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【摘要】 目的 为了寻找一种钩端螺旋体病紧急疫情的应急控制措施，为口服强力霉素预防钩端螺旋体病提供科学依据，我们特开展了强力霉素对钩端螺旋体抑杀效果实验研究。方法 将15群15型钩端螺旋体标准菌株各个菌型分别接种于含有不同浓度强力霉素培养基中，经培养7天后于暗视野显微镜下观察其形态、生长情况并计数，对视野下钩端螺旋体处于僵硬、变形等且未见活动再转种于不含强力霉素的培养基中继续培养7天，再观察其形态、生长情况并计数。结果 强力霉素对钩端螺旋体有较强的抑杀作用，其最小抑菌浓度与最小杀菌浓度基本一致，为2～4μg/ml;体外实验结果说明当培养基中强力霉素含量为0.25μg/ml时对钩端螺旋体仍有较好杀灭效果。结论 常规口服强力霉素能够起到预防钩端螺旋体病作用，至少3个生物半衰期内（即36～66h）人体血液中的药物浓度对钩端螺旋体亦有杀灭效果。
关键词 强力霉素 钩端螺旋体 抑杀 研究
Experimental researal on doxycyclinum’s inhibition on leptospira
Mei Jiamo，Xu Jianmin，Zhang Chengfeng，et al.
Jiangxi Provincial Center for Disease Prevention and Control，Nanchang330029.
【Abstract】 Objective In order to find a quick method to control the disaster of Leptospirosis and provide a scientific evidence of oral Doxycyclinum’s efficacy on Leptospirosis prevention，we did experimental researches of Doxycyclinum’s inhibition on Leptospira.Methods All kinds of standard bacterium of Leptospira in type15groups15were cultured in cultural solutions containing different concentrations of Doxycyclinum.We observed their formation and culturing status and counted them under dark microscope after seven days.Those Leptospira which was stiff and deformed and without moving were transferred to another cultural solutions without Doxycyclinum and cultured for anˉother7days，and we observed their formation and culturing status and counted them again.Results in the cultural solutions with Doxycyclinum has a good inhibition on Leptospira.The lowest drug concentration of inhibition is almost the same as the lowest concentration of killing bacteria，which is2～4μg/ml.External experiments showthat there is a moderate efficacy to killing Leptospira when the concentration of Doxycyclinum is only0.25μg/ml。Conclusion The conclusion is that Doxycyclinum in oral can prevent the Leptospirosis.At least the drug concentration in human blood has enough efficacy to kill Leptospira within three biological half-lives（36～66hours）.
Key words doxycyclinum leptospirosis MIC MBC
钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体引起的一种急性传染病，由于钩端螺旋体分布范围广，流行菌型复杂，影响流行因素众多 ［1］ ，预防和预测疫情十分困难。为有效保障劳动人民身体健康，寻找一种紧急疫情的应急控制措施，我们特开展了强力霉素对钩端螺旋体抑杀效果实验研究，现将有关情况报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料 （1）强力霉素:常州制药三厂生产（批号00060010.1g/片，10万U）;（2）钩端螺旋体菌株:北京国家药品生物制品检定所提供15群15型标准菌株;（3）培养基:Korthof培养基、磷酸盐缓冲液。
1.2 方法 将准备好的15群15型标准菌株各个菌型分别接种于含有不同浓度强力霉素的培养基中进行培养，7天后于暗视野显微镜下观察其形态、生长情况并计数，对视野下钩端螺旋体处于僵硬、变形等且未见活动再转种于不含 ˇ 基金项目:国家“洪涝灾害对钩体病流行因素的影响及防治对策研究”重点攻关课题（WKJ-1999-01-01）强力霉素的培养基中继续培养7天，再观察其形态、生长情况并计数 ［2］ 。
1.2.1 钩端螺旋体最适条件下研究 （1）先将强力霉素片研磨成粉状，溶解于Korthof培养基中，使其最初浓度为8μg/ml，然后进行倍比稀释，至最终浓度为0.25μg/ml，再用玻璃试管分装（每管5ml）备用;（2）将在暗视野显微镜下计数达（1～5）×10 7 条/ml的15群15型钩端螺旋体标准菌株分别接种于不同强力霉素药物浓度的试管中，每管接种量为0.3ml，每型每个浓度同时接种3管，同时各种1管不含强力霉素的空白对照;（3）将接种好钩端螺旋体菌株的所有试管置28℃培养7天后于暗视野显微镜下观察结果，将暗视野显微镜下钩端螺旋体处于僵硬、变形等且未见活动的钩端螺旋体试管记为抑制状态（以“-”表示），有活动钩端螺旋体的试管记为“+”。（4）将处抑制状态的试管中培养物每管再转种于3管不含强力霉素的Korthof培养基中，每管接种量为0.5ml，继续置28℃培养7天后于暗视野显微镜下观察其中钩端螺旋体生长情况。
1.2.2 模拟人体条件（体外实验）研究 选用15群15型标准菌株中的黄疸出血群赖型为实验菌株，将上述实验中的Korthof培养基改为磷酸盐缓冲液，培养温度由28℃改为37℃，接种菌量由每管0.3ml改为0.1ml、0.2ml、0.3ml3个不同接种量，其它实验方法同上，观察在模拟人体条件下强力霉素对钩端螺旋体作用效果。
2 结果
2.1 强力霉素对钩端螺旋体在最适生长条件下抑杀效果
研究 结果见表1。由表1可见，强力霉素对钩端螺旋体有 较强抑杀作用，其最小抑菌浓度与最小杀菌浓度基本一致;不同群型之间差异并不明显，其中黄疸出血群赖型、爪哇群爪哇型、犬群犬型、拜伦群拜伦型、澳洲群澳洲型、赛罗群乌尔夫型、塔拉索夫群塔拉索夫型、曼耗群清水型最小杀菌浓度为2μg/ml，致热群致热型、秋季群秋季型、波摩那群波摩那型、流感伤寒群临海型、七日热群七日热型、明尼群明尼型、巴达维亚群巴叶赞型最小杀菌浓度为4μg/ml。
表1 强力霉素对钩端螺旋体在最适生长条件下抑杀效果实验结果血清型(略)
模拟人体条件（体外实验）研究结果 结果见表2。由表2可见，当培养基中强力霉素含量为0.25μg/ml时，对钩端螺旋体仍有较好的杀灭效果。
表2 强力霉素对钩端螺旋体黄疸出血群赖型体外作用结果强力霉素含量（略）
3.讨论
强力霉素是四环素类广谱抗菌素，主要用于革兰阳性菌、阴性菌、立克次体、支原体等感染，对钩端螺旋体有抑制作用，高浓度时具有杀灭效果 ［3］ 。本实验结果表明，强力霉素对钩端螺旋体标准菌株各个群中的诸型均有较好的抑杀效果，其最低抑菌、杀菌浓度为2～4μg/ml，各型之间差异无显著性;体外实验结果说明，当培养基中强力霉素含为0.25μg/ml时，对黄疸出血群赖型也能达到杀菌效果。按照常规服药方式，强力霉素在人体内血液高峰浓度可达1.8～2.9mg/L，生物半衰期为12～22h ［4］ ，因此可在认为服用强力霉素能够起到预防钩端螺旋体的作用，在人体内，至少在3个生物半衰期内（即33～66h）血液中的药物浓度对钩端螺旋体亦有杀灭效果。
钩端螺旋体最适生长条件下最低抑菌浓度与最低杀菌浓度一致，但体外实验结果表明强力霉素对钩端螺旋体黄疸出血群赖型的最低抑菌浓度为0.125μg/ml，最低杀菌浓度为0.25μg/ml，可能是强力霉素在水中不稳定，最初药物浓度条件下不能完全杀死的钩端螺旋体将随着药物浓度下降而继续成活。
参考文献
1 时曼华，于恩庶.中国钩端螺旋体病地理流行病学研究，香港:亚洲医学出版社，2000，10-13.
2 S.Fainey.钩端螺旋体病防治指南，北京:人民卫生出版社，1985，09-210. 3 中山医学院.药理学，北京:人民卫生出版社，1981，357-358.4 国家药典委员会.临床用药须知，第3版，北京:化学工业出版社，2001，667.
（收稿日期:2004-05-16） （编辑香 江）
作者单位:330029江西省疾病预防控制中心