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【摘要】 目的 建立血型反定型实验方便快速准确的自动检测技术。方法 采用全自动加样系统，完善仪器加样程序的编辑，使其自动完成对待检样本的稀释、血样分配及试剂加入、用酶标仪血型判读软件、微机判读结果的全过程。结果 共检测21076份样本，纠正ABO初筛错误11例，查出A亚型2例，B亚型4例，AB亚型3例。结论 全自动样本处理仪器操作简单、快捷，可减少工作强度，提高工作质量，仪器自动取血样条码及计算机酶标判定结果，打印血型酶标结果，更能有效减少人为差错，防止因工作量大而造成的错报、漏报，并有血型原始记录存档。
【关键词】 血型； 反定型； 自动检测
目前，许多血站血型定型采用手工加样，每天用手工处理数以百计的样本，容易造成加样错误，从而导致结果错判，血型结果没有原始记录，为解决上述问题，本站2002年开始利用全自动样本处理仪，自动扫描技术引入到微板法鉴定ABO反定型中, 采用坚毅血型鉴定软件，摸索酶标仪微机判读的ABO反定型检测方法, 取得满意效果，报告如下。
1 材料与方法
1.1 检测对象 本中心2004年3月～2005年3月的献血者全血样本21076份。
1.2 试剂与仪器 Geneisis-RSP-150型全自动加样仪（瑞士TECAN公司），TS温控孵育振荡器(奥地利Anthos公司)、KUBOTA5100平板式离心机(日本KUBOTA公司)、普通计算机（CPU P4 2.0G，内存512M，硬盘80G）、酶标仪（TECAN公司）、红细胞（自己配制）、坚毅血站血型鉴定软件（坚毅公司）、空白U型板(浙江黄岩拱东塑料医用制品厂)。
1.3 ABO反定型 (1)取3块空白酶联试验U型板作为ABO反定型反应板，利用全自动加样仪读取条码后，自动生成上机板块条码号，用加样仪上的加样针快速分配样本血清50μl（吸样顺序A1—H1至A12——H12），注入到ABO反定型U板中，每份样本并列加3排孔（A1，A2，A3；A4，A5，A6；），依次完成88人份待检样本。(2)用加样仪上的加样针快速分配4%A血球25μl到反应板中（依次顺序A1—H1，A4—H4，A7—H7，A10—H10），仪器自动冲洗管道及加样针后，分配4%B血球25μl到反应板中（依次顺序A2—H2，A5—H5，A8—H8，A11—H11），仪器自动冲洗管道及加样针后，分配4% O血球25μl到反应板中（依次顺序A3—H3，A6—H6，A9—H9，A12—H12）。(3)将加完待检血清的微板放入平板离心机1000r/min离心2min，取出将其放入振荡仪1000r/min振荡30s，取出放入酶标仪判读。(4)判读,将微板置于酶标仪，由微机通过坚毅血站血型鉴定软件控制，通过条码传输，自动判读结果，并形成文件。ABO反定型测量参数；扫描点数40，-20到+19，测定波长620nm,Cell—A上限0.95，下限0．9;Cell—B上限0.85，下限0.8; Cell—O上限0.95，下限0．9。TECAN酶标仪可运用凝集法判读U型板，与定性法不同，凝集法每个孔可设定读取一条直线的40个位，根据40个点位的波动峰值计算图形，进而判断是否存在凝集块，同时设定好A血球、B血球、O血球标准试剂的凝集关系，自动判断出标本的血型结果，同时填入检验结果数据中。用计算机打印出试剂生产厂家、试剂生产批号、试剂失效日期、试验日期、体检号、标本号、姓名、血型、操作者等结果。
2 结果
从21076份样本中，正定型和反定型比较，不符21例,相符率为99．90％，证明该试验方法的可行性。纠正ABO初筛错误11例，查出A亚型2例，B亚型4例，AB亚型3例，并有打印血型鉴定全中文酶标纸，以便保存。
3 讨论
本站利用全自动血液样本处理系统，酶标仪计算机血型判读系统，对大批量献血者样本进行ABO反定型，实现了自动化检验过程程序化、判读标准化、结果数据化、有原始记录存档，有效地排除人为的干扰，处理88人份只须25min，显著的提高了工作效率。用本法常规筛查大批标本，可及时检出稀有血型者，筛查结果可在电脑中保存及打印原始记录并及时通过网络传输。本法技术特点、亮点：利用全自动加样仪读取条码后，自动生成上机板块条码号，用酶标仪检测，计算机自动判读ABO反定血型，并打印出试剂生产厂家、试剂生产批号、试剂失效日期、试验日期、体检号、标本号、姓名、血型、操作者等结果，有效地保证ABO血型的检出；坚毅血型鉴定软件有效减少人为差错，防止因工作量大而造成的错报、漏报，并有原始记录存档；统一操作程序选择最佳工作浓度以对较弱抗原产生较好的凝集效果。在操作方面保证微板实验结果准确性的条件注意这几个方面: (1)加样针在加试管抗凝血清时，加样针头要编辑设置液面探测，防止吸取到血细胞；(2)标准红细胞试剂配制要严格按操作规程进行,要使用新鲜配制的标准红细胞,标准红细胞的浓度要准确［1］;(3)红细胞和血浆的比例应在1：2的最适比例范围内［2］;(4)实验过程要按已建立的实验条件进行操作。当正定型与反定型不相符时,用试管法做正反定型确认。除了严重溶血、冷凝集、弱抗体等因素造成微板法正反定型不符之外,还应考虑有不规则抗体、亚型的存在［3］。为防止反定型血型出现溶血,我们采取如下措施:在配制A、B、O红细胞中加入EDTA,因EDTA可以和钙结合,从而降低了有钙离子参与下的补体溶血反应;血清和红细胞混合后,应马上离心,操作时间应在5min内完成,以减少补体参与的溶血过程。
【参考文献】
1 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程，1997，33.
2 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第二版.1977，1，103-105.
3 邢培清,刘玉振.实用输血检验.郑州:郑州大学出版社，2001，231-239.
(编辑：悦 铭)
作者单位：512026 广东韶关，韶关市中心血站