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Wu Huazhen，Zhao Xuan，Wang Baojin
Department of Gynecology，Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi563003.
【Abstract】 Objective To study the expression of VEGF（vascular endothelial growth factor，VEGF）and CD34in eutopic and ectopic endometrium of patients with endometriosis and relationship between VEGF and microvascular density（MVD）.Methods Thirty specimens of eutopic endometrium，thirty ectopic endometrium，fifteen normal human endometrium was stained with VEGF、CD34by immunohistochemistry method.Results The VEGF H-score of glanˉdular epithelium cell in ectopic endometrium were higher than that of eutopic endometrim（P<0.05）.Both were reˉmarkebly increased than that of normal endometrium（P<0.01）.There were related between VEGF and MVD.VEGF and MVD in ectopic endometrium showed no cyclic change.Conclusion There may be relationship between the deˉvelopment of endometriosis and VEGF through stimulating angiogenesis.
Key words endometriosis vascular endothelial growth factor microvascular density
子宫内膜异位症的发生与血管生成密切相关。异位内膜种植、生长均需要新生血管提供营养。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管形成的主要因子，具有内皮细胞特异性有丝分裂原作用 ［1］ 。CD34为血管内皮细胞的特异性标记物，采用CD34单抗进行免疫组化分析，特异性地标记血管内皮细胞，可测量子宫内膜组织中的微血管密度（microvessel density，MVD），对内膜组织中的新生血管进行量化，有利于更准确地评价微血管生成在内异症发生发展中的重要作用。本研究采用免疫组化S-P法检测内异症患者在位及异位内膜组织中的VEGF及微血管密度，探讨其与内异症发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 临床资料 收集2001年5月～2003年1月遵义医学院妇产科因子宫内膜异位症行子宫切除术或行腹腔镜手术，并经腹腔镜或病理学检查确诊为内异症的患者。取在位内膜30份（其中增生期17份，分泌期13份）;异位内膜30份（其中增生期19份，分泌期11份）作为研究对象;年龄36.5±5.5岁。正常子宫内膜15份为对照组（其中增生期8份，分泌期7份），年龄38±4.5岁。将内膜组织制作蜡块，连续切片厚度4～5μm。
1.2 VEGF及CD34测定 采用链霉素抗生物素蛋白—过氧化氢酶连接法（S-P）进行免疫组化染色测定。即用型免疫组化试剂盒为美国Sigma公司产品，购自晶美生物公司。即用型鼠抗人单克隆抗体及鼠抗人CD34单克隆抗体购自基因公司。以已知阳性乳腺癌组织为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作空白对照。
1.3 结果判定标准 （1）VEGF及CD34分别以内膜腺上皮细胞和血管内皮细胞胞浆及胞膜出现棕黄色颗粒为阳性判断标准。（2）在低倍视野内（100×）选取内膜组织血管内皮细胞染色清晰，背景对照良好的5个视野，然后在高倍视野内（400×）计数所有染色的微血管数，取其平均值作为该切片的微血管密度（MVD）。（3）采用免疫组化列线图评分方法，根据每张切片染色强度及范围综合评分，染色强度分为三组:淡黄色（+）;黄色（++）;棕黄色（+++）。染色范围分为三级:染色腺上皮细胞数<25%为（+），>50%为（+++），二者之间为（++），进行综合评分，每张切片记0～5分。结果判定在双盲下进行，每张切片由两位病理科医师分别计数。
1.4 统计学处理 所有数据应用SPSS软件进行分析，采用t检验和方差分析。
2 结果
2.1 VEGF及MVD 内异症组在位内膜及异位内膜腺上皮细胞在整个月经周期中均表达VEGF，并呈灶状分布;在间质细胞中只有散在表达，血管内皮细胞很少表达。在位内膜及异位内膜VEGF组织学评分与对照组相比差异均有显著性（P<0.01）。异位内膜与在位内膜相比差异亦有显著性（P<0.05）。内异症患者在位内膜组织VEGF呈周期性变化，分泌期高于增生期（P<0.05）。而异位内膜组织中VEGF表达增生期与分泌期无明显差异（P>0.05）。在位内膜及异位内膜均表达CD34（见表1），在位内膜及异位内膜 MVD与正常对照组相比，差异有非常显著性（P均<0.01）。而在位内膜呈周期性表达，分泌期高于增生期，而异位内膜与正常子宫内膜无周期性变化。
表1 不同月经周期子宫内膜腺上皮VEGF表达及内膜组织MVD比较（略）
注:同组内膜增生期与分泌期比较 ˇ P<0.05;与正常内膜比较 △ P<0.01;异位内膜与在位内膜比较 ▲ P<0.01
2.2 在位内膜及异位内膜组织VEGF表达与MVD相关性 在位内膜及异位内膜组织VEGF的表达强度与MVD呈显著正相关（r=0.892P<0.01;r=0.862P<0.01）。
3 讨论
3.1 VEGF在内异症在位、异位内膜组织中的表达 血管生成与内异症的发生、发展、演变和预后密切相关。近年来的研究表明，异位病灶周围间质的毛细血管数量及面积均有明显提高 ［2］ 。许多生长因子如FGF、EGF等都有促进血管生成的作用，但只有VEGF是特异性的内皮细胞有丝分裂原，可刺激血管内皮细胞增殖，诱导其迁移和形成管腔样结构，并可增加血管通透性 ［1］ 。VEGF可直接诱导肿瘤血管的形成 ［3］ 。由于内异症的广泛种植和治疗后易复发的特性与恶性肿瘤极为相似，故本研究采用免疫组化方法检测内异症患者在位及异位内膜中VEGF的表达与内异症的关系，结果发现患者在位及异位内膜组织中的表达均明显高于正常对照组（P<0.01），提示无论是在位内膜还是异位内膜均具有较强的血管生成活性，可使内膜附着在异位后，在高水平的VEGF作用下，促进腹膜下血管网络增加，利于种植和生长。本研究结果还显示VEGF主要表达于腺上皮细胞胞浆，而在间质细胞中散在表达，血管内皮细胞极少量表达。提示VEGF可以通过自分泌和旁分泌的方式，刺激毛细血管增生，为异位内膜的生长提供赖以生存的物质基础，促进异位内膜增殖和浸润入盆腔腹膜内组织，形成腹腔的异位病灶，接受雌、孕激素的调节，出现周期性的改变及剥落、出血等类似在位内膜的表现。另外在位内膜VEGF表达分泌期明显高于增生期，说明随经血反流到腹腔中的在位内膜中血管生成活性较高，这更有利于这些内膜腺体能很快在腹膜及其它部位形成新生血管而种植生长。异位内膜组织中增生期与分泌期的表达无明显变化，提示子宫内膜异位种植后生理特点有所改变，可能与异位内膜组织中所含雌孕激素受体数量不随月经周期改变有关 ［4］ 。
3.2 内膜组织中CD34及MVD检测的意义 异位内膜成功种植生长必须依赖足够的血运，通过对这些微血管量化，即可更好地反应内异症的血管生成状况。CD34显示血管内皮细胞特异性最高，优于其他内皮细胞标记物 ［5］ ，并可测 量组织中的微血管密度（MVD），它在组织中的表达反映了该组织的血管生成活性。本研究采用免疫组化SP法检测内异症患者在位及异位内膜组织中的CD34表达，结果MVD明显高于正常对照组（P<0.01），说明内异症患者的子宫内膜组织血运丰富，在异常局部位置也有较强的增生种植和存活能力，为移位内膜成功种植提供更充足的营养。内异症在位内膜MVD有周期性变化，分泌期高于增生期，提示一旦这种内膜脱落逆流入腹腔，则具更强的种植、生长能力。而异位内膜并无明显周期性变化，很可能与它本身生长环境及自分泌调节等有关。总之，内异症患者在位及异位内膜组织中VEGF表达增强、MVD增加，与正常内膜不同，提示内异症患者的发病与内膜VEGF及微血管的异常表达有密切关系。
该研究结果还提示，内异症内膜组织中VEGF表达较强的区域，MVD明显增高，存在明显的正相关性，进一步支持了血管生成参与内异症的发生发展。VEGF是通过与血管内皮细胞上特异性的受体结合发挥作用的。VEGF含量的增高与子宫内膜血管增多可能是内异症异位内膜成功种植和生长的决定因素。因此对内异症血管生成变化的研究，有可能通过针对VEGF的治疗，发展对内异症的一种新的治疗方案用于临床。
参考文献
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作者单位:563003贵州省遵义医学院附院妇产科