新生儿缺氧缺血性脑病免疫状况的研究

　　【摘要】 目的  观察缺氧缺血性脑病患儿的免疫功能。 方法  选择本院儿科住院新生儿缺氧缺血性脑病患儿110例（轻度组40例，中度组38例，重度组32例）和同期健康新生儿30例。新生儿缺氧缺血性脑病患儿随机分成两组:常规治疗组和纳洛酮治疗组各55例。均于住院1～3天、6～7天、12～14天及26～28天采血，分别检测CD3、CD4、CD8、C3、IgA、IgM、IgG各项指标。 结果  住院初与对照组相比新生儿缺氧缺血性脑病患儿免疫功能明显抑制，且与病情严重程度成正比，治疗1周，常规治疗组与对照组比较，CD4、CD4/CD8仍有明显差异（P<0.05），而纳洛酮治疗组和常规治疗组相比，则CD3、CD8、CD4/CD8等项有明显差异（P<0.05）。 结论 新生儿缺氧缺血性脑病患儿免疫功能明显抑制，且与病情严重程度成正比，β-EP参与了其中免疫的抑制性调节。
     
　　Research on changes and mechanism of immunologic function in neonates with hypoxic-ischemic-encephalopathy
     
　　Zhao Hongli，Qin Libo
    
　　Da Qing Oil Field General Hospital，Heilongjiang163001.
   
　　【Abstract】 Objective To observe the dynamic changes of immunologic function（including immunoglobulin，T-cell subpopulation）.Methods The hypoxic-ischemic-encephalopathy group contained110cases and control group30cases.The hypoxic-ischemic-encephalopathy group was divided into two sub-groups:routine treatment group（55cases）and naloxone treatment group（55cases）.The patients of routine treatment group were treated as sug-gested by Han Yukun etc.The patients in the naloxone group were treated with naloxone for a week in addition to the routine treatment.Two blood samples were collected in each case four times in one month after birth，CD3，CD4，CD8，C3，IgA，IgM，IgG wre analysed.Results Compared with the control group，the immunologic function of the HIE group was inhibited significantly.CD3，CD4，CD4/CD8，IgA，IgM，IgG wrer all significantly decreased.And the degree of inhibition was positively correlated to the degree of HIE.The results of detection after one week showed:compared with the control group，CD4，CD4/CD8still showed significant differences in the routine treatment group（P<0.05），compared with the routine treatment group，CD8showed a significant decrease and CD3，CD4/CD8showed a signifi-cant increase in the naloxone treatment group（P<0.05）.Conclusion Immunologic function of hypoxic-ischemic encephalopathy in newborns is inhibited markedly and the degree of inhibition is positively correlated to the degree of HIE.β-EP participates in inhibitory regulation of the immunologic function.
   
　　【Key words】 hypoxic-ischemic-encephalopathy newborn β-endorphin immune
      
　　新生儿缺氧缺血性脑病是新生儿科常见的疾病之一，它可引起机体多系统功能的损害，其中对免疫系统的影响及其调节机制的研究少见报道。本研究通过对110例新生儿缺氧缺血性脑病患儿外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白（Ig）和补体（C3）等检测，探讨新生儿患缺氧缺血性脑病易合并感染性疾病的免疫学机制，为更好的治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供新的理论参考依据。

　　1 资料与方法
    
　　1.1 一般资料 （1）本文110例缺氧缺血性脑病患儿均为2003年10月～2005年2月在大庆油田总医院产科出生的及部分由外院转入的，入选标准，有下列情况之一者予以排除:①非窒息所致颅内出血;②颅内血肿;③入院前用过纳洛酮者;④产妇患可影响患儿免疫功能的疾患;⑤患儿入院前后使用影响其免疫功能的药物。分组按新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度标准 ［1］ ，轻度组40例，中度组38例，重度组32例，合并各种感染性疾病者35例。110例窒息新生儿随机分成两组:常规治疗组55例，轻度20例，中度19例，重度16例，胎龄（38.25±3.05）周，出生体重（3310.55±420.35）g，日龄（4.25±3.75）d;纳洛酮治疗组55例，轻度20例，中度19例，重度16例，胎龄（37.55±3.45）周，出生体重（3270.15±385.20）g，日龄（3.45±3.05）d;（2）正常对照组选择与缺氧缺血性脑病组同期出生的足月健康新生儿30例，男18例，女12例，胎龄（38.85±2.25）周，出生体重（3250±440.35）g，日龄（5.05±3.25）d;（3）感染组30例，为不同程度的各种感染性疾病患儿，日龄4～26天。所有检测对象胎龄均为37～42周，三组对象的性别、胎龄、日龄、孕次、产次、出生体重、生产方式等差异均无显著性，常规治疗组和纳洛酮治疗组在病情轻重程度上差异亦无显著性。
   
　　1.2 方法 HIE组患儿治疗均参照韩玉昆等 ［2］ 所提出的常规治疗方案进行。其中纳洛酮治疗组在此基础上，加用盐酸纳洛酮注射液，第1天先给0.1mg/kg的剂量输入，连用一周。
   
　　1.3 标本采集及处理 利用美国Array-360型特种蛋白分析仪测定免疫球蛋白（Ig）和补体（C3），利用美国流氏细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群。感染组于入院当日，HIE组与正常对照组分别于生后1～3天、6～7天、12～14天及26～28天检测以观察其动态变化。所有检测项目均由专人负责。
   
　　1.4 统计学方法 t检验、方差分析及q检验。
     
　　2 结果
    
　　2.1 两组新生儿治疗前各检测指标的比较 对轻、中度HIE患儿T细胞亚群各指标进一步分析发现，轻、中度HIE组与对照组比较，虽然轻度组T细胞总数并不减少（P<0.05），但T细胞亚群比例失调，CD4细胞减少（P<0.05），CD8细胞增加（P<0.01），CD4/CD8比值显著降低（P<0.01），IgM与C3亦有所降低，差异有显著性（P<0.05）;而重度HIE患儿与轻度HIE患儿相比，各项均有显著差异，提示重度HIE会加重新生儿T细胞亚群紊乱，体液免疫及非特异性免疫功能亦受到严重影响。说明HIE病情程度越重，患儿免疫功能抑制程度越深。见表1。

　　表1 HIE组各检测指标治疗前和对照组的比较 （略）
    
　　注:与对照组比较 ① P<0.05， ② P<0.01;与不同程度HIE患儿常规组比较 ③ P<0.01

　　2.2 HIE患儿不同日龄时外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白和补体（C3）的变化 HIE患儿CD4细胞减少，CD8细胞增加，CD4/CD8比值降低，IgM与C3明显降低，而IgG与IgA差异无显著意义，示HIE患儿细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能受到严重影响。在复苏后至生后1个月末，上述指标可恢复至正常对照组水平，见表2、3。

　　表2 HIE患儿不同日龄时T细胞亚群检测结果与对照组的比较 （略）
    
　　注:两组比较， ① P<0.01， ② P<0.05

　　表3 HIE患儿不同日龄时Ig、C3检测结果与对照组的比较 （略）
    
　　注:各指标均以均值表示，经统计分析，与对照组比较， ① P<0.01， ② P<0.05

　　2.3 治疗后第7天各检测指标的比较 见表4，从表中可看出，不管病情程度如何，常规治疗组与对照组比较，CD4、CD8、CD4/CD8等项差异有显著性（P<0.05），纳洛酮组和常规治疗组比较，则有CD8显著下降，而CD4、CD4/CD8有显著升高（P均<0.05）。提示纳洛酮治疗组免疫功能比常规治疗组已有明显改善，基本达到正常新生儿水平。

　　表4 治疗后7天各检测指标在对照组与不同程度HIE常规组和纳洛酮组中的比较 （略）
    
　　注:与对照组比较 ① P<0.05， ② P>0.05;与HIE常规治疗组比较 ③ P<0.05， ④ P>0.05

　　2.4 HIE合并感染对新生儿T细胞亚群的影响 本研究对正常新生儿、感染性疾病患儿、单纯HIE患儿及HIE并发感染等各组间的T细胞亚群进行了比较，经方差分析与q检验，证实上述各组之间T细胞亚群存在着差异，与单纯感染组比较，HIE合并感染者存在更为严重的T细胞亚群紊乱（P<0.01）。从而可以排除感染因素对HIE新生儿T细胞亚群的影响。
    
　　3 讨论
    
　　已知CD4/CD8比值对机体的细胞免疫和体液免疫均具有重要的调节作用，是判断机体免疫状态的重要指标［3］ 。本组研究发现缺氧缺血性脑病可导致新生儿T细胞亚群紊乱，且病情程度越重异常越明显，患儿入院1周后复查，免疫功能未恢复到正常组水平，提示新生儿缺氧缺血性脑病免疫功能的恢复是一个缓慢的过程。动态观察发现至生后26～28天，HIE组与正常对照组T细胞亚群各指标间差异均无显著意义（P>0.05），提示缺氧缺血性脑病导致T细胞亚群紊乱可能是暂时的。缺氧缺血性脑病对新生儿免疫球蛋白和补体水平的影响，主要表现为IgM和C3的降低。因在抗感染免疫的早期IgM的作用最重要，而IgM功能的发挥需补体参与。缺氧缺血性脑病患儿由于血浆IgM和C3含量均降低，促成其易继发各种感染性疾病。对照组新生儿出生时CD3、CD4较多，CD8较少，CD4/CD8约达2.5左右，IgA、IgM明显较少，而IgG达9.9g/L左右，符合正常新生儿一般特点，1周后复查，各指标无明显变化，只有IgG显著下降，提示由母体转运的IgG在逐渐消耗。本研究结果显示，新生儿缺氧缺血性脑病患儿免疫功能明显抑制，且抑制程度与病情严重程度有密切关系，重度HIE患儿各项指标均有明显下降，这与国内外众多资料基本相符。
   
　　文献报道新生儿缺氧缺血性脑病患儿均有明显的β-EP升高，且参与了脑损伤尤其是脑水肿的病理生理过程。β-EP作为神经-内分泌-免疫网络中的重要介质，还参与免疫功能的调节，但这种调节是复杂的 ［4］ ，其调节作用的差异往往与阿片肽的种类、使用剂量、给药途径、受体种类、免疫反应等有关。应激时阿片肽类物质对免疫功能的调节更为复杂，不同机体状态、不同条件下可能作用不同。新生儿患HIE时，β-EP对免疫功能有什么调节作用，其机制如何，尚未见报道。从β-EP特异性拮抗剂-纳洛酮治疗组和常规治疗组的比较以及常规治疗组各项指标两次检测的变化趋势的相关分析来看，均提示了β-EP参与了HIE免疫功能的下调。β-EP参与窒息时免疫功能的抑制性调节，主要可能通过以下几个机制 ［5，6］ :（1）窒息应激下，下丘脑垂体前叶分泌β-EP入血，使垂体内β-EP含量下降而外周血中含量明显增加，另外，窒息亦致外周血单个核细胞内β-EP含量明显增高，当高钾、5-羟色胺、IL-1、促皮质激素释放激素存在时，则促进外周血单个核细胞分泌β-EP入血，致血浆中β-EP增高。（2）β-EP是抗体产生的强有力抑制剂，对T、B淋巴细胞功能均有抑制作用。（3）β-EP抑制细胞免疫与淋巴细胞上存在β-EP受体有关，β-EP与抑制性T淋巴细胞CD8上相应的阿片受体结合，加强CD8的活性从而抑制细胞免疫。（4）β-EP也可能通过抑制淋巴细胞释放IL-2和IL-2受体表达而抑制淋巴细胞转化。（5）细胞因子与内源性阿片肽（EOP）之间存在着结构的同源性和功能的交叉，故可能β-EP是通过与细胞因子竞争受体位点而抑制淋巴细胞释放细胞因子的。（6）β-EP在中枢通过激活交感神经系统而抑制免疫功能。
   
　　缺氧缺血性脑病导致新生儿免疫抑制的机制尚不明确，可能为 ［7，8］ :（1）中枢神经系统具有调节免疫功能的作用，窒息后淋巴细胞凋亡机制异常启动，导致T细胞亚群变化及免疫低下。受损后可通过多种途径导致机体T、B细胞的数量和功能下降及抗体产生减少。（2）新生儿患缺氧缺血性脑病后，体内多种神经内分泌肽类激素的合成与分泌减少，从而对机体的免疫机能的调节作用下降。（3）缺氧本身是否可直接抑制T细胞的增殖与分化，或者使其消耗增加甚而寿命缩短等，尚有待研究。（4）IgM与C3主要在肝脏合成，新生儿患缺氧缺血性脑病后肝脏血流量减少，肝功能受抑制使其合成减少;再者，IL-2主要由CD4细胞分泌，窒息后CD4细胞减少，血清可溶性白细胞介素-2受体水平升高，致血清IL-2含量降低，IL-2可部分或全部纠正脐血单个核细胞的凋亡，并且IgM的合成需IL-2参与，故IgM降低。（5）红细胞可通过其表面淋巴细胞功能相关抗原-3与淋巴细胞的CD2分子结合，促进T细胞活化、产生淋巴因子，并调控B细胞增殖和抗体生成等。
   
　　总之，本研究对HIE患儿的免疫功能状态进行了初步观察，证实新生儿患HIE可导致机体免疫功能紊乱，初步阐述了新生儿患HIE后易于继发感染的机制，为新生儿患HIE后加强消毒隔离和防治感染提供了新的理论参考。
    
　　参考文献
    
　　1 中华医学会儿科学会新生儿学组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度.中华儿科杂志，1997，2（35）:99.
   
　　2 韩玉昆，许植之，虞人杰.新生儿缺氧缺血性脑病.北京:人民卫生出版社，2000，245-251.
   
　　3 Fauci AS.The revolution in clinical immunology.JAMA，2001，246:2567-2572.
   
　　4 白海波，杜继曾，郑莜祥.急性低氧下β-内啡肽参与对大鼠体液免疫的抑制性调节.生理学报，1999，51（2）:258-262.
   
　　5 林嘉友，李莉，高扬.β-内啡肽增强人外周血单个核细胞IL-1β、IL-6和iNOSmRNA表达.中华微生物学和免疫学杂志，1999，19（6）:498-500.
   
　　6 汤文洁.生理应激和细胞缺血免疫抑制与脓毒症易感性.国外医学·创伤与外科基本问题分册，1992，13（1）:81.
   
　　7 王晓蕾，刘晓平.窒息新生猪淋巴细胞凋亡与钙离子内流的实验研究.中华围产医学杂志，1999，2（4）:214-217.
   
　　8 刘恩梅，李成荣，杨锡强，等.脐血淋巴细胞凋亡及其影响因素.中华儿科杂志，1998，36（6）:334. 
　　作者单位:163001黑龙江大庆油田总医院儿科（ * 妇产科）