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【摘要】 目的建立快速同时测定蔬菜、水果中10种常见有机磷农药残留的气相色谱火焰光度检测方法。方法25 g样品用50 ml乙腈快速提取，经氯化钠盐析后，50℃水浴氮吹浓缩，丙酮溶解定容，用DB-1701毛细管色谱柱，火焰光度检测器，同时采用程序升温和分流进样的方式进行气相色谱分析，以保留时间定性，外标法定量。结果该方法10种有机磷农药在12 min内得到有效分离，久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷的线性范围为0.32~8.0μg/ml,敌敌畏、甲胺磷和甲拌磷的线性范围为0.16~4.0μg/ml，相关系数均在99.9%以上，平均回收率在89.7%~102.4%，方法的最低检出限在0.01~0.05mg/kg，相对标准偏差(RSD)<10%。结论该方法简便、快速、重现性好、杂质干扰少，适用于蔬菜、水果中多种有机磷农药残留的检测。
【关键词】 蔬菜;水果;有机磷;残留;气相色谱法;火焰光度检测器
【Abstract】ObjectiveTo set up a GC-FPD method of determination for 10 organophosphorous pesticide residues in vegetables and fruits. MethodsThe procedure involved the extraction of 25 g sample with 50 ml acetonitrile,salted out and blown by nitrogen in 50℃,using acetone to solute and make up to volume. The temperature was controlled and the analytes were split by GC in DB-1701 capillary column .The retention time of the peaks was used for qualitative analysis,external standard method was used for quantitative analysis.Results10 organophosphorous were separated and analyzed in 12 min.The linear range of monocrotophos,dimethoate,malathion,parathion,acephate,chlorpyrifos,methyl parathion was 0.32~8.0μg/ml.The linear range of DDV, methamidophos and phorate was 0.16~4.0μg/ml.the correlation coefficients was more than 99.9%.Extraction recoveries were between 89.7%~102.4%, the limits of quantification were 0.012~0.045mg/kg ,and RSD was less than 10%.ConclusionThe method is simple ,rapid,high repeatability and less interferences for detection of organophosphorous pesticide residues in vegetables and fruits.
【Key words】vegetables;fruits; Organic phosphorus; residue;GC;FPD
有机磷农药是蔬菜、水果生产过程中病虫害防治常用农药之一,其特点是高毒性，杀虫范围广[1]。自1984年我国停止使用有机氯农药后，有机磷农药便上升为最主要的一类农药，广泛用于粮食、蔬菜、水果的防虫、杀虫。食用少量的残留有机磷农药，人体自身会降解，不会突然引起急性中毒，但长期食用没有清洗干净带有残留有机磷农药的农产品，必然会对人体健康带来极大的危害，轻则导致神经功能紊乱，重则致死。随着人们对环保问题的日益关注，人们对食品安全意识的逐步提高，新的农药品种将不断进入市场，并且对农药检测限的要求将会更低，因此分析发展有机磷农残快速同时的检测方法越来越受到人们的重视。本研究采用了农业部发布的“蔬菜和水果中有机磷类农药残留检测方法”(NY/T761.1-2004[2])进行样品处理，用气相色谱∕火焰光度检测器(GC∕FPD)进行测定，具有简便、快速、重现性好、杂质干扰少的特点，满足蔬菜中有机磷农药残留检测需要。
1材料与方法
1.1仪器与试剂岛津GC-2010气相色谱仪附带火焰光度检测器(FPD)和AOC-20i+s自动进样器;IKA组织匀浆机;万分之一分析天平;OA-SYS氮气吹扫仪。乙腈(色谱纯)、丙酮(色谱纯)、优级纯氯化钠(550℃烘2h，干燥器内保存备用)。久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷、敌敌畏、甲胺磷和甲拌磷标准溶液购自国家标准物质中心，浓度均为100μg/ml。
1.2实验方法
1.2.1色谱条件色谱柱：DB-1701：(30m×0.25mm×0.25μm);柱温：程序升温，130℃，以20℃/min的速率升至230℃，保持7 min;进样口温度270℃;进样量1.0μl;恒线速度控制：线速度30cm/sec;检测器温度：270℃，分流进样，分流比为20.0，柱流量0.98 ml/min;高纯氮气(纯度99.99%);氢气：80.0 ml/min;空气：120.0 ml/min。
1.2.2标准曲线的绘制以丙酮为溶剂，将久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷配制成浓度分别为8.0μg/ml，敌敌畏、甲胺磷和甲拌磷的浓度分别为4.0μg/ml的混合标准储备液。用丙酮进行梯度稀释，得到混合标准物质的2个系列标准使用液，浓度(μg/ml)分别为0.32、0.8、2.0、4.0、8.0 和0.16、0.4、1.0、2.0、4.0。用气相色谱仪进行分析，根据保留时间定性，以峰面积对浓度分别绘制各种有机磷农残的标准曲线。
1.3样品处理
1.3.1提取准确称取25.0 g样品放人100 ml烧杯中，加入50.0 ml乙腈，高速匀浆2 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有6 g氯化钠的100 ml具塞量筒中，收集滤液40~50 ml，盖上盖子，剧烈振荡1 min，在室温下静置10 min，使乙腈相与水相分层。
1.3.2净化从100ml具塞量筒中取10.0ml乙腈溶液放人100ml比色管中，50℃水浴氮吹，调节氮气流速，1h内氮吹近干，加入丙酮定容至2.0ml待测。
1.3.3测定在优化的色谱条件下测定久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷、敌敌畏、甲胺磷，甲拌磷标准和样品，以保留时间定性，峰面积定量，外标法计算样品中各种有机物的浓度。
2结果与讨论
2.1提取试剂的选择[3]我们选择乙腈作为提取溶剂，因乙腈极性中等，和水互溶，可以有效地提取农药且干扰物少。将提取溶剂的体积确定为样品质量的2倍，既节省了试剂又缩短了浓缩时间，还能保证农药的充分提取。加入氯化钠，将乙腈赶出水相，同时农药分子也转入乙腈相中，处理方法较简单，避免了常规加入大量的无水硫酸钠脱水[4]造成试剂浪费又把握不准的情况。
2.2水浴温度的控制甲胺磷、敌敌畏等有机磷农药不稳定，易分解，样品中浓缩温度直接影响方法的回收率。实验中发现水浴温度高于60℃时，有机磷农药有不同程度的分解，提高回收率的根本就是严格控制浓缩时的水浴温度。
2.3色谱条件的优化对比DB-1毛细管色谱柱和DB-1701毛细管色谱柱同时分离10种有机磷农残的分离效果。在相同的条件下采用程序升温，使用DB-1毛细管色谱柱分离10种有机磷农残的效果并不理想，其中久效磷、对硫磷和乐果未能彻底分离，且出峰时间较长。而采用DB-1701毛细管色谱柱，10种有机磷农残的分离效果较好，其中在初始温度为130℃，然后以20℃/min的速率升至230℃，保持7 min这一程序中，分离的效果和峰形最佳且最节省时间。色谱图见图1。
2.4线性范围与检出限将配制好的10种有机磷标准溶液按上述色谱条件依次进样，以峰面积X对浓度Y进行线性回归分析，以仪器基线噪声3倍所对应的浓度值计算最低检出限[5]，线性范围及相关系数及见表1。图110种有机磷标准色谱图 表1本测定方法的回归方程、线性范围、相关系数及最低检出限
2.5样品分析和加标回收率采用本方法测定的10份蔬菜和10份水果中均未检出10种有机磷。在不同样品中分别添加10种有机磷农药的标准溶液，制成3个添加水平加标样品，按1.3样品处理方法进行测定，每个添加水平测定7次。结果见表2。表2蔬菜水果中添加10种有机磷农药的回收率和精密度测定结果
3讨论
本实验所研究的方法，12min内同时分析了10种有机磷农药，对比DB-1毛细管色谱柱和DB-1701毛细管色谱柱的分离效果，确定用DB-1701毛细管色谱柱，FPD检测器，以初始温度130℃，以20℃/min的速率升至230℃，保持7 min，为最佳色谱条件，10种农药能够完全分离。方法的最低检出限为0.01~0.05mg/kg，RSD均<10%，样品的加标回收率在89.7%~102.4%之间。同时久效磷、乐果、马拉硫磷、对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷的线性范围均为0.32~8.0μg/ml,而敌敌畏、甲胺磷和甲拌磷的线性范围均为0.16~4.0μg/ml。该方法简便、快速、重现性好、杂质干扰少，完全满足方法学需要，适用于蔬菜、水果中多种有机磷农药残留的测定。
【参考文献】
1李红萍，郭爱玲，郑华英.高毒有机磷农药在蔬菜中残留动态的研究及安全评价.中国卫生检验杂志，2006，16(5)：542-543.
2NY/T761.1-2004.蔬菜和水果中有机磷农药残留检测方法.[S]
3赵亚华，何学芳，李勇,等.食品中40种有机磷和氨基甲酸酯农药多残留快速测定技术研究.中国卫生检验杂志，2007，17(11)：1938-1941.
4GB/T5009.20-2003.食品卫生检验方法理化部分(一) [S]
5Olguin EJ,Galacia S,Camacho R. Simultaneous high-biomass protein production and nutrient removal using Spirulina maxina in sea water supplemented with anaerobic effluents.World Journal of Microbiology&Biotechnology,1994,10:576-578.