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【关键词】 宫颈癌 survivin 增殖 Ki-67
Expression and significance of survivin in cervical squamous cell carcinoma
Wei Xiaoxia
The Greneral Hospital of Gansu Jingyuan Coal Industry Company，Gansu，Jingyuan730913.
【Abstract】 Objective To study the expression of survivin and it relationship with the proliferation activity in cervical squamous cell carcinoma.Methods Using immunohistochemistry S-P methods，the expression of survivin and Ki-67were evaluated in21cases of chronic cervicitis，17cases of cervical intraepithelial neoplasm（CIN）and46cases of invasive squamous cervical carcinoma（SCC）tissues.Results Survivin expression tended to increase along with tumor progression（P<0.05）.Survivin protein was expressed in27of46patients with cervical squamous cell carcinoma（58.7%），and survivin expression was significantly associated with KI（P<0.05），survivin-positive SCC had higher KI than that of survivin-negative SCC（P<0.05）.Overexpression of survivin was related to the histological grade and clinical stage（P<0.05）.Conclusion The expression of survivin increased in cervical squa-mous cell carcinoma and related to the poor differentiation，higher proliferation potential，maybe involved in the onset and progression of SCC，survivin could be a new diagnostic/prognostic target in SCC.
【Key words】 cervical carcinoma survivin proliferation Ki-67
Survivin是近年新发现的凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成员之一，能抑制多种刺激诱导的细胞凋亡，与肿瘤的发生、发展有密切关系。肿瘤组织中survivin过度表达可克服G2/M期凋亡关卡，通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖，被认为是维持细胞增殖与凋亡平衡的界面分子 ［1］ 。有关survivin与宫颈癌增殖活性的相关性研究，国内外尚未见报道。因此，我们分析了survivin在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）及宫颈鳞癌组织中的表达及其与Ki-67指数（Ki-67Index，KI）的关系，以探讨survivin在宫颈鳞癌发生发展中的作用及临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本 选择2001年3月～2003年4月兰州医学院附属一院病理科经活检和手术切除宫颈组织标本蜡块84例，其中宫颈鳞癌46例，患者年龄27～72岁，平均47.2岁。参照国际妇产科联盟（FIGO）1995年修订的临床分期标准:Ⅰa期12例，Ⅰb期15例，Ⅱa期13例，Ⅱb期6例，所有病例术前均未行化疗或放疗。17例上皮内瘤样病变（CIN）组织，慢性宫颈炎组织21例。全部标本均经组织病理学确诊，10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片。
1.2 方法 采用免疫组化S-P法染色，按试剂盒说明方法操作。兔抗人survivin多克隆抗体为Neomarker公司产品，鼠抗人Ki-67单克隆抗体及S-P试剂盒购自福州迈新生物技术公司。采用高压锅法抗原修复，DAB显色，苏木素复染。用已知的阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为空白对照。
1.3 结果判断 以细胞质内出现棕黄色着色为survivin阳性标记。survivin标记的切片高倍镜下选取10个/HPE，每个视野计数100个细胞，每例阳性细胞数10%～50%为（+），50%～75%为（++），>75%为（+++）。Ki-67表达以细胞核有棕黄色颗粒为阳性，随机计数500个肿瘤细胞中Ki-67阳性细胞所占百分率为Ki-67指数（Ki-67Index，KI）以代表增殖活性。
1.4 统计学处理 数据用SPSS11.0统计软件包，χ 2 检验、t检验及Fisher精确概率法进行统计分析。
2 结果
2.1 survivin在不同宫颈组织的表达 survivin阳性反应主要定位于癌细胞质或膜上，偶可见胞核着色，阳性细胞呈弥漫性分布。从慢性宫颈炎组9.5%（2/21）、CIN组29.4%（5/17），到宫颈癌组58.7%（27/46），survivin阳性表达率呈逐渐增高趋势（P<0.05）。Ki-67主要表达在肿瘤细胞核内，呈棕黄色颗粒状。不同宫颈组织中Ki-67平均指数差异具有显著性（P<0.01），见表1。
表1 survivin、Ki-67在不同宫颈组织中的表达（略）注:与宫颈癌组比较，* P<0.05，** P<0.01
2.2 survivin表达、Ki-67指数与宫颈癌临床病理特征的相关性 survivin表达、Ki与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级显著相关（P<0.05），与患者年龄无关（P>0.05），见表2。27例survivin表达阳性的宫颈癌组织其Ki-67平均指数（43.1±6.4）%，明显高于19例survivin表达阴性的宫颈癌（22.3±7.5）%，P<0.05。
表2 survivin表达与宫颈癌临床病理参数的相关性（略）注: * P<0.05
3 讨论
细胞增殖/凋亡平衡紊乱与细胞的恶性转化和肿瘤的进展密切相关，宫颈癌的发生是宫颈癌细胞增生、凋亡异常共同作用的结果。近年新发现的survivin是一种结构独特的IAP家族成员，通过直接或间接抑制凋亡效应蛋白酶caspase-3、caspase-7活化来阻断由凋亡基因和化疗药物等引起的细胞凋亡的过程 ［1］ 。与其它IAP分子不同，sur-vivin还参与细胞周期的调控，调节细胞有丝分裂，促进细胞增殖，被认为是第一个将抑制细胞凋亡与细胞恶变直接联系起来的分子。研究表明survivin在大多数正常成人终末分化组织中不表达而在人类多种恶性肿瘤中广泛表达，并与肿瘤的恶性程度及患者的预后密切相关 ［2］ 。本文资料中，宫颈癌组、CIN组及慢性宫颈炎组survivin均呈阳性表达，21例慢性宫颈炎中有2例survivin呈弱阳性表达。Frost等 ［3］ 报道，在正常宫颈上皮细胞核survivin表达与HPV感染密切相关，认为survivin参与HPV介导的破坏正常鳞状上皮分化成熟。而Saitoh等 ［4］ 采用PCR-SSCP等方法在正常宫颈组织中没有检测到survivin的表达，与我们 的研究结果相反，可能是由于样本及采用的判断标准不同等因素所致。宫颈癌组织中survivin的阳性表达率为58.7%，与CIN和慢性宫颈炎组织比较差异有显著性（P<0.05），而且survivin表达与宫颈癌临床分期及分化程度有关，即临床分期愈晚，组织分级恶性程度越高，survivin阳性表达率愈高，与其它肿瘤中的研究结果基本一致。表明survivin基因在肿瘤中存在稳定表达，可能与宫颈癌发生发展过程中的细胞生物学转化有关，survivin基因表达预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后，在一定程度上反映了宫颈癌的恶性程度，具有一定的预后参考价值。Sui等 ［5］ 对卵巢上皮性癌的研究表明，survivin的表达与患者生存率显著负相关，可作为判断预后的独立因素。但本文未能分析sur-vivin基因表达对宫颈癌预后的影响，有必要作进一步的临床追踪研究。细胞周期调节蛋白Ki-67是一种存在于增殖细胞中的核抗原，能准确反映细胞或组织的增殖活性，可用于评估肿瘤的恶性潜能。我们的研究证实survivin表达与宫颈癌细胞Ki-67指数显著相关，survivin表达阳性的宫颈癌组织其Ki-67平均指数（43.1±6.4）%，明显高于survivin表达阴性宫颈癌组织（22.3±7.5）%（P<0.05）。提示survivin基因异常表达可能参与了宫颈癌细胞增殖的调控，具有促进宫颈癌细胞增殖的作用。survivin在细胞周期的G2/M期特异性表达 ［1］ ，这种细胞周期依赖性表达提示survivin可能通过影响细胞周期参与增殖调控。Suzuki等 ［6］ 研究发现survivin依赖细胞增殖信号介导而进入核内，与细胞周期依赖激酶Cdk4结合，使p21蛋白与Cdk4分离，分离后的p21蛋白与线粒体的前Caspase-3相互作用，抑制Fas介导的凋亡。survivin与Cdk4相互作用还可导致k2/CyclinE激活与Rb磷酸化，磷酸化的Rb蛋白失去对细胞生长的抑制作用，导致细胞失控性生长，打破了细胞增殖与凋亡平衡，终导致肿瘤的发生。
本研究结果显示，survivin在宫颈癌中异常表达，可能通过干扰肿瘤细胞凋亡和增殖平衡，促进宫颈癌的发生和进展。检测宫颈鳞癌中survivin基因表达对早期诊断宫颈癌及初步估计肿瘤的恶性潜能和预后有一定的应用价值。
参考文献
1 Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al.Control of apoptosis and mitotic spin-dle checkpoint by survivin.Nature，1998，396（6711）:580-584.
2 Ambrosini G，Adida C，Altieri DC.A novel anti-apoptosis gene，sur-vivin，expressed in cancer and lymphoma.Nat Med，1997，3:917-921.
3 Frost M，Jarboe EA，Orlicky D，et al.Immunohistochemical localization of survivin in benign cervical mucosa，cervical dysplasia，and invasive squamous cell carcinoma.Am Clin Pathol，2002，117（5）:738-744.
4 Saitoh Y，Yaginuma Y，Ishikawa M.Analysis of bcl-2，Bax and sur-vivin genes in uterine cancer.Int Oncol，1999，15（1）:137-141.
5 Sui L，Dong Y，Ohno M，et al.survivin expression and its correlation with cell proliferation and prognosis in epithelial tumor.Int Oncol，2002，21（2）:315-320.
6 Suzuki A，Ito T，Kawano H，et al.survivin initiates procaS-Pase3/p21complex formation as a result of interaction with Cdk4to resist Fas-mediated cell death.Oncogene，2000，19:1346-1353.
作者单位:730913甘肃省靖远煤业有限责任公司总医院