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【摘要】 目的 研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与血清学免疫标志物及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系。方法 用荧光定量PCR法检测326份乙肝表面抗原阳性标本中的HBV-DNA，同时检测血清免疫标志物和ALT。结果 326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例，阳性率为65.34%(213/326)，ALT异常率为37.42%(122/326)。113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例，占59.29%(67/113)，HBsAg、抗-HBc阳性31例，占24.73%(31/113)，其他15例，占13.27%(15/113)，ALT异常率6.19%。结论 HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除，结合其他血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。
【关键词】 乙型肝炎；乙肝病毒核酸(HBV-DNA)；荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)；丙氨酸氨基转移酶(ALT)
本文用荧光定量PCR法研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与血清学免疫标志物及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系。并就其测定的临床价值报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2006年8月本院门诊和住院部乙肝病毒表面抗原携带者326例，男231例，女95例；年龄3～80岁，平均25.80岁。
1.2 方法
1.2.1 HBV-DNA检测 采用杭州博日公司的line-gene检测分析系统进行实时荧光定量PCR检测。试剂盒采用广州中山医科大学达安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒，检测步骤按试剂盒使用说明书，分别设阴性质控品、阳性质控品、空白对照以及阳性定量质控标准品梯度。检测结果＞103拷贝/ml判断为阳性，否则为低于检测线下限。
1.2.2 HBV血清学免疫标志物检测 用酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc共5个项目。采用华美生物工程公司的乙型肝炎诊断试剂盒，测定步骤参照说明书，分别设阴性、阳性、空白对照，用酶标仪读数，样品OD值≥阴性对照平均OD值×2.1判断为阳性，否则为阴性。
1.2.3 ALT检测 采用生化自动分析仪检测，正常值＜40U/L。
1.2.4 统计学方法 采用Excel 2000 软件进行处理。
2 结果
2.1 检测结果 326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例，阳性率为65.34%(213/326)，ALT异常率为37.42%(122/326)。113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例，占59.29%(67/113)，HBsAg、抗-HBc阳性31例，占24.73%(31/113)，其他15例，占13.27%(15/113)。ALT异常率6.19%。
2.2 HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果比较 见表1。
2.3 HBV-DNA定量与ALT异常率比较 见表2。表1 326份标本HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果表2 326份标本HBV-DNA定量与ALT异常率
3 讨论
实时荧光定量PCR是目前临床检测血清HBV-DNA常用的分子生物学方法。本系统充分利用了Taqman酶独特的生物学活性和荧光激活、淬灭性质，合成了分别携有荧光集团和淬灭集团近距引物、探针，在循环进行中即可检测荧光强度并用软件与内参比进行定量分析。由于无需开盖检测PCR产物，避免了以往传统PCR易产生假阳性污染物的缺点。检测重复性好，而且实时荧光定量PCR还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题。326份乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例，阳性率为65.34%(213/326)，ALT异常率为37.42%(122/326)。其中，大三阳86例，阳性率100%(86/86)，小三阳76例，阳性率53.15%(76/143)，HBsAg、抗-HBc阳性率为60.27%(47/78)，其他情况阳性率25.00%(5/20)。本文中113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例，占59.29%(67/113)，HBsAg、抗-HBc阳性31例，占24.73%(31/113)，其他15例，占13.27%(15/113)，ALT异常率6.19%。可能是由于这些病例经过抗病毒治疗，使病毒复制减弱或停止，从而检测结果低于检测线下限。血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态，具有很多临床价值，但检测费用较高［1，2］，而且不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态，HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除，结合其他血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。
【参考文献】
1 曹红卫，卫国，冯文曦，等.乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义.第三军医大学学报，2001，23：866-867.
2 张立国，张琚.实时定量PCR技术的介绍.生物技术，2003，13:39.
作者单位： 1 330800 江西高安，高安市人民医院检验科
2 330800 江西高安，高安市灰埠中心卫生院
(编辑：李 木)