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【摘要】 目的建立测定香青兰中阿魏酸含量的方法。方法色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×150.0 mm，5 μm)，流动相为乙腈-50 g/L甲酸(31∶69)，检测波长280 nm，流量1.0 mL·min-1，柱温30 ℃。结果所测香青兰中阿魏酸的含量线性关系良好,线性范围为0.04～0.20 μg (r=0.999 3)。其回收率为99.94%(RSD=0.98%)。结论所建方法准确、简便,为科学地评价香青兰药材的质量提供了依据。
【关键词】 香青兰;阿魏酸;色谱法,液相
ObjectiveTo establish a method for determination of the content of ferulic acid in moldavica dragonhead. MethodsThe chromato bar of Kromasil C18 (4.6 mm×150.0 mm, 5 μm), mobile phase of acetonitrile -5% formic acid (31∶69), detection wavelength of 280 nm, flow rate of 1.0 mL·min-1, and column temperature of 30 ℃ were used in the study.ResultsThe content of ferulic acid in moldavica dragonhead detected with a good linear correlation, the linear range being 0.04-0.20 μg (r=0.999 3). Its recovery rate was 99.94% (RSD=0.98%).ConclusionThe method created is accurate and conve-nient, which offers an evidence for scientific assessment of the quality of medicinal substances of moldavica dragonhead.
[KEY WORDS]dracoophalun mololariea L; ferulic acid; stratography, liquid
香青兰是唇形科青兰属植物，维吾尔名为巴德兰吉布牙，在新疆地区为常用的维药之一[1]。其药性根据维医药理论属二级温热,有很强的香味,具有补益心脑、活血化瘀、通路开窍等功能。我国资源十分丰富,其主要化学成分为挥发油、萜类、黄酮类、氨氢酸、微量元素等[2]。在维吾尔族广泛用于治疗冠心病及血液质旺盛(高血压)、寒性神经性头痛、寒性感冒、气管炎等疾病[3]。研究表明,黄酮类化合物不但可以降血脂、抑制血小板聚集,而且还具有保肝、抗炎、抗病毒、抗菌等作用[4]。本研究采用反相液相色谱法测定香青兰药材中阿魏酸的含量，旨在进一步为香青兰的研究开发奠定基础。
1材料与方法
1.1仪器
岛津半制备高效液相色谱仪(LC-6AD高压泵，SPD-20A型紫外线检测器，CBM-20A色谱工作站);KQ-400DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);梅特勒AL 204电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。
1.2样品与试剂
阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所);香青兰药材采自吉木萨尔县二宫乡维吾尔药种植基地，经新疆自治区中医院李永和主任药师鉴定为唇形科植物香青兰(Dracocephalum moldavical L.)的干燥根。
1.3对照品溶液制备
精密称取阿魏酸对照品2.00 mg放入100 mL容量瓶中，加入甲醇溶液制成0.02 g/L的阿魏酸对照品溶液。
1.4样品溶液制备
精密称取香青兰粗粉约1.0 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，放冷、滤过，滤液置25 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，溶液滤入同一量瓶中，加入甲醇溶液定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
1.5色谱条件
色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×150.0 mm，5 μm);流动相为乙腈-50 g/L甲酸(31∶69);检测波长280 nm;流量1.0 mL/min;柱温30 ℃;进样量10 μL。阿魏酸与其他组分基线分离，R>1.5。以阿魏酸峰计算柱效，其理论塔板数≥3 300，拖尾因子为0.99。
1.6线性关系分析
分别精密吸取0.02 g/L阿魏酸对照品溶液2、4、6、8、10 μL，分别进样，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归分析。
1.7精密度实验
精密吸取阿魏酸对照品溶液5 μL，连续进样6次，测定阿魏酸峰面积。
1.8稳定性实验
精密吸取香青兰样品溶液5 μL，分别在0、2、4、8、12与24 h进样，测定阿魏酸峰面积。
1.9重复性实验
精密称取香青兰粗粉1.0 g，共6份，按样品测定法测定阿魏酸含量。
1.10加样回收率实验
精密称取已知含量的香青兰粗粉0.5 g，共6份，分别精密加入一定量的阿魏酸对照品，按照上述色谱条件进样测定其平均回收率。
1.11样品的测定
按“1.4”方法制备样品溶液3份，精密吸取阿魏酸对照品溶液10 μL，样品溶液10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，计算其含量。
2结果
精密吸取阿魏酸对照品溶液和香青兰样品溶液各10 μL，采用岛津半制备高效液相色谱仪检测香青兰中阿魏酸的含量，色谱结果见图1、2。
2.1线性关系
经回归分析显示，阿魏酸在0.04～0.20 μg内有良好的线性关系，回归方程为Y=13 425 140X-65 123，r=0.999 3。
2.2精密度实验
阿魏酸对照品溶液进样后测定阿魏酸峰面积,其RSD为1.59%。
2.3稳定性实验
香青兰样品溶液进样后测定阿魏酸峰面积, 其RSD值为1.71%。
2.4重复性实验
香青兰粗粉6份按样品测定法测得的阿魏酸含量分别为5.21、5.36、5.29、5.33、5.41与5.38 mg/g，其平均值为5.33 mg/g，RSD为1.35%。
2.5加样回收率实验
其平均回收率为99.94%，RSD为0.98%。结果见表1。
2.6样品的测定结果
本文方法测得香青兰药材中阿魏酸的平均含量为5.47 mg/g，RSD为1.72%。图1阿魏酸标准品色谱图图2香青兰样品色谱图表1阿魏酸加样回收率
3讨论
在实验中,我们比较了3种香青兰药材中阿魏酸提取方法，即回流提取法、超声提取法、浸渍法，因超声提取法简单、提取物含量高而作为本研究香青兰的提取方法。本实验流动相采用乙腈-50 g/L甲酸(31∶69)时,其分离效果均比较好，取得了良好的检测精密度和回收率,完全能满足香青兰中阿魏酸含量的测定,且便于推广应用。实验结果表明，本实验方法可作为香青兰药材中阿魏酸含量的测定方法，并可用于香青兰药材的质量控制，本实验为维吾尔药材香青兰有效成分的研究提供了基础。
【参考文献】
\[1\]刘勇民. 维吾尔药志(上)\[M\]. 乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社, 1999:405-407.
\[2\]中华人民共和国卫生部药典委员会编. 中华人民共和国卫生部药典· 维吾尔药分册\[M\]. 乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社, 1999:73.
\[3\]谭红胜,禹荣祥,叶敏,等. 维药香青兰中挥发油成分的GC-MS分析\[J\]. 上海中医药大学学报, 2008,22(2):55-58.
\[4\]吴寿金,赵泰. 现代中草药化学成分\[M\]. 北京:中国医药科技出版社, 2002:82-84.