癌症患者CD4与Th1 Th2的相关性研究

　　【摘要】 目的 进一步了解CD4与Th1，Th2三者之间的相关性及临床意义。方法 观察癌症患者255例（消化道癌182例，呼吸道癌61例，其他癌症12例）;手术前患者50例，手术切除后患者190例，不能手术患者15例，年龄（59.98±15.015）岁。用流式细胞技术查CD4，用双抗体夹心法测Th1，Th2;用SPSS软件进行偏相关系数非参数统计分析、比较极差（Range）、方差（Variance）等分析样本的离散度。结果 CD4与Th1，Th2，Th1/Th2之间无相关性，Th1与Th2，Th1/Th2之间存在正相关，Th2与Th1/Th2之间有负相关，CD4，Th1，Th2与正常值比有显著差异。结论 Th1，Th2，的变化在肿瘤的稳定阶段并不直接影响机体的CD4比值，从免疫指标观察看，肿瘤患者的CD4变异度不大，而Th1，Th2则比较灵敏，说明CD4不能反映肿瘤患者早期的免疫功能异常，Th1，Th2，Th1/Th2虽然能比较灵敏地反映机体的免疫功能，但三者均表示肿瘤不同的免疫功能异常发展态势。CD4与Th1，Th2，Th1/Th2应视为一组反映机体免疫功能的互补性检查。

       现代医学研究证实:CD4 + T细胞主要包括Th1，Th2二个功能亚群及其他Th细胞 ［1］  ，与此同时，也注意到Th1/Th2的平衡与恶性肿瘤的关系，普遍的概念是恶性肿瘤可以使Th1/Th2的平衡向Th2漂移 ［2］  。因此三者之间必定存在某些相关性。为探索这一问题，并为今后对肿瘤患者实施免疫治疗构建靶向性指标，课题组对265例癌症患者及42例健康人群进行了系统的CD4与Th1，Th2检查及分析，现汇报如下。

    1 资料与方法

　　1.1 一般资料 共检测有细胞学及病理证实的癌症患者265例，去除对应数据不全者10例，实际有效观察例数255例，男性161例，女性92例，未登记性别2例，年龄（59.99±15.015）岁。其中消化道癌患者182例，呼吸道癌患者61例，其他部位癌患者12例，手术前患者50例，手术切除后患者190例，未行手术切除患者15例;血液学、血生化检查均正常，检查前一周内无明显的感染性病变，无糖尿病，慢性感染性疾病及过敏性疾病等合并症。

    同期观察健康人群42例，做正常对照。

    1.2 观察内容 1.2.1 观察指标 静脉血中CD4，Th1，Th2比率。1.2.2 检测方法

    1.2.2.1 CD4检测 取肝素抗凝血1ml，用美国BD公司生产的三色抗体标注后，缓冲液冲洗，流式细胞仪计数。

    1.2.2.2 Th1，Th2检测 准备:取肝素抗凝血1ml，先用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞后，吸取淋巴细胞，调至2×10 6 /ml计数，在5%CO 2 环境中加入PHA，37℃条件下培养72h，吸取上清液，放置在-20℃环境中待测。检测:采用双抗体夹心ELISA法。将抗人IFN-γ和抗人IL-4单抗分别包被于酶标板上，通过显色反应，在450nm处测OD值，获得标本中IFN-γ和IL-4的浓度值。

    1.3 统计学方法 采用SPSS统计软件包对255例的各三个有效数据:CD4，Th1，Th2进行多因素变量偏相关系数非参数法分析三者之间的相关性，并对255例CD4，Th1，Th2与正常对照进行显著性检验（由山西医科大学卫生统计教研室提供统计数据）。

　　2 结果分析

    2.1 基本统计描述 见表1。

　　表1 基本统计描述（略）

　　表1可以看出，CD4的变异度相对较小，Th1，Th2的变异度最大，呈明显的偏态分布，值得注意的是，Th1/Th2的变异度介于二者之间。

    2.2 CD4，Th1，Th2三者之间的相关性分析 所有检验参数均行正态性检验，仅提示CD4值近似正态分布，所以对三个多因素变量行偏相关矩阵，（非参数方法）进行分析，见表2。

　　表2 CD4，Th1，Th2，Th1/Th2     之间偏相关系数比较分析（略）

　　注:［Coefficient/（D·F·）/2-tailedSignigficance］“·”is Printed if a coefficient cannot be computed.（“·”是一个不能进行系数计算的标记）

    结果:CD4与Th1，Th2，Th1/Th2之间无相关性。Th1与Th2，Th1/Th2之间有正相关性。Th2与Th1/Th2之间有负相关性。

    2.3 CD4，Th1，Th2与正常对照的比较，（符号秩检验） 见表3。秩号:CD4-4.0;Th1-554;Th2-246

    表3 CD4，Th1，Th2与正常对照的比较（略）

    结果:CD4，Th1，Th2与正常值有差别。

    3 讨论

　　这是一个前瞻性的研究，目的是为进一步了解肿瘤患者的CD4和Th1，Th2之间的互联作用。目前的医学研究已证明CD4 + T细胞是一组T淋巴细胞，Th1和Th2是其二个重要的亚型 ［1］  。从现象上看后者的变化应该影响前者，但事实上并非如此。前者是一种标志检查，后者是检查其分泌因子的含量，所以后者可以看成是一种功能检查。显然二者的变异情况不应该是一种很明确的相关关系。从表3的结论中可以看出，CD4和Th2表现出一种下调关系，而Th1则表现一种变异度不大的下调关系，这种现象符合患肿瘤后的一种常见的免疫态势 ［2］  ，这种态势并不反映二者之间有等比例的相关性，而是一种无关联的变异，这在表2的结论中可以看出，CD4与Th1，Th2无相关性。但表2中也出现一个新的问题-Th1与Th2有正相关性，这一点不符合目前肿瘤形成后Th1/Th2漂移的概念 ［2］  ，事实上临床资料中也看到一些非等比例上扬或下调的检测值，这些均表示一种Th1/Th2波动的态势，即漂移作用不明显，这预示哪种问题?表1的结论可以看出，通过对极差（Range），四分位数间距（Interquartile Range）以及中位数（Madian），方差（Variance），平均差（Mean）的比较分析，CD4的变异度较小，近似于正态分布，而Th1，Th2波动范围较大，是偏态分布。由于Th1，Th2反映出受激后的一种免疫反应状态和相互作用的一种态势，显然Th1，Th2的数值变化，可以反映机体整体当前的免疫功能水平，而Th1/Th2漂移。则反映机体免疫功能对肿瘤的免疫能力。

    总之研究的结果提示出一些新的看法，在肿瘤的稳定阶段CD4与Th1，Th2无明确的相关性，作为肿瘤患者免疫功能检查，CD4相对稳定，但不能反映出其免疫功能变化的态势，Th1和Th2可以比较灵敏地反映机体的免疫功能，而Th1/Th2则可以比较灵敏地反映出机体抗癌能力的强弱和变迁。所以作为今后设计免疫功能检查内容，CD4和Th1，Th2，Th1/Th2应视为一组互补性的检查。

　　［本研究属《围化疗期医学》的分项研究方向《围化疗期免疫治疗学》的亚课题］

　　参考文献

　　1 邓益群.Th1/Th2分化的转录调节.国外医学·免疫学分册，2002，5:247-249.

    2 姚新生.Th1与Th2研究概况.国外医学·免疫学分册，2002，6:290-293. 

    作者单位:1030013太原山西省肿瘤医院特诊科2山西医科大学2003级硕士研究生