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【摘要】 目的 考察甘芪益肾冻干粉对阿霉素型肾病综合征模型大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、胆固醇、甘油三酯的影响，观察其对实验性大鼠肾病综合征的治疗作用。方法 用阿霉素制备大鼠肾病综合征模型，对各组大鼠分别给予生理盐水、强的松以及不同剂量甘芪益肾冻干粉，于给药后不同时间测定大鼠24h尿量、总蛋白量，实验结束时测定各组大鼠血浆白蛋白、胆固醇、甘油三酯含量。结果 给予冻干粉5周后各治疗组24h总尿量比模型组明显提高（P＜0.05）；24h尿蛋白量在给药后2、3、4周显著下降（P＜0.05）；其作用强度有明显剂量依赖关系，但低剂量组治疗5周后24h尿蛋白量与模型组无明显差异（P＞0.05）；甘芪益肾冻干粉治疗5周可明显升高模型大鼠血浆白蛋白（P＜0.05），降低胆固醇和甘油三酯水平（P＜0.05）；而强的松在升高模型大鼠血浆白蛋白、降低胆固醇（P＜0.05）的同时，引起甘油三酯水平的显著上升（P＜0.05）。结论 甘芪益肾冻干粉可显著改善实验性肾病综合征大鼠各项生化指标，对肾病综合征有确切的治疗作用。
【关键词】 甘芪益肾冻干粉；肾病综合征；实验
Therapeutic effect of ganqiyishen powder on rats with experimental nephrotic syndrome
ZHAO Ai-guo, LAI Xiao-ping, YU Feng,et al.
New Drug R&D Center， Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510405，China
【Abstract】 Objective To evaluate the therapeutic effect of Ganqiyishen powder on rat with experimental nephrotic syndrome according to the levels of urine protein, plasma albumin, cholesterol and triglyceride in pathological modeled animals.Methods Rat’s nephrotic syndrome model were prepared with adriamycin infusion through tail vein, saline or prednisone or different dosage of Ganqiyishen powder was administrated to the rats after the nephrotic syndrome model was prepared successfully, total volume of urine excreted in 24h was measured after treated with different therapeutic agents at the 2nd and 5th weekend, and the urine protein level at the 2nd, 3rd, 4th and 5th weekend was assayed respectively Plasma albumin, cholesterol and triglyceride were analyzed with full automatic blood bio-chem analyzer. Therapeutic effect of Ganqiyishen powder was evaluated based upon the results mentioned above. Results Total 24h urine volume were elevated after treatment, the difference between the powder treated groups and the model group was significant (P＜0.05), urine protein in powder treated groups were decreased at the 2nd, 3rd, 4th and 5th weekend compared with those of model group (P＜0.05). Having been treated with Ganqiyishen powder for 5wk, plasma albumin was elevated (P＜0.05) but cholesterol and triglyceride were decreased obviously (P＜0.05). As to the prednisone treated group, both plasma albumin and triglyceride were elevated (P＜0.05), while the cholesterol was decreased significantly (P＜0.05).Conclusion Ganqiyishen powder could improve the biochemistry index of nephrotic syndrome rats, and the therapeutic effect of the powder on rat’s nephrotic syndrome was obvious.
【Key words】 ganqiyishen powder; nephrotic syndrome; experiment
甘芪益肾水煎剂已在临床应用十余年，对肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）的临床治愈率高达90%以上，疗效显著。特别有意义的是，其中多数患者为难治性NS，因此是一种有广泛应用前景的潜在NS治疗药物。早期研究证实，甘芪益肾水煎剂的主要有效成分为生物碱类物质，本实验的目的在于考察由总生物碱制备的冻干粉对肾病综合征模型大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、胆固醇以及甘油三酯等生化指标的影响，观察其对实验性大鼠NS的治疗作用，为甘芪益肾冻干粉的临床应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 药物 醋酸强的松片，广东华南制药厂，规格5mg/片，批号：020716；盐酸阿霉素（Adriamycin, ADR），日本美露香株式会社，规格10mg/支，批号：0109E1；甘芪益肾冻干粉：解放军150医院提供。
1.2 动物 雄性健康SD大鼠，体重170±30g，购自洛阳医学高等专科学校实验动物中心，标准饲料适应环境1周后供实验用。
1.3 NS模型制作 阿霉素型大鼠NS模型参照文献［1］制作。具体方法：ADR7.5mg/kg分2次给予清醒状态下SD大鼠，以尾静脉注射方式给药。实验d1注射ADR 4mg/kg，d8再次注射ADR 3.5mg/kg，对照组用相同方法注射相应剂量生理盐水。
1.4 实验分组及给药 造模大鼠于第2次给予ADR后，随机分为6组，每组10只。分别为：（1）空白对照组；（2）模型组；（3）强的松给药组（20μg/100g）；（4）甘芪益肾冻干粉高剂量组（2.0mg/100g）；（5）甘芪益肾冻干粉中剂量组（1.0mg/100g）；（6）甘芪益肾冻干粉低剂量组（0.5mg/100g）。受试动物造模后，各组按上述剂量每天灌胃给药1次，空白组和模型组给予等量生理盐水，连续给药4周，整个实验过程为5周。
1.5 观察指标及测定方法
1.5.1 一般情况 观察大鼠的精神状况、体重改变、体毛、饮水、活动、水肿情况以及测定24h总尿量。
1.5.2 尿液检查 24h尿蛋白测定：各组大鼠分别于实验第2、3、4、5周置代谢笼中，收集24h尿液，考马斯亮蓝比色法测定尿蛋白量。
1.5.3 血液检查 实验第5周末，在乙醚麻醉状态下，从大鼠眼静脉丛取血，置全自动血液分析仪（CE-LL-DYN3500型，雅培公司）测定血浆白蛋白、总胆固醇、甘油三酯水平。
1.6 数据处理 所有实验数据均以x±s表示，SPSS11.0统计软件处理数据，方差分析比较组间差异，P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 一般情况观察 第1周注射ADR后，除空白对照组外，其余各组动物均有摄食减少、体重下降、腹泻、喜蜷缩、体毛凌乱无光泽等表现；实验第3周，模型组与各治疗组出现不同程度水肿，以四肢水肿为明显症状，模型组2例出现明显腹水；实验第4周，模型组水肿明显，腹水发生率上升，水肿率70%，各给药治疗组水肿程度明显轻于模型组；实验第5周，模型组水肿无明显改善，甘芪益肾冻干粉高、中剂量组及强的松治疗组水肿消除明显。各组造模前以及给药后第2、5周末24h尿量情况见表1。
2.2 尿蛋白检查 各组受试动物在给药不同时间收集尿液，各组24h尿蛋白量见表2。表1 各组受试动物造模前以及给药后第2、5周末24h尿量情况 (略）注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01表2 给药第2、3、4、5周末各组大鼠24h尿蛋白量 （略）注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与强的松组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01由表2结果可以看出，给药后第2周末，各造模组大鼠出现大量蛋白尿，与空白对照组相比变化十分明显（P＜0.01），显示造模成功。强的松治疗组24h尿蛋白量明显低于模型组（P＜0.01）以及甘芪益肾冻干粉各剂量治疗组（P＜0.05），显示强的松对大鼠肾病综合征有较好的治疗作用，起效迅速，而冻干粉各治疗组在给药后第2周末尿蛋白量与模型组无明显差异，显示药物起效缓慢，短时间治疗作用不明显。给药后第3周末，各给药组尿蛋白量均显著低于模型组（P＜0.01），冻干粉高剂量组尿蛋白量与强的松治疗组相当，而中、低剂量组尿蛋白量明显高于强的松治疗组（P＜0.01），显示强的松和高剂量冻干粉降低尿蛋白的作用最好。给药后第4周末，各治疗组尿蛋白量显著低于模型组，各药物治疗效果与第3周末显示结果相似。给药后第5周末，冻干粉高、中剂量和强的松组显示较好的治疗作用，无组间差异，尿蛋白量均明显低于模型组（P＜0.01），可见，长时间给药后，强的松对冻干粉的治疗优势已经不明显，但低剂量冻干粉已经显示不出治疗作用（P＞0.05），这可能与NS大鼠肾的进行性病理改变有关。
2.3 血液检查 第5周末实验结束时，眼静脉丛取血测定各组大鼠血浆白蛋白、胆固醇、甘油三酯水平，结果见表3表3 实验第5周末各组大鼠血浆白蛋白、胆固醇、甘油三酯水平 （略）注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与强的松组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01实验结果显示，各给药治疗组均可显著提高模型大鼠血浆白蛋白水平（P＜0.05），冻干粉高、中剂量组升高血浆白蛋白的作用与强的松差异无显著性，冻干粉低剂量组作用稍差；但治疗5周后，各组血浆白蛋白水平与空白对照组相比差异有显著性，提示本实验中药物治疗并不能完全回复受损的肾功能。给药组模型大鼠胆固醇的影响与对血浆白蛋白的影响相似，值得注意的是，冻干粉高剂量组的降低胆固醇作用优于强的松，强的松对胆固醇的影响仅与中、低剂量冻干粉相当（P＞0.05）。另外，实验结果还显示，给予药物治疗5周后，冻干粉各剂量组血浆甘油三酯水平显著下降，与模型组相比差异有显著性（P＜0.01），其中高剂量组甘油三酯水平与空白对照组相当，作用比较突出；而强的松在治疗5周后，可引起大鼠血浆甘油三酯水平上升，其水平甚至高于模型组（P＜0.05），提示强的松这一作用有可能不利于NS的预后。
3 讨论
NS是一组临床征候相同的综合征，目前多认为与机体免疫功能异常有关［2］。血液生化指标的改变主要体现在血浆蛋白水平显著下降，其中白蛋白下降尤其明显，同时，伴有血浆胆固醇和甘油三酯及低密度脂蛋白水平升高。发生上述改变的机制目前认为是由于免疫功能异常导致肾小球基底膜通透性增加，大量血浆蛋白（主要是白蛋白）从肾小球滤出，造成大量蛋白尿和低蛋白血症，水肿的发生与血浆蛋白水平低下引致的胶体渗透压下降以及继发性水、钠潴留密切相关；低蛋白血症亦可导致肝脏合成胆固醇、脂蛋白能力改变并进而影响脂质代谢［3，4］，脂质代谢紊乱又可加剧肾损伤，促进肾小球系膜细胞增殖，系膜基质增加，最终导致肾小球硬化［5］。
因此，针对NS的发病原因和临床表现，临床常用降低尿蛋白、降血脂、扩血管、免疫抑制以及利尿等措施综合治疗，治疗药物以糖皮质激素、免疫抑制剂、细胞毒药物、抗凝药以及利尿药为主［6］，临床实践显示，这些药物近期疗效较好，但对部分患者治疗无效，或造成激素依赖，或反复发作，或不能耐受而无法继续用药。最终成为难治性NS，约占原发性NS的30%～50%［7］，因此，NS的治疗需要其他替代药物或辅助治疗药物，实践证明，中医药在NS的治疗——特别是难治性NS的治疗方面有独特优势［7，8］。
甘芪益肾水煎剂由4味中药组方，在临床应用多年，对NS的临床治愈率高达90%以上，特别是对难治性NS疗效十分显著。笔者提取该水煎剂的生物碱类物质制成甘芪益肾冻干粉，研究显示，甘芪益肾冻干粉可显著降低NS模型大鼠尿蛋白水平，增加总尿量，同时提高血浆白蛋白水平并降低血浆胆固醇、甘油三酯水平，其治疗作用基本与NS常用治疗药物强的松相当。同时，实验中发现强的松可引起血浆甘油三酯水平异常增高，而甘芪益肾冻干粉可降低血浆甘油三酯水平，高剂量冻干粉甚至可使NS模型大鼠的甘油三酯水平接近空白对照的健康大鼠。因此，甘芪益肾产生良好的临床疗效可能与其对影响NS病程进展的多种因素的调节作用相关，其综合性的调节作用在临床NS的治疗中可能更有优势，是一种潜在的优良NS治疗药物，有进一步开发和研究的巨大潜力，但其作用机制有待进一步研究，以避免与其他药物伍用时可能产生的不良反应。
【参考文献】
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作者单位： 1 510405 广东广州，广州中医药大学新药开发研究中心
2 471031 河南洛阳，解放军第150医院药剂科
(编辑：罗 彬)