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【摘要】 目的 探讨Ki-67、PCNA的表达与胃肠道间质瘤临床病理特征的关系，分析这些指标在GIST中的作用及其相关性。方法 应用免疫组化SP法检测40例胃肠道间质瘤中Ki-67、PCNA的表达。结果 40例胃肠道间质瘤中Ki-67、PCNA阳性表达率分别为60.0%、65.0%。Ki-67、PCNA表达与GIST的性别、年龄、部位、肿瘤大小、组织学分型无关，与组织学分级有关。Ki-67、PCNA的表达具有一定的正相关性。结论 Ki-67、PCNA联合应用可作为临床病理判定GIST良恶性、恶性程度、肿瘤分级及预后的重要指标。
【关键词】 胃肠道间质瘤；Ki-67、PCNA；免疫组化
胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）是消化道最常见的间叶性肿瘤，光镜下，胃肠道间质瘤的肿瘤细胞很像平滑肌和神经鞘瘤［1］。由于GIST的生物学行为难以预测，一些可以保持多年没有症状，而另一些已发生转移［2］，影响预后因素也多种多样。本文应用免疫组化方法GIST进行Ki-67、PCNA的检测和分析研究。
1 材料与方法
1.1 材料 选择我院经CD117和CD34证实为胃肠道间质瘤标本40例。良性指标：肿瘤小于5cm或核分裂小于5/50HPF，且无细胞多型性，细胞成分少，无黏膜侵犯或坏死。恶性指标：黏膜侵犯，肿瘤坏死和显著的细胞多型性，核分裂大于10/50HPF。介于良恶性之间的为潜在恶性。按此标准，40例GIST中良性15例，潜在恶性10例，恶性15例。胃15例，肠13例，其他（包括食管、肠系膜）12例。年龄36～78岁，平均54.3岁。肿瘤直径＜5cm者16例，直径≥5cm者24例。
1.2 实验方法 应用免疫组化SP法，Ki-67、PCNA单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发公司。实验中用已知的Ki-67、PCNA阳性组织做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封固，显微镜下观察。
1.3 判定方法 Ki-67以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数≥10%为（+），＜10%为（-）。PCNA以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数≥20%为（+），＜20%为（-）。
1.4 统计学方法 进行Pearson χ2检验，Fisher精确概率法，Spearman等级相关分析和Kappa检验。P＜0.05有统计学意义。
2 结果
40例GIST中，24例（60.0%）Ki-67阳性表达，阳性信号定位于细胞核。通过χ2检验，不同性别、年龄、部位、肿瘤直径在小于或大于5cm之间、不同组织学类型之间Bax的表达率差别无显著性，但与GIST的组织学分级有关（χ2=24.028，P=0.000），从良性、潜在恶性到恶性的GIST，Ki-67阳性表达率逐渐升高，分别为13.3%、70.0%和100.0%，阳性表达率差异有非常显著性（P＜0.01），但潜在恶性和恶性之间的表达率差异无显著性。
40例GIST中26例（65.0%）PCNA阳性表达，阳性信号定位于细胞核。通过χ2检验，不同性别、年龄、部位、肿瘤直径小于或大于5cm之间、不同组织学类型之间Bax的表达率无显著性差别，但与GIST的组织学分级有关（χ2=17.875，P=0.000），从良性、潜在恶性到恶性的GIST，PCNA阳性表达率逐渐升高，分别为26.7%、70.0%和100.0%。良性和潜在恶性GIST之间PCNA阳性表达率差异有非常显著性（P＜0.05），良性和恶性GIST之间PCNA的阳性表达率差异有显著性（P＜0.01），但在潜在恶性和恶性之间的表达率无显著差异。表1 PCNA和Ki-67表达的相关性
PCNA和Ki-67在GIST中表达呈正相关。从良性、潜在恶性到恶性的GIST，Ki-67和PCNA阳性表达率逐渐升高。根据Kappa值，两者一致性较好。
3 讨论
Ki-67是与增殖细胞相关的核抗原，仅分布于核内，其功能被认为与细胞的有丝分裂密切相关。现已知道G0期细胞无Ki-67抗原表达，在G1后期开始出现，S、G2期升高，M期达高峰，其后迅速降解［3］。本研究发现从良性、潜在恶性到恶性的GIST，Ki-67阳性表达率逐渐升高，分别为13.3%、70.0%、100.0%，说明随着GIST从良性到恶性转变的过程中，肿瘤分化越差，增殖性越强，恶性度越高，反映了肿瘤细胞增殖和分化情况。在恶性GIST中Ki-67全部表达，说明肿瘤细胞活跃的增殖能力、较强的侵袭能力、生长速度加快、复发和转移可能性增加。因此可以认为Ki-67是判断GIST良恶性及用于组织学分级的一个较好指标。
PCNA是细胞DNA合成期DNA多聚酶的一种辅助蛋白，参加细胞增殖过程的DNA复制，其表达反映了细胞的增殖活性。PCNA可用于预测肿瘤进程和早期复发的可能性［4］。本研究发现从良性、潜在恶性到恶性的GIST、PCNA阳性表达率逐渐升高，分别为26.7%、70.0%和100.0%，说明随着GIST从良性到恶性转变的过程中，肿瘤分化越差，增殖性越强，恶性度越高，反映了细胞增殖和分化情况。在恶性GIST中PCNA全部有表达，说明肿瘤细胞增生活跃，浸润和转移的能力增强，生长速度加快，复发和转移的可能性增加。可以认为PCNA是判断GIST良恶性及用于组织学分级的一个较好指标。PCNA与Ki-67都是检测肿瘤增殖活性的重要指标，二者联合起来应用，对于判断肿瘤的生物学行为及预后很有意义。有人认为胃肠道间质瘤中，当良恶性无法明确时，PCNA与Ki-67可联合或单独作为预后的参考指标［5］。本研究也证明，PCNA与Ki-67联合应用可作为临床病理判断GIST良恶性、恶性程度、肿瘤分级及预后的重要指标。
【参考文献】
1 Liu P,Na J,Wang Y.Study of gastrointestinal stromal tumours by light microscopy,electron microscopy and immunohistochemistry.Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi,2003,31（3）:199-203.
2 Tornoczky T,Kover E,Pajor L.Frcquent occurrence of low grade cases among metastatic gastrointestinal stromal tumours.J Clin Pathol,2003,56（5）:363-367.
3 李爱华，刘培淑.Ki-67与卵巢肿瘤的研究进展.肿瘤防治杂志,2003,10（7）:780-782.
4 Kushlinskii NE,Orinovskii MB,Gurcvich LE,et al.Expression of biomolecular maekers （Ki-67,PCNA,Bcl-2,BAX,Bclx,VEGF） in breast tumors.Bull Exp Biol Med,2004,137（2）:182-185.
5 张勤，张文，朱争艳.PCNA,Ki-67对胃肠道间质瘤预后的临床病理学探讨.武警医学院学报,2004,13（5）:372-374.
作者单位： 150010 黑龙江哈尔滨，哈尔滨市第一医院病理科
（编辑：江 宇）