(12.3%);CIN Ⅲ组为HPV16(43.9%)、HPV52(24.5%)、HPV58(18.9%)。宫颈癌组为HPV16(46.1%)、HPV18(45.9%)、HPV52(30.8%)。

　　3 讨 论

　　宫颈癌是女性第二位的恶性肿瘤，成为威胁妇女健康的最为严重的疾病之一[3]。近10年来其发病率以每年2%～3%的速度增长，并呈现发病年龄提前的现象[4]。宫颈癌的发生是多因素、多步骤、多基因共同作用的结果。 WHO于1992年宣布高危型HPV感染是引起宫颈癌变的首要因素[2]。不过，大部分免疫系统正常的人感染HPV后可以自行清除病毒并且不会发病,而病毒的持续感染才容易诱发宫颈疾病[5],一般认为从HPV引起癌前病变到发展成宫颈癌约需要10～20年, 绝大多数可能发展为宫颈癌前病变的病人均可在早期被发现,早期宫颈癌病人5年治愈率高达90%。因此，宫颈癌是可防可治的[6]，而宫颈早期病变筛查对宫颈癌的防治的重要性也日益突出。齐鲁医学杂志2010年10月第25卷第5期 Med J Qilu, October 2010, Vol.25, No.5

　　对经阴道细胞学筛查异常和高危妇女进一步检测HPVDNA,对早期发现CIN和宫颈癌具有实用价值。HPVDNA检测比宫颈细胞学检测对宫颈癌前病变更为敏感, 能保证结果的客观性和高度可重复性,不存在实验之间或者观察者之间的变异性[7]。因此，对已婚妇女进行HPV 检测成为宫颈癌防治措施中重要的一项内容。目前，国内外最新、最成熟的HPV 检测方法是HCⅡ,它是至今惟一被美国FDA批准用于宫颈HPV检测的方法, 其灵敏度和特异性均较高,且方法标准化,检测效率高,特别适合于大规模筛查[89]。

　　在本研究中，我们对460例宫颈病变标本采用HCⅡ技术进行HPV感染检测，结果显示，HPV感染率随宫颈病变的程度加重而增高，HPV的感染量也随宫颈病变的程度加重而增加，而且HPV的感染率和感染量在慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌组之间存在着显著差异。同时，我们还观察到不同宫颈病变的HPV感染型别存在差异，从宫颈病变标本中HPV16、HPV52和HPV58等亚型的感染率总数中可以看出，高危型HPV感染存在双重感染或多重感染，这也与国内外的研究结果一致[10]。因此， HPV感染在宫颈病变中具有重要作用，对经阴道细胞学筛查异常和高危妇女进一步检测HPVDNA,对早期发现CIN和宫颈癌有临床意义。

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