高乳糜微粒对血红蛋白比色测定的影响

　　【摘要】 目的  探讨高乳糜微粒对血红蛋白（Hb）比色测定的影响程度，建立高乳糜微粒患者Hb的检测方法。 方法  通过不同系列高乳糜微粒血浆浊度的测定，分析Hb与高乳糜微粒的相关性;检测高乳糜微粒血浆中甘油三酯（TG）、总胆固醇酯（CH）、载脂蛋白（apo）和极低密度脂蛋白（VLDL）的含量，分析Hb浓度与以上指标的相关性;将高乳糜微粒患者测得的Hb比浓度减去其自身血浆空白作为Hb真实值，并进一步验证该方法的准确性。 结果  乳糜微粒含量越高，对Hb比色测定的影响程度越严重;高乳糜微粒患者Hb的假性增高与TG的显著增高表现出不完全一致性，与VLDL、CH和apo的含量无明显相关性;减差法是评价Hb实际浓度的理想方法。 结论 高乳糜微粒可明显干扰Hb的比色测定;高乳糜微粒患者的Hb浓度可通过减去血浆浊度的方法而获得。
    
　　关键词  高乳糜微粒 血红蛋白 比色测定
      
　　几乎所有血细胞分析仪都是通过光电比色来测定Hb浓度的。理论上说，高乳糜微粒血液必然会造成Hb比色测定的干扰，究竟这种干扰的程度如何?采取什么措施去消除它?文献中未见报道。生化自动化分析中，一般通过除空白来解决血脂、黄疸和溶血的影响。本文以此为出发点，欲寻求一种能够得到准确Hb浓度的方法。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 材料 收集15例高乳糜微粒血浆各2ml和正常人混合血浆（勿溶血）40ml，-20℃保存备用。
   
　　1.2 仪器与试剂 美国Abbott CELL-DYN1600血细胞分析仪，全套试剂由山东烟台三得有限公司提供;日本日立7170A自动生化分析仪，TG和CH试剂由温州东瓯生物工程有限公司提供;载脂蛋白试剂由上海玉兰生物技术研究所提供。
   
　　1.3 实验方法 测定15例标本血浆TG、VLDL、CH、apoAI和apoB100的含量。TG为一步终点法，CH为CH氧化酶法，载脂蛋白为免疫透射比浊法，VLDL为高速离心法。测定15例高乳糜微粒混合血浆浊度，计为Hb浓度（实际为血浆空白），然后取1ml用正常人混合血浆作1∶1、1∶2、1∶4、1∶8倍比稀释后再测定血浆浊度。任取20例EDTA-K 2［1］ 抗凝血2ml，每支试管各1ml，然后分为两组，第一组分别加1ml高乳糜微粒混合血浆，第二组分别加正常人混合血浆1ml，分别测定Hb浓度。最后测定各标本的血浆空白，对应Hb浓度减去血浆空白作为统计值，用配对t检验比较两组数据的差异。
    
　　2 结果
    
　　15例高乳糜微粒血浆TG含量均显著升高，但增高的数值与Hb增高的幅度呈不完全的一致性，7例VLDL明显升高，CH、apoAI和apoB100的含量不一。
   
　　高乳糜微粒混合血浆浊度为49g/L，经倍比稀释后分别为25g/L、12g/L、6g/L、3g/L。可见Hb值与乳糜微粒的含量呈直线关系，乳糜微粒含量越高，血浆浑浊度越高，对Hb测定产生的影响越严重。
   
　　20例抗凝血减空白后的Hb浓度，经配对t检验，两组数值无显著性差异（P>0.05）。说明高乳糜微粒血症患者测得的Hb浓度减去血浆空白产生的浊度可作为其实际Hb浓度。

　　3 讨论
      
　　乳糜微粒是由TG、CH、磷脂及载脂蛋白共同组成的微粒体，在血浆中呈乳浊状，血浆浊度是由乳糜微粒和VLDL引起的 ［2］ ，本文结果也证明了这一点。虽然乳糜微粒和VLDL中富含TG，但其他不引起血浆浑浊的脂蛋白（如低密度脂蛋白和高密度脂蛋白）中也含有一定量TG。显然，高TG血症是引起Hb假性增高的一个重要原因，但不是唯一因素。CH、apoAI、apoB100是VLDL的主要成分，但VLDL对血浆引起的浑浊一般较轻 ［2］ 。结果说明，浑浊血浆引起的Hb假性增高与TG的含量呈不完全一致性，Hb假性增高与VLDL、CH、apoAI和apoB100的增高并无规律可循。也就是说，我们难以通过与乳糜微粒有关的某种成分的含量求得实际Hb浓度。实验设计中我们也曾试图用血浆置换（用稀释液替代高乳糜微粒血浆）法来消除高乳糜微粒的影响，但缺点是血浆中富含血小板，血浆置换必然引起血小板计数的显著减少，血浆和稀释液的吸量不准又可造成Hb的测定误差，吸取血浆的过程中也难免造成白细胞的丢失。结果同时说明，高乳糜微粒血症患者测得的Hb浓度，减去其自身血浆测得的空白浊度，与Hb真实浓度无显著性差异（P>0.05）。
   
　　可见，应用这种方法测定Hb浓度是较为理想的。由于MCH和MCHC是通过Hb换算得到的，Hb假性增高的病例以上两项参数也显著增高，而用校正后的Hb与RBC、HCT之比即可求得MCH和MCHC的实际值。
   
　　乳糜微粒半衰期仅为5～15min，脂蛋白脂酶是乳糜微粒清除的重要水解酶。对正常人来说，乳糜微粒进入体循环后迅速被代谢，所以空腹血中无乳糜微粒。即使饭后2～4h乳糜微粒的高峰期对Hb比色测定也无影响。而脂蛋白脂酶缺少或apoCⅡ先天性缺陷引起的Ⅰ型原发性高脂蛋白血症，酶活性不足引发的V型原发性高脂蛋白血症，往往以空腹严重高乳糜微粒血症为其特征;继发性高脂蛋白血症（控制不良的糖尿病、肾透析、肾移植等）及接受脂肪乳治疗后也常表现为高乳糜微粒血症。以上病例的Hb测定中其数值极有可能增高，这就要求检验工作者增强责任心，遇到特殊疾病和血检过程中发现MCH和MCHC异常增高时，应主动与患者或临床医生联系，或将标本离心后观察是否为高乳糜微粒血浆，切不可轻率对待每一个异常值。
    
　　参考文献
    
　　1 丛玉隆.血液分析仪应用中的几个问题.中华医学检验杂志，1994，17（6）:325-326.
   
　　2 陈灏珠.内科学，第4版.北京:人民卫生出版社，1996，764.
    
　　（编辑一 凡）

　　作者单位:250012山东济南山东大学齐鲁医院检验科